Способ проведения иммуноанализа

СОКЕ СО 8 ЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 17381 А и 33/53 ОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙГО ИЗОБРЕТЕНИЯМ ИПРИ ГКНТ СССР МИТЕТ ОТКРЫТИЯАНИЕ И Н К АВТОРСКОМУ А,Н. Бахамикробиоло ономарева ов 9 УНОАНАЛИЭА к иммунолобыть испольшениного нныепыта/ванииарбоновых 1(71) Институт биохимии ими Институт эпидемиологиигии им. Н.Ф. Гамалеи(54) СПОСОБ ПРОВЕДЕНИЯ ИММ(57) Изобретение относитсгическомуанализу и может Изобретение относится к иммуноанализу, в частности к способам проведения диссоционно-усиленного лантанидного Флуоресцентного иммуноанализа,и может быть использовано в медицинебиологии, "сельском хозяйстве.Целью изобретения является повые чувствительности диссоциоиноенного лантанидного флуоресцентиммуноанализа,П р и м е р 1, Определение моноклональных антиинсулиновых антител.На полистироловые планшеты адсорбируют инсулин (10 мкг/мл) из 0,1 Мкароонатного буфера, рН 9,2 в течение ночи при комнатной температуре.Трижды отмывают раствором (9 г/лИаС 1 и 0,5 г/л ЯаЯО,). Насыщают поверхность планшеты бычьим сывороточным альбумином (5 г/л) из О, 1 М карбонатного буфера, рН 9,2 - 2 ч при370 С. После 3-кратного отмывания зовано в биологии, медицине и сельскомхозяйстве для определения биологически активных веществ. Целью изобретения является повышение чувствитель"ности диссоционно"усиленного лантанидного флуоресцентного иммуноаналиэа. Для этого твердая фаза предварительно обрабатывается перед внесениемспецифического коньюгата антителаили антигена, меченного хелатом лантанида, буферным раствором, содержащим поликарбоновую кислоту (10 ф10 М/л) и ионы кальция (1010М/л) . 2 табл. наносят моноклональные антиинсулиновые антитела Е(2,5 мкг/мл) вбуфере - 50 М/л трис-НС 1 (рН 7,7 при 25 С), 9 г/л НаС 1, 1 ОО мкл/л Твина, 10М/л хлорида кальция и 10 з этилендиаминтетрауксуснойо кислоты, инкубируют 30 мин при 37 С Лунки трижды промывают и вносят меченные хелатом европия кроличьи антитела против глобулинов мьпдио(КАИ - Еи), инкубируют 1 ч при 37 С После 3-кратной отмывки в лунки добавляется усиливающий раствор фдикетон), перемешивают на шенкере в течение 10 мин, затеи измеряют флуо ресценцию европия на "Агсцв 1230" флуорометре (ЬКВ).В табл. 1 представлены да ВАЧ-Ец по отношению сигнал о сигнал контроля при использо ,различных концентраций полик кислот и хлорида кальция.1617381 Формула изобретения 20 Та блицаКонцентрацияполикарбоновых кислот и хлорида кальция, М/л сигнал опыта Отношение при ВАМ-Еа сигнал контроля 1 мкг на лунку6 2 0,66 0,22 0,073 0,024 103 10-3 10 .10-3 10 з 10"2 10 6 10 3 16,3 81,3 05,8 82,6 77,9 25,7 17;6 65,6 /5,3 70,5 47 16,3 16,7 62,2 /4,1 66,8 55,2 20,4 ЭДТАСаС 1ДТРАСЯС 1ЭДТАСаС 1 тЭДТАСяС 1 1.8,1 52,4 64,3 48,8 29,8 14,Таблица 2 6 2 0,66 0,22 0,073 0,024 ВАМ-Еи, мкгна лунку 16,9 68,7 76,4 71,5 48,4 16,4Сигнал контроля Составитель А, ГорбатовТехред Л.Сердюкова Корректор М. Пожо Редактор М. Циткина Заказ 4117 Тираж 511 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва ЖРяушская няб., д. 4/5 Производственно издЯтельский комбинат ПатентГ,ужгород улГЯГЯрнна 101 П р и м е р 2. Способ осуществляют согласно примеру 1, но в качестве соли кальция используют 10М нитрата кальция, а в качестве поликарбоновой кислоты " 10 М циклогенсандиаминтетрауксусную кислоту.Данные йо осуществлению примера 2 представлены в табл. 2.Таким образом, предварительная обработка твердой Фазы поликарбоновой кислотой и солью кальция перед нанесением специфического коньюгата позволяет увеличить соотношение сигнал опыта в 1,5-2 раза и, слесигнал крнтролядовательно, повысить чувствительность определения при проведении иммуноанализа. Способ проведения иммуноанализявключающий приготовление иммуносорбента, инкубацию иммуносорбента санализируемыми пробами, внесениеспециФического конъюгата, антигенаили антитела, меченного хелатомлантанида, добавление усиливающегораствора, считывание результатов,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения чувствительности,инкубацию проводят в буФерном растворе, содержащем ионы кальция иполикарбоновую кислоту в концелтрации 10-2 - 10 М/л и 10"-10 "М,л.соответственно,