Способ выделения ультрамелких форм микробактерий туберкулеза

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 19) 01) 662 САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ельцин- елеГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ,(46) 15.07,88, Бюп. У 26 (71) Львовский научно-исследова ский институт туберкулеза (72) Е.И.Дзись и В.А.Самарский (53) 576.8.093.1(088.8) (56) Вейсфейлер Ю.К. Биология и.менчивость микобактерий туберку и атипичные микобактерии. Будап 1975, с.225-236. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ УЛЬТРАМЕЛФОРМ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА(57) Изобретение относится к меской микробиологии и касается в 51)4 С 12 С 1 1/04//(С 12 Я 1/04 С 12 К 1:32) ния ультрамелких форм (УМФ) микобактерий туберкулеза. Цель изобретения -повьппение точности способа. Сущностьспособа сводится к тому, что культуру микобактерий туберкулеза обрабатывают лизоцимом в оптимальной концентрации 0,2 мг/мл буферного раствора, затем смесь инкубируют, отделяют осадок и обрабатывают его трипсином в оптимальной концентрации1 мл/мл. После инкубирования осадокудаляют, а надосадочную жидкостьфильтруют через каскад мембранныхфильтров. Выделяемость УМФ в 603 случаев. 1 з.п. ф-лы.1 1409662 г Формула и з обретения 1. Способ выделения ультрамелких Форм микобактерий туберкулеза путем Фильтрации культуры микобактерий через мембранные фильтры и отбора филь- трата, содержащего целевой продукт, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, перед фильтрацией культуру обрабатывают раствором лизоцима,отделяют образующийся осадок и обрабатывают его раствором трипсина. 2. Способ по п,1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что используют лиэо - цим в концентрации 0,2 мг/мл и трип" син в концентрации 1 мг/мл фосфатного буфера,Составитель А.Завадская Редактор И.Сегляник Техред Л.Олийнык Корректор Л.ПилипенкоЗаказ 3457/27 Тираж 520 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Б, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород ул. Проектная, 4 Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выделения ультрамелких форм микобактерий туберкулеза.Цель изобретения - повышение точности способа.П р и м е р, Для получения ультрамелких Форм (УМФ) 50 мг 40-дневной:культуры микобактерий туберкулезабычьего типа (Воч) гомогениэируютв фарфоровой ступке и инкубируют в5 мл раствора лизоцима (200 мкг/мп)на 01 М Фосфатном буфере рН 7,0 втечение 24 ч при 37 С. После инкубации суспензию центрифугируют 15 минпри 2000 об,/мин. Супери,таит отбрасывают и к осадку добавляют 1 мл раствора трипсина (1 мг/мл) и инкубируют 20 мин при 37 фС. В последующем20к суспензии добавляют 2 мл раствораингибитора трипсина из сои (0,5 мг/мл) .Смесь инкубируют 20 мин при 37 С ицентрифугируют 15 мин при 2000 об/мин.Надосадочную жидкость фильтруют через систему мембранных фильтров по следовательно с размерами пор 0,85 -0,45 - 023 мкм. Качество Фильтрациипроверяют методом "пузырьковой точки". Полученный фильтрат засевают на 30питательные среды Финн-П и Левенштейна-Йенсена иэ расчета 0,1 мл на пробу и внутрибрюшинно заражают морскихсвинок из расчета 1 мг/кг массы животного,35У всех 24 животных, которым ввоили фильтраты, обнаружены характерные специфические и параспецифические изменения во внутренних органах,в то время, как у контрольных животных специфические изменения во внутренних органах отсутствовали. Припосевах Фильтратов на питательныесреды, на среде финн-П в 60% случаев был установлен характерный рост слизистых колоний коковых форм микобактерий,которые образовывались в результате реверсии УМФ, а в контроле (прототипе) подобный рост бып установлен в 10% случаев.Для воспроизведения способа могут быть использованы концентрации лизоцима 0,2-1 мг/мл а время инкубации от 18 до 24 ч; трипсина 0,5-2,5 мг/мл при инкубации 20-.40 мин.Использование предлагаемого способа позволяет выделять ультрамелкие формы микобактерий туберкулеза в достаточном количестве для исследовательских целей, что будет способствовать проведению систематизированных исследований по изучению роли этих Форм в патогенезе туберкулеза и развитии специфического воспаления. Использование способа позволяет также разработать новые вакцины и туберкулиновые препараты.