Способ получения композиционного сорбента для колоночной хроматографии

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ЯО 13 8 1 Р 15 08, В 0120 10 АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯледовател ьски ная хроматограМацека, Я. Янас. 60. ИЯ КОМПОЗИДЛЯ КОЛОНОЧГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНЦИОННОГО СОРБЕНТАНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ(57) Изобретение относится к способу получения композиционных сорбентов и позволяет получать сорбенты, пригодные для концентрирования и выделения биополимеров. Одну часть целлюлозы смешивают с 1 - 10 ч. адсорбента или смеси адсорбентов (уголь, бентонит, каолин) и добавляют 13 - 15 об.6500-ной серной кислоты. Суспензию перемешивают при комнатной температуре 15 - 30 мин, добавляют воду со льдом в количестве, достаточном для снижения температуры до 2 - 10 С, и выдерживают на холоде 30 мин. Смесь отфильтровывают и получают сорбент.1346181 Составитель Г. НикитинаРедактор Н. Тупица Техред И. Верее Корректор М. ДемцикЗаказ 4637/6 Тираж 656 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к способам получения композиционных сорбентов и может быть использовано в синтезе сорбентов для хроматографии биополимеров.Цель изобретения - обеспечение возможности использования сорбента для концентрирования и выделения биополимеров.Пример 1. 5 г чистой медицинской ваты (целлюлоза) и 20 г бентонита (аскангель) перемешивают с 80 мл 65 о",-ной серной кислоты при 18 С 30 мин, К полученной суспензии добавляют воду со льдом (300 г) и перемешивают 30 мин. После фильтрования получают сорбент с отношением бентонита и целлюлозы 4: (БЦ - 41). Полученным сорбентом наполняют колонку размером 1 Х Х 12 см. Скорость потока воды через. колонку 48 мл/ч см-.Пример 2, Получают сорбент аналогично примеру 1, но в качестве адсорбента берут каолин, а обработку кислотой ведут 20 мин. Получают образец сорбента КЦ - 41. 20Пример 3. 3 г ваты перемешивают с 50 мл 65 о/-ной серной кислоты 15 мин при комнатной температуре, добавляют 30 г угля и перемешивают еще 3 мин. Добавляют смесь воды и льда (200 г), выдерживают 30 мин и фильтруют. Получают образец сорбента 25 УЦ - 101 (соотношение угля и целлюлозы 10:1).Пример 4. 5 г ваты перемешивают с 50 мл 65/-ной серной кислоты 14 мин при 25 С, добавляют 5 г угля и 30 г бентонита и перемешивают 3 мин. Добавляют 150 г смеси воды со льдом, перемешивают и оставляют в холодильнике на 30 мин. Смесь фильтруют. Получают образец сорбента УБЦ - -161.Пример 5. Раствор лизоцима в воде концентрацией 1 мг/мл пропускают через колонку (0,35 10 см) с УЦ - 101 (сорбент по примеру 3), уравновешенную водой. На колонке сорбируется 4 мг белка. Колонку отмывают водой, лизоцим вымывают 0,1 М СНзСООН, выход белка регистрируют по поглощению при 280 нм с помощью Увикор да 11. Сорбент, полученный согласно известному способу устойчив лишь при рН больше 8, что не позволяет его использовать для выделения лизоцима.Пример 6, Раствор рибофлавина (витамина Ва) концентрацией 0,1 г/л в 0,1 М НС 1 пропускают через колонку (1,0 10 см) с УБЦ - 161 (сорбент по примеру 4) до проскока регистрируемого по поглощению при 480 нм. Колонку промывают водой. Затем вещество элюируют 0,1 М МаОН, получают раствор, концентрация которого в 5 раз выше концентрации нанесенного раствора. Из элюента рибофлавин выделяют дЬбавлением кислоты, после чего он выпадает в виде кристаллов. В данном примере для сорбции используют раствор сильной кислоты, что невозможно при известном способе.Пример 7. Раствор лактозы концентрацией 1 мг/мл в 0,2 М НС пропускают через колонку (0,35 10 см) с УЦ - 101 (сорбент по примеру 3), уравновешенную 0,2 М НО, На колонке сорбируется 25 мг лактозы, Колонку промывают водой, а углевод элюируют с сорбента 0,2 М СНзСООН. В данном примере адсорбцию и элюирование вещества проводят в растворах кислоты.Пример 8 Колонку (13 6,5 см), содержащую сорбент по примеру 4, уравновешивают 0,05 М ацетатным буфером рН 5,0. Через колонку пропускают фермент инвертазу в том же буфере. Происходит иммобилизация инвертаза на носителе, Через колонку с им мобилизованным ферментом пропускают 7 Я-ный раствор сахарозы в 0,05 М ацетатном буфере при рН 5,0 и 40 С. Время контакта субстрата с ферментом (время выхода из колонки) составляет 20 мин. Концентрация восстанавливающих сахаров после выхода из колонки превышает ЗЯ, т, е. предлагаемый способ позволяет получать сорбенты, пригодные для иммобилизации биополимеров с сохранением их специфической активности. формула изобретенияСпособ получения композиционного сорбента для колоночной хроматографии, включающий смешивание минерального адсорбента с раствором полисахаридного связующего в кислоте с последующей коагуляцией композиции, отличающийся тем, что, с целью обеспечения возможности использования сорбента для выделения биополимеров, смешив,ание компонентов проводят в 65 Я-ной серной кислоте, в качестве полисахарида используют целлюлозу, а коагуляцию осуществляют добавлением воды со льдом,