Способ окрашивания полинуклеотидов и белков в геле

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН А 140138 5) 4 б 01 М 33 483, 27 2 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНА ВТОРСКОМЪГ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ределения активности ферменто ших в метаболизме нуклеин и при анализе структуры поли Целью изобретения является ное окрашивание полинуклеот сутствии белков и повышен тельности окрашивания поли Изобретение заключается в том лективного окрашивания полин присутствии белков использую ное окрашивание препаратов, вой стадии окрашиваются т нуклеотиды, но не белки, а благодаря предварительному о рашиваются белки. ьск ва 182 ЛИ мо- мо- вст- слот ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИ(54) СПОСОБ ОКРАШИВАНИЯ ПНУКЛЕОТИДОВ И БЕЛКОВ В ГЕЛ(57) Изобретение относится к областлекулярной биологии и биотехнологиижет быть использовано для высоковительного определения нуклеиновых кв присутствии белков, а также дл в, участвуюовых кислот нуклеотидов.избирательидов в приие чувствинуклеотидов. , что для сеуклеотидов в т двустадийгде на перолько пол ина второй кислению ок1401381 Формула изобретения Составитель Т. Забойкина Редактор А. Воровин Техред И. Верес Корректор Л. Пилипенко Заказ 2535/43 Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфицеское предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Изобретение относится к молекулярной б 1 ологии и биотехнологии и может быть и пользовано для высокочувствительного опр деления нуклеиновых кислот в присутствии б лков, а также для определения активности ферментов, участвующих в метаболИзме нуклеиновых кислот и при анализе сТруктуры полинуклеотидов.Цель изобретения - избирательное окрашивание полинуклеотидов в присутствии б лков и повышение чувствительности окраивания полинуклеотидов.Белки и полинуклеотиды в геле окраивают в две стадии. На первой стадии п оводят обработку геля солью серебра и ормальдегидом для выявления исключит льно полинуклеотидов, а на второй стаии гель обрабатывают известным спосоом вначале окислителем, затем солью с ребра и формальдегидом для дополнильного выявления белков.Новым, по сравнению с известным спообом, признаком является введение стадии редварительной обработки геля солью сеебра и формальдегидом, что приводит к збирательному окрашиванию полинуклеоти 1 ов при одновременном снижении фона и 1 овышении чувствительности.Пример. РНК фага гр 6 и белок химорипсиноген по 0,5 мкл наносят на 20 о" ААГ капельным способом, высушивают в ечение 30 мин при комнатной темперауре. Окрашивание геля осуществляют в дветадии.Гель фиксируют в 200 мл 10 о/ -ного аствора уксусной кислоты, содержащего ОЯ-ный этанол, течение 3 ч, затем ромывают дистиллированной водой 3 раза о 5 мин и погружают на 30 мин в 0,1 Я-ный аствор азотнокислого серебра.Затем гель промывают дистиллированной водой 2 раза по 10 - 20 с и помещают в раствор 0,02 Я-ного формальдегида 3/-ного МаСОз на 5 - 10 мин (до появления окраски). Остановку реакции осуществляют, помещая гель в 1 Я-ную уксусную кислоту на 5 мин.Затем гель фиксируют в 200 мл 10 Я-нойуксусной кислоты, содержащей ЗОВ-ный этанол, в течение 3 ч, промывают водой 3 раза по 5 мин и погружают на 5 мин в раствор окислителя (0,0034 М бихромат калия в 0,0032 н. азотной кислоте). После этого гель отмывают дистиллированной во дой 3 раза по 5 мин и погружают на 30 минв 0,1 Я-ный раствор азотно-кислого серебра.После этого гель промывают дистиллированной водой 2 раза по 10 - 20 с и помещают в раствор 0,02 о/-ного формальдегида 15 о.ЗЯ-ного Ха 2 СОз на 5 - 10 мин (до появления окраски) . Остановку реакции осуществляют, помещая гель в 1 Я-ную уксусную кислоту на 5 мин.Способ на первой стадии обеспечиваетокрашивание только РНК и ДНК, на вто рой стадии прокрашиваются и белки,при этом чувствительность окрашивания НК на полосу составляет более 0,001 мкг и не менее 0,0001 мкг по белку.Окрашивание гелей серебром позволяетвыявить фрагменты РНК длиной до 6 - 10 нуклеотидов. Причем, полинуклеотиды различного состава окрашиваются с разной интенсивностью и образовавшиеся комплексы различаются по цвету. Способ окрашивания полинуклеотидов и белков в геле путем последовательной обработки геля бихроматом калия, солью серебра и формальдегидом, отличающийся тем, что, с целью избирательного окрашивания полинуклеотидов в присутствии белков и повышения чувствительности окрашивания полинуклеотидов, гель предварительно обрабатывают солью серебра и формальдегидом.