Способ выделения тиреоглобулина

(71) Институт биАН БССРолонку (2,5 х 20 см) ешенную 0,01 Мм (рН 7,4), содерГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР вторСОМУ СвИдетЕЛь. В,Лука шевич, С,И. Мар.И.Бовдейч,95, М 2, 1979, р, 325 носится к биохимии и о к производству раих диагностических наИзобретение относится к биохимии и медицине, в частности к выделению тиреоглобулина, который может быть использован в качестве компонента диагностических наборов для определения тиреоглобулина в сыворотке крови человека,Цель изобретения - упрощение способа выделения тиреоглобулина.Способ осуществляется следующим образом,Экстракт щитовидной железы подвергается ионообменной хроматографии на аминогидроксипропил-сефарозе с элюцией тиреоглобулина ступенчатым градиентом концентрации хлорида натрия в натрийфосфатном буфере, Выход гомогенного тиреоглобулина по отношению к содержанию его в экстракте составляет 20 - 30%.П р и м е р, Экстракция тиреоглобулина. 510139 А 1 боров. Цель - упрощение способа за счет сокращения стадий, Способ заключается в экстракции тиреоглобулина из ткани щитовидной железы человека хлоридом натрия и последующей ионообмен ной хроматографии экстракта на АНР (аминогидроксипропил)-сефарозе с элюцией тиреоглобулина ступенчатым градиентом концентрации хлорида натрия 0,15 - 0,2 М в 0,01 М натрий-фосфатном буфере. Полученный по данному способу тиреоглобулин может использоваться в качестве антигена для получения высокоспецифической антисыворотки, для приготовления стандартных растворов и меченного радиоактивными изотопами ти реоглобулина. 10 г ткани щитовидной железы человекаизмельчают и гомогенизируют в 20 мл0,01 М натрий-фосфатного буфера (рН 7,4),содержащего 0,15 М МаС, 0,02% йайз, втечение 5 мин с минутным перерывом в ножевом гомогенизаторе при 2000 об/мин при2 - 8 С. Полученный гомогенат фильтруютчерез 2 слоя марли и перемешивают на магнитной мешалке в течение 35 мин при 2 -8 С. Затем гомогенат центрифугируют при30000 9 в течение 30 мин при температуреротора 2 - 8 С, Надосадочную жидкость (экстракт) осторожно сливают и используют длявыделения тиреоглобулина. Объем полученного экстракта составляет 20 мл,Ионообменная хроматография на АНРсефа розе.Экстракт наносят на кс АНР-сефарозой, уравновнатрий-фосфатным буфера1510139 Составитель Н.ЛитвиненкоРедактор Н.Козлова, Техред М.Моргентал Корректор В.Гирняк Заказ 4595 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 жащим 0,15 М йаС 3. 0,02 йайэ, со скоростью 50 мл/ч. Колонку промывают 2 л этого же буфера со скоростью 50 мл/ч, Элюцию тиреоглобулина осуществляют 0,2 М йаС в 0,01 М натрий-фосфатном буфере (рН 7,4), содержащем 0,02;6 йайэ, со скоростью 20 мл/ч. Объединенную Фракцию (- 80 мл), содержащую тиреоглобулин, дивлизируют против 0,005 М трис-НС(рН 7,4) и лиофилизируют. Количество выделенного тиреоглобулина (концентрацию тиреоглобулина определяли спектрофотометрически, используя для расчетов значение коэффи 1.циента поглощения равное Агвана "= 10, а также с помощью коммерческого набора ЯВ-НТ 6 фирмы "С 31 п 1 егпабопаГ составляет 300 мг или 256 от содержания его в экстракте.При хранении в лиофилизованном состоянии при -20 С препарат тиреоглобулина сохраняет физико-химические и иммунологические свойства в течение не менее 1,5 лет,Предлагаемый способ в отличие от прототипа позволяет упростить процесс выделения тиреоглобулина эа счет сокращения стадий. Способ гарантирует выделение го могенного, стабильного препарата тиреоглобулина в препаративных количествах сихорошей воспроизводимостью, что делает возможным серийный выпуск диагностических наборов для определения тиреоглобу лина в сыворотке крови человека, основнымкомпонентом которых является тиреоглобулин. Формула изобретения 15 Способ выделения тиреоглобулина,включающий иэмельчение щитовидной железы человека, экстракцию хлоридом на- трия, центрифугирование, ионообменную хроматографию, о т л и ч а ю щ и й с я тем, 20 что, с целью упрощения способа за счетсокращения количества стадий, непосредственно после центрифугирования проводят ионообменную хроматографию надосадочной жидкости на аминогидрок сипропил-сефарозе.