Способ оценки морозоустойчивости сортов озимой пшеницы

119) 111) 01 Н 1/04, А 01, 7/ОО 51) 4 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВТОРСК ЕТ В(2 юл, )9 27 ститут физиологи ий СО АН СССР.Антипина и В (53 (56 8.8)идетельство СССР1 Н 1/04, 1979. ОЙЧИВОСПОСОБ 1)ЦЕНКИ МОРОЗОУ ОРТОВ ОЗИМОЙ ПШ 1.НИЦЫ Изобретение касается астений и может быть и лабораторной диагно тойкость больших набо изиол льзов и тике наов сорто имо ластиытьди -осится к ой и может Изобретение озиологии расте абораторно тойкость б использовано пр ьших зимо агностикенаборов со гибридов оз с еле кции . ия - снижеои шеницы для целейЦель изобретен оемкости, повыше нализов и ускоре е трти ассов цене процесс и,Сп ис- иче том, чторы, по ко которьх, озоустойч нован н ки-марк держани пени мо о ют польз ствен ожноном су ь о В качезуют лва ретичеазньх сортов пш таких маркеров антиген с эле полвижностью 0 х лвумс рнпмм еницы. испол ь ктрофо 24 и 0 уноэле ст стве 6 ел к, 30, полу ктрофореченнь зом р,р= + %,б.ч "СОЦИАЛИСТИЧЕС)(ИХЯс- "=7 РЕСПУБЛИК ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР 4274345/3 1- 101.07,8723.07,89. БСибирскийхимии растенС,И.Мишарин, .Войников 632.111,5(08Авторское св 382, кл . А 0 и гиоридов озимои пшеницы для целей селекции. Цель изобретения снижение трудоемкости, повьппение массовости анализов и ускорение процесса оценки. Семена исследуемых сортов и сортов с известной морозоустойо чивостью прорацивают при 28 С в течение 3-х суток. Иэ проростков методом двумерного иммуноэлектрофореза выявляют белки против антител на белки морозоустойчивой пшеницы. По высоте пиков белков с подвижностью К 1 0,24 и 0,30 оценивают степень морозоустойчивости, при этом чем более морозоустойчивый сорт, тем выше содержание белка с КГ 0,30 и ниже содержание белка с КГ 0,24,Разница в размерах и интенсивно- ности луг преципитации одинаковых о подвижности антигенов в препаратах контрольнын и охлажденных растений обусловлена изменениями в количестве отдельных белковых компонентов. В частности, если у неохлажденных растений явно выражено количественное преобладание антигена с одвижностью КГ 0,24 над антигеном с КГ 0,30, то у охлажденных растений наоборот преобладает пик антигена КГ 0,30. Это обуславливается уменьшением высоты дуги И 0,24 и увеличением антигена КГ 0,30. Причем, даже неохлажденные 3-дневные проростки озимой пшеницы морозоустойчивьх сортов содержат больше анти- гена КЕ 0,30. Чем более морозоусто чивый сорт, тем выше содержание бел1494884ка с К 1 0,30нж сСрждне белкаКг 0,24, и набрст, В каестмс оценки берется:неная высота дуг преципит;белков с рассмотрмнойэлектрфоретичес кой подвжиност,ю.За 100"; ус тойчво тсол ьаут высоту пуг прсцпитации антигенов известной мор:устойчивой оэмой пше -ницы ,ьбгу 11. 10Способ осущс стьяется следующимобразом,Дл проведсня двумерного (перекрестного)луноэлктрофоре а 4 гэтиолроманньх проростков, вырашеноных в течепе 3 сут. при 28 С,растирают в хо:одной комнате в 10 сбарбтап-:татого буфера с р 1 86содержащего 0,01 М меркаптоэтанола,Гоогенат нтрифугруют при 20000 д 20в течение 15 мин. Для электрофореэаиспользуют бесклточный экстракт,вырамненный по белку, который наносят в лукна .аитой на предметноестекло сг;роы, В качестве свидетеля исользуют бромфеноловый синий.Электрофорез проводят при силе тока 100 - 120 Л напряжеип 80 В втечен 1,5-2 ч, пс мере выхода свидстеля н: протвоположный край стекла. 11 с:е ;ноерного электрофореэадве по:оскс разделенными белкомьмобразцам,нт нэ стеклянную пластнку ра еро 4,5 х 12 см и оставшуюся ча т, п.астинки заливают 12 млраствора ; прозы .одержащей антитела (1 О мл 17-ной агароэы м барбиталацет тном буфере с рН 8,6 + 2 мл буфер ,с лржашего 350 мг пиофильно вы.сушенного г:обу:на) . Перекрестный 40иммуноэ.ектрофорез ведут при силетока 40 мЛ и напряжнии 40 В в течеме 24 , Пос.е окончания иммуноэлектрофоре а прспарат отмывАют отнепрореагрс павших белков сменой 45физлогического раствора мысува -ютснрспгтан-лиэируют высотыпиков белко с подвжностью Кй 0,24и О, ЗО иванг степень морозо -устойчивости,5011 лучм нысушнного глобулинаосуществляют сгедущим путем.Ис.пользуют эгиолированные проростки шнцы. Гастительный матерал вырмат на влажной фильтро -55 вальной бул; е в ермостате при28 С в тем 3 сут, Температурную сбработку 1 моля в течение 1 чР1)и 4 б . 1 бИкиць измеьч -ют в ступке с ждним азотом, а белки экстрагируют одним объемом 0,15 М ИаС 1 в фосфатном буфере 0,1 М (рН 7,), содержащего 0,01 М меркаптоэтанола. Структурные элементы клеок осаждают центрифугированием при 20000 Р в течение 15 мин. Высокомолекулярные соединения из супернатанта, используемые в дальнейшей работе, отделяют от ниэкомолекулярных веществ на колонке с сефадексом Ги лиофильно высушвают.Белковые препараты, полученные из охлажденных растений, используют для получения антисывороток. С этой целью антигены смешивают с дополнителем Фрейнда и подкожно вводят кроликам. В первом цикле (в три приема с недельными интервалами) вводят примерно по 75 мг белка, а при реиммуниэации через месяц - по 40 мг белка, Через 10 дн. после реиммунизации берут кровь из краевой ушной вены, отделяют сыворотку, высаливают гамма-глобулиновую фракцию сульфатом аммония (507 насыщения), диалиэуют против дистиллированной воды и лиофильно сушат.Фсрмулаи э обретенияСпособ оценки морозоустойчивости сортов озимой пшеницы, включающий предварительное проращивание в лабораторных условиях семян исследуемых сортов и сортов с известной морозоустойчивостью до стадии проростков и измерение у них биохимических показатепей по значению которых у исследуемых сортов при сравнении их с показателями образцов с известной морозоустоичивостью оценивают последнюю, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью снижения трудоемкости, повышения массовости анализов и ускорения процесса оценки, измерение осуществляют на 3-суточных проростках, а качестве биохимического показателя используют белки, выявленные двумерным иммуноэлектрофореэом против антител на белки морозоустойчивой пшеницы и по высоте пиков белков с подвижностью Кг 0,24 и 0,30 оценивают степень мороэоустойчивости, при этом чем более морозоустойчивый сорт, тем выше со;ержание белка с КГ 0,30 и ниже содержание белка с КГ 0,24.