Способ определения цианидов в сточных водах

. И ЗЗ/1 С 51) 5 АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ нологии, санитарной гидробиологии,предназначается для контроля за объектами окружающей среды, в частностидпя определения цианидов в природныхи сточных водах, Целью изобретенияявляется упрощение и повьппение чувствительности способа при определении содержания цианидов. Способ основан на определении активности специфического фермента -цианоаланинсин-,тазы в водных растениях, произрастающих в загрязненных цианидами водоемах. Активность цианоаланинсинтазыопределяют фотоколориметрически сацетатом свинца при и-фенилендиамином соляно-кислым. Способ позволяетповысить специфичность и избирательность определения, сократить числоопераций. 1 табл. 4421244/30-13 06.05.88 07.07.90. Бюл Иркутский пол 21) 22) 46) 71) тут 72) 53) Р 25 ехнический инс детелъатво СССР 1 11 7/48, 1983. ник по физиологи Наукова думка,Авторское св 09622, кй, С раткий справо ений. - Киев:с. 436, торское свид 10557, кл. С ас 97 тельство СССР1 Н 33/18, 198 АвР 10 дорослей), рН а зависимость ся ат тс одяще на грам ение нита аетс зобре емп ы среды,уравнение логии и описыв азна аю ми окр сод ерж точных 7 = 2,01 + 0,07 Х 1 + 0,09 Х -013 Хэ О 5 Х, - 0,16 Х - 0 1 бХза ная степ ния является упрощвствительности сп Целью изобретеиие и повьппение чу оба. среды в водоеру , можнонида.Способ осущ аличие вляют следую степени иаланинсинастений. разом.Водоросликубируют на рцентрации 0,51-5 суток из0,0625 - 31,2 дук таз Этоноал харовые) инанида в кон ример,орах ц50 мг/ ств синтез цианида.висит от в течени ета 8 гг. По л или дозь рошествии 5 МА ианида,п ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И (ЛНРЫТИЯПРИ ГННТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИАНИДОВ ВСТОЧНЫХ ВОДАХ(57) Изобретение относится к биотехотносится к биотехноной гидробиологиидля контроля за объекй среды, в частностицианидов в природных Цель достигается тем, индов определяется по ции активности -циан ы КФ 4.4.1.9) водных т фермент катализируе анина из цистеина и Степень индукции ЦАС ы цианида (количества ь индукции У, условияе - рН Х 1 и температуассчитать Х - дозу циавремени навеску водорослей растирают добавляют трис-соляно-кислый буфер, отделяют жидкую фракцию и после центрифугирования определяют в ней активность ЦАС по одной из методик, рассчи - тывают активность цианоаланинсинтазыи строят зависимость степени индукцииЦАС от концентрации цианида (откладывают на оси абсцисс концентрацию цианида, мг/л, или дозу, мг/г, на осиординат - степень индукции ЦАС).П р и м е р 1. Для определенияцианидов в районе действия сточныхвод в водоеме отбирают пробу водорослей, для сравнения - пробу тех жерастений в чистом районе. Берут среднюю пробу из нескольких растений, инавеску 5 г растирают в фарфоровойступке на холоду, добавляют 10 мл 200,2 И трис - соляно-кислого буферарН 8,85, процеживают через четыреслоя марли и центрифугируют 5 мин при12000 об/мин. Надосадочную жидкостьиспользуют для определения активности.Активность определяют спектрофотометрически с ацетатом свинца. Дляэтого к 1,2 мл 0,2 И трис-ацетатногобуфера рН 9,25 приливают 0,2 мл ферментного, экстракта, 0,2 мл 0,1 Мцистеина, 0,2 мл 0,05 М цианида натрия, 0,2 мл 0,002 М ацетата свинца.Смесь встряхивают и инкубируют 30 минпри 37 С. Затем измеряют оптическуюплотность при 360 нм против контроляв кюветах толщиной 0,5 см,Активность рассчитывают по формуле А = 158 Р,. где Р - оптическая плотность, 158 - пересчетный коэффициентдпя выражения активности в нмоль-в мин млПолученные значения активностисравнивают с контрольным у растенийиз чистого района , рассчитывают отА опыт.ношение 002 и по калиброкойтр,вочной кривой находят концентрациюцианида.П р и м е р 2. Пробоподготовкааналогична примеру 1. Активность определяют по количеству образовавшегося метиленовогб голубого. Для этогок пробе 1,2 мл 200 мкмоль/л трис в соляно-кислого буфера добавляют5 мкмоль/л цистеина, 5 мкмоль/л цианида и 0,2 мл ферментного экстракта.Пробу инкубируют при 37 С в течение10 мин и затем добавляют 0,5 мл0,02 моль/л соляно-кислого диметили-фенилендиамина в 7,2 и. НС 1 и0,5 мл 0,03 моль/л ГеС 1 в 1,2 н, НС 1и через 20 мин определяют образовавшийся метиленовый голубой по поглощению при 650 нм. Активность рассчитывают по формуле А = 0,65 Р, где Р -оптическая плотность, 0,65 пересчетньй коэффициент на Н Б (мкмоль/л).Дальнейший пересчет как в примере 1,Результаты определения цианидапредлагаемым и известным способамиприводятся в таблице,Найдено цианида, мг/л,по способуВведено, мг/л предлагаемому известному 0)0-0,0050,05-0,008О,О+0,090,48+.0,0091 э 1+Оэ 95,1 - 0,19,8 фО19,9+0,2 0,01 0,05 0,1 0,5 1,0 5,0 10,0 20,0 0,094 0,009 0,47-0,003 0,98-0,06 5,30-0105 0,1+0,02 20,6+0,04 Формула изобретения Способ определения цианидов в сточных водах, включающий отбор пробы воды, инкубирование в ней водных растений с последующим определением активности фермента, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью упрощения и повышения чувствительности способа, из ферментов выбирают-цианоаланин- синтазу, используя в качестве субстратов цистеин и цианид, ацетат свинца и и-фенилдиамин соляно-кислый, а активность определяют путем колориметрирования при 360, 650 нм.