Способ определения фенобарбитала в биологических жидкостях

(504 О 01 Б 33 Я САНИ БР ТЕЛЬСТ ОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ К АВТОРСКОМУ С(56) Х.СЬгхя 1 апзеп. Эе 1 егвпа 1 опоГ Нуйгохуне 1 аЪоХСез оГ РпепоЪагМ 1 опе аМ РЬепу 1 охп. - Хп: СХпсаХРЬагшасоХору оГ АпСерхХерс Ргцдя.Б.Х.ВегХЫ, 1975, р,131.-134,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНОБАРБИТАЛА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ(57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - повыщенне 801402 с, "чувствительности способа. В пробир" ку с плазмой крови вносят фенобарбитал, добавляют ацетатный руфер и хлороформ. После центрифугирования отделенную органическую фазу выпаривают. Осадок растворяют в хлороформе и наносят на пластинку. Хроматографическое разделение фенобарбитала проводят восходящим способом на пластин ках с закрепленным слоем силикагйля. Разделение проводят при двойном хроматографировании в системе хлороформ - диэтиловый эфир. После высушивания проявляют хроматограммы насьппенным раствором нитрата закисной ртути. Денситометрически проводят количественную оценку хроматограмм.1402943 ес е (а-Ь)е еееиаеееа ьа ьа ВН 1 Ы 1 И Заказ 2851/34 Тираж 847 Подписное Произв,-полигр. пр-тие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к медицинеи может быть использовано для выявленйя фенобарбитала н биологическихжидкостях.Белью изобретения является повьшение чувствительности способа,П р и м е р. Берут две центрифужные пробирки, В первую пробирку помещают 0,2 мл плазмы крови или спинномозговой жидкости, во вторую - 0,2 млраствора с заданным количеством фенббарбитала. Такое же количество Фенббарбитала вносят в пробирку с плазмой крови. В дальнейшем обработку содржимого обеих пробирок проводят.одинаково. Добавляют 0,1 мл ацетатнога буфера (рН 4,5) и 2,5 мл хлороформМ. Пробирки взбалтывают в течение1 мин, затем центрифугируют 5 мин, 20Отделенную органическую Фазу помещают на Фарфоровую чашку и выпариваЮют на водяной бане при 55 С. Оставшййся осадок растворяют в 0,2 мл хлороформа и наносят на пластинку в колихачестве 0,02 мл. Хроматографическоераэделение фенобарбитала осуществляет 1 ся восходящим способом на пластинкас с закрепленным слоем силикагеля.Разделение проводят при двойном хроматографировании в системе хлороформдйэтиловый эфир (3:1) при длине100 мм. Повторное хроматографированиепроводят через 20 мин после первогор зделения, предварительно высушив35п астинку при комнатной температуре,Полученные хроматограммы после высушивания проявляют насыщенным раствс 1 ром нитрата закисной ртути, которыйоцразует с фенобарбиталом окрашенное 40сбединение, проявляющееся на пластинках в виде пятен с различной интенсивностью окраски (от светлых до темнд-серых) на белом фоне. Количественную оценку хроматограмм проводят денсйтометрически.Измеряют площади пиков заданногоколичества Фенобарбитала (Ь) и кровиили спинномоэговой жидкости с заданнЫм количеством Фенобарбитала (а),50Разница между этими пиками дает площадь пика биолитической жидкостигт.е, с = а - д (мм ,), Зная количество Фенобарбитала в заданной пробе крови, находят содержание фенобарбитала в опытной пробе крови путем составления пропорцииЬ-е=с:ш,где е - количество фенобарбитала взаданной пробе, мкг;ш " количество фенобарбитала вопытной пробе биологическойжидкости мкгОтсюда е.сШ е елееЬЕсли обозначить количество биологической жидкости, взятой для обработки, через й, то количество фенобарбитала на 1 мл равно Если заданное количество фенобарбитала (е) равно 50 мкг, площадь пика спинномозговой жидкости + 50 мкг Фенобарбитала, введенного в пробу (а) 3735 мм , площадь пика пробы, со 2держащий 50 мкг Фенобарбитала (д) 3680 мм , количество взятой для ана" лиза спинномоэговой жидкости (Й) 0,2 мл, содержание фенобарбитала в спинномозговой жидкости составляет Х = 3,73 мкг/мл.Чувствительность метода по известному способу составляет 40-45 мкг, а по предлагаемому - 1,2 мкг. Формула изобретения Способ определения фенобарбитала в биологических жидкостях путем экстрагирования пробы органическим растворителем, центрифугирования,вы-, паривания органической фазы, раство- . рения остатка в. органическом растворителе, тонкослойной хроматографии и денситометрирования, о, т л и - ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, разделение проводят с помощью тонкослойной хроматографии с применением внутреннего стандарта и с использова" нием системы растворителей хлоро- форм - диэтиловый эфир.