Способ получения иммобилизованных ферментов

(51)5 С 12 И 11/04, 11 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИ%ПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ СВИДЕТЕЛЬСТВ У К АВТОРСК(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯНЫХ ФЕРМЕНТОВ(57) Изобретение относится к способуиммобилизации ферментов и может найти применение при изготовлении препа Изобретение относится к способу иммобилизации ферментов и может найти широкое применение при изготовлении препаратов иммобилизованных ферментов.Цель изобретения - повышение термостабильности целевого продукта.Существенным при осуществлении способа являются исходные компоненты, а также подобранное соотношение компонентов при связывании. П р и м е р, 5-6 ч. суль целлюлозы (Ц) в виде папки, кусочками 2 х 2 см, помещают донную колбу, заливают 30-4 тилацетамлда (ИМАЯ) и кипят 2 ратов иммобилизованных ферментов дпя использования их в медицине. Цель изобретения - повышение термостабильности целевого продукта. Способ включает приготовление полимерного раствора, введение Фермента с последующим осаждением дисперсии, при этом целлюлозу обрабатывают раствором хлорида лития е диметилацетамиде при соотношении целлюлозы, хлорида лития и диметилацетамида (5-6):(6,5-9):(85-88,5), добавленис фермента осуществляют в виде дисперсии в диметилзцетамиде при соотношении компонентов фермента и диметилацетамида (0,25-1,25):(11-33) и фермента и целлюлозы (0,25-1,25): а :(5-6), а осаждение ферментсодержащей дисперсии осуществляют в воду. 1 з,п, ф-лы, 1 табл,ратньм холодильником в течение 30 мин.Затем в колбу добавляют поедварительно приготовленный раствор хлорида лития (1.1 С 1) в ЛМАА так, чтобы сумма"- ное соотношение компонентов (Ц, 1.1 С и ГАМАА) было (5-6):(6,5-9):(85-88,5)Смесь перемешивают при комнатной температуре до образования вязкого прозрачного раствора. 0,25-1,25 ч, трипсина (ф) смешивают в фарфоровой ступке с 11-33 ч. ДМАА до образования однородной суспенэии, которую переносят в колбу с раствором целлюлозы. Полученный состав тщательно перемешивают, Соотношение ф и Ц составляет (0,25-1,25);(5-6). Суспензия фермента в растворе целлюлозы ста -1567625 Активность, ерг пленки Удельфермент Соотношение, мас.ч. СодерааниеферСохранение ак-ивности мер ная ц:сс 1;оидд ф;оидд ф Ц активность,до еоиообработ ки после термообработки прн ментав пленпослетермообработки при 8 сСь 37 С 85 С ке,иг/г 1 2 3 4 5 6 025: 110,25: 110,5: 111,г 5:0,5:33 0,25:5 4,8 0,25:5 5,0 0,5:5 7,1 1,25:5 9,0 05:6 6,9 65 960 95 61 950 950 52 140 1129 47 Зоо54 150 1142 79, 579,4оЯл79,5 5:6,5:88,5 5:8:87 5:887 5:8:87 6.9:85 763 754 903 04 о 94 ТрипсиниииПерокси 83,5 8,48 85 83 52 84 81 б,5:8;86,5 6:7,5:86,5 71 69 0,5:5,5 7 0 0,5:6 6,9 0,5:22 0,5:33 даваполучи 1 ь иичобилизнва нныр оериент невозь яПленка очень тонкая и хрупкая, гюсле термообработки при 85 ССоставитель О.СкородумоваРедактор М;Петрова Техред М.Дидык кроится. КорректорТ.Палий Заказ 1302 Тираж 494 в ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Н, Раушская наб., д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,гагарина,101 бильна при хранении при 5-10 С более трех месяцев.Состав наносят с помощью щелевой фипьеры с фиксированНым зазором на полированную стеклянную поверхность и погружают в воду (температура осадительной ванны 20-25 С), После отмывки пленки от остаточного растворителя ее обрабатывают 5-506-ным вод ным раствором глицерина и высушивают.В таблице показано влияние соот- ношения исходных компонентов на термостабильность иммобилизованных ферментов, полученных по предлагаемому . способу.,11 ля иммобилизации использованы трипсин с исходной активностью 309 ед/мг (субстрат - Я-севс ргосеака 1 п 1 чег.за 1) пероксидаза с исходной актив)ностью 24,8 ед/мг и щелочная фосфатаза с исходной активностью 158 ед/мг.Предлагаемый способ является простым, нетрудоемким, не требует боль ших временных затрат, сложного оборудования, легколетучих и ядовитых реагентов, позволяет получать пленочные целлюлозные материалы имообилиэованных ферментов, характеризующихсявысокой термостабильностью,Формула изобретения 1. Способ получения иммобилизованных ферментов, включающий растворение полимера в диметилацетамиде, введение фермента в раствор полимера и осаждение ферментсодержащей полимерной массы, о т л и ч а ю щ и й с я, тем, что, с целью повышения термостабильности целевого продукта, в качестзе полимера используют целлюлозу, которую перед связыванием с ферментом обрабатывают раствором хлорида лития в диметилацетамиде при массовом соотношении компонентов целлюлоза: хлорид лития:диметилацетамид (5-6):(бз 5-9):(85- 88,5), фермент вводят в раствор целлюлозы в виде дисперсии в диметилацетамиде при соотношении компонентов фермент:диметилацетамид (0,25 1,25):(11-33) и фермент:целлюлоза (О, 25-1, 25):(5-6) .2. Способ по п,1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что осаждение ферментсодержащей полимерной массы осуществляют в воду.