Способ получения липоксигеназы

.К Е.А53) ех 1 м 8,0,а фермента.ярЬегох 27) культио состава,0,01; КНРО,рН,0 (дорования поддоптимальным Изобретение ржива ля б р 1 ют рави осинтез носится к биотехно яет собой способ п логии дст пособноикислоты раь применен Штамм. У 1010едующегаБ 07 Н О55 притвляют 1 П раея ВКПМвируютмас.Х:О, 1 р с 3 (а. еде сл О,1; М на с НаЮ медило е масл ппленн овышен сти.е ак 0 Н ИаОН, нов), Длисоставляет данные све рн веденичтобы дить новых ильтивировани). Полученныцу вв оре ь к72абл тельно 3 сут,ы ис И зы опредео та липокя ярЬегоранее как фермен- льтиви арк сиге ачестве родуов,ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Авторское свидетельство СССВ 888542, кл, С 12 И 9/02, 1980.Авторское свидетельство СССРФ 1010127, кл. С 12 И 15/00, 198Б.Багопега 1, 1 яо 1 аТ 1 оп о 1 1 1 рояепаяеЖе. Аяг. В 1 о 1. Селеш. 1940 ф (5)з р953-961(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОКСИГЕНА(57) Изобретение относится к бионологии и представляет собой спо лучения липоксигенозы,трансформировать жирныеличной насьпценности,Изобретение может быв микробиологии, фармакцине и медицинской промьЦель изобретения - птивности целевого продунке процесса,обретение заключаетсяии в качестве продуценазы штамма БггерсошусеВКПМБ, известногоцента протеолитическихрН среды в процессе ку 4 С 12 Н 9/02//(С 12 С 12 В. 11465) получения липоксигенаэы, способнойтрансформировать жирные кислоты различной насьпценности, Перспективноприменение продуктов реакции такихферментов при предупреждении и лечении тромбоэмболических и геморрагических состояний человека, животных.Целью изобретения является повышение активности целевого продукта иускорение процесса, Цель достигается направленным отбором штамма Бйг.ярЬегоЫея ВКПМ Б=573 (М 8-2) по признаку увеличенного синтеза липоксигеназы. Штамм Бгг.ярЬего 1 йея М 8-2 наизвестной синтетической среде простого состава к 48 ч культивированияна среде с рН 8,0 стабильно образуетвысокоактивную липоксигенаэу в количестве 3,0 ед/г биомассы. 1 табл,Активность липоксиг ляют при помощи электродапоглощению кислорода, а всубстрата используют линоарахидоновую кислоты.1472501 Формула изобретения Способ получения липоксигеназы, предусматривающий культивирование продуцента на питательной среде,до доСтижения максимального уровня активности, отделение мицелия и разрушение его, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения активности целевого продукта и ускорения процесса, в качестве продуцента используют штамм Бггергошусев врЬегоЫев ВКПМЯ, а культивирование ведут на питательной среде с рН 8,0,Активность липоксигеназы нМ 0 Длительность рН Штаммы культивирования,ч г биомассы,мин субстраты Линолевая Арахидоноваякислота кислота Гцвагцт 0,6 2,4 168 6,0 охуврогцш Бггерготусев врЬегоЫев Б3,0 72 11,2 8 0 Составитель И.ПриваловаТехред Л.Сердюкова Корректор В.Романенко Редактор И,Сегляник Заказ 1674/28 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская иаб., д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 П р и м е р 2. Актиномицет Б.врйегоЫев Бвыращивают на скошенной агаризованной среде, содержащей, г/л: кукурузный экстракт 10; крахмал растворимый 10; аммоний сернокислый 3; натрий хлористый 3; кальцийР углекислый 2; агар 20; рН 8 при 28 С в течение 7 дней.Посевным материалом служит суспензия спор культуры Б.врЬегоЫев ВКМПБ. В 1 мл суспензии должно содержаться около 2 млрд, спор (определяется по стандарту мутности), Посевной материал вносят в количестве 1 Х синтетической среды известного состава, содержащий, г/л; глюкоза 40; калий Фосфорнокислый (однозамещенный) 2; магний сернокислый 5,7; аммоний сернокислый 1,25, рН 8, ос-. тальное вода.Выращивают на качалках 180- 200 об/мин в колбах емкостью 750 мл со 100 мл среды в каждой в течение 48 ч при 28 С. 25Мицелий отделяют от культуральной жидкости при помощи центрифугирования в течение 10 мин, При 4000 оборотов в минуту. Отделенный мицелий промывают трижды физиологическим 30 раствором; Далее мицелий разрушают ультразвуком в течение 5 мин при интенсивном охлаждении и центрифугируют в течение 20 мин, при 18 тыс, оборотов в минуту, Полученный супернатаит обладает активностью 3,0 ед/гбиомассы,За единицу активности принятоколичество фермента, необходимогодля поглощения 1 ммоль кислорода притрансформации субстрата в течениеминуты при 30 С.Таким образом, способность к синтезу липоксигеназы у предлагаемогоштамма выше, чем у известного, чтоделает штамм Бгг.врйегоЫев перспективным для применения в микробиологической и медицинской промышленностидля получения активной дипоксиге-,назы,Предлагаемое изобретение такжеможет быть использовано в биохимии,Физиологии животных и фармакологии.