Способ определения активности соласодиндегидрогеназы
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1388811
Авторы: Дериглазова, Мурумбаева, Францев
Текст
(51) 4 С 01 Н 33/Ь г Д РЕТЕНИ 1 Ащ+ПВ р 1Ь Я 14рной б логи глазова едоваоды исых кисл2. НОСТИ биохихнолои Цельива ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ ОПИСАНИЕ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Институт молекуляи биохимии АН КаэССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВСОЛАСОДИНДЕГИДРОГЕНАЗЫ(57) Изобретение относится кмии, касается медицины, биотегии, энзимологии, токсикологи изобретения - повышение точности способа определения соласодиндегидрогеназы. Для этого исследуемый материал (экстракт) наносят на поверхности столбиков полиакриламидного геля и проводят электрофорез в щелочной системе буферов. Затем гели переносят в пробирки, содержащие 15 мл смеси диметилсульфоксида и хлороформа в соотношении 98:2, в которой растворены: соласодин в концентрации 0,4 мг/ /мл, НАДФ 0,1 мг/мп, феназинметасульфат 0,1 мг/мл, нитротетразолевый синий 0,4 мг/мл. Зона белка, проявляющего соласодиндегидрогеназную активность, проявляется на геле темной д полосой в результате образования формазана1388811 0,4 мг/мл Формула изобретения Составитель И.ЕмельяненковРедактор Т.Парфенова Техред А.Кравчук. Корректор Л.Пилипенко Заказ 1576/47 Тираж 847 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж-,35, Раушская наб., д, 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к биохимиии может быть использовано в медицине,биотехнологии, энэимологии, токсикологии.Целью изобретения является повышение точности способа за счет снижения денатурации фермента, для чего вкачестве растворителя компонентовсреды используют смесь диметилсульфо- ОКсида и хлороформа.Способ осуществляется следующимобразом,Исследуемый материал (экстракт)аносят на поверхность столбиков поли 15вкриламидного геля и проводят элект 1офорез в щелочной системе буферов,о окончании процесса гели извлекаютз стеклянных трубок и переносят в .робирки, содержащие 15 мл смеси диетилсульфоксида и хлороформа в соотрошении 98:2, в которой раствореныСоласодин в концентрации 0,4 мг/млНАДФ 0,1 мг/мл 25феназинмета,1 мг/млсульфатНитротетразолиевыйсиний 1,Зона белка, проявляющего соласодиндегидрогеназную активность, проявЛяется на геле в виде темной полосыв результате образования фармазана.П р и м е р 1. 5,0 г биомассы гри"ба Азрегдь 1 ив осйг. гомогенизируют вультразвуковом дезинтеграторе УЗДИ Ов 50,0 мл охлажденного до 2-3 С,0,05 И трис-НС 1-буфера рН 7,4 до полного разрушения мицелия гриба. Бесслеточный экстракт получают центрифуФГированием гомогената в угловом роторецентрифуги Кпри 16000 об./мин втечение 10 мин. Полученную надосадоч" ную жидкость (бесклеточный экстракт) в количестве ,00,0 мкл наносят, на поверхность столбиков полиакриламидного геля и проводят электрофорез, По окончании форетического разделения белков гриба Аврег 81 цэ осйг о чем судят по фронту движения лидирующего красителя (бромфенолового синего), гели извлекают из стеклянных трубок и переносят в пробирки, содержащие 15 мл смеси диметилсульфоксида и хлороформа в соотношении 98;2, в которой растворены все необходимые для протекания реакции дегидрирования соласодина компоненты, а также реактивы для чисто химического выявления активности тетраэолиевым методом.При инкубации гелей в темноте прио30-35 С зона белка, содержащая соласодиндегидрогеназу, выявляется темной зоной формаэана через 20-25 мин. Применение предлагаемого способа повышает растворимость соласодина, что делает возможным четкую регистрацию активности соласодиндегидрогена-. эы, тем самым значительно повышая точность анализа. Способ определения активности соласодиндегидрогенаэы путем электрофореза в полиакриламидном геле, предварительно инкубированном в среде, содержащей соласодин, кофермент феназинметасульфат и нитротетразолиевый синий, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет снижения денатурации фермента, в качестве растворителя компонентов среды используют смесь диметилсульфоксида и хлороформа.
СмотретьЗаявка
3910017, 12.06.1985
ИНСТИТУТ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ И БИОХИМИИ АН КАЗССР
ФРАНЦЕВ АЛЕКСАНДР ПАВЛОВИЧ, ДЕРИГЛАЗОВА ЕЛЕНА БОРИСОВНА, МУРУМБАЕВА ШОЛПАН КАКЫТАЕВНА
МПК / Метки
МПК: G01N 33/68
Метки: активности, соласодиндегидрогеназы
Опубликовано: 15.04.1988
Код ссылки
<a href="https://patents.su/2-1388811-sposob-opredeleniya-aktivnosti-solasodindegidrogenazy.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения активности соласодиндегидрогеназы</a>
Предыдущий патент: Способ диагностики язвенной болезни двенадцатиперстной кишки
Следующий патент: Устройство для определения параметров экстремумов
Случайный патент: Способ освобождения прихваченного в скважине каротажного кабеля