Способ определения авидности антител

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9) (1 45313 в) 4 А 6 3 53 0 б ОП ИЗОБРЕТЕН тельОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Бунин К. В Фирсанов В. И.,Парфенова Н. И., Кравцов Э. Г., Нечаева И. П. Изучение авидности специфических антителв сыворотках крови больных холерой и вибриононосителей. - Микробиология, эпидемиология и иммунобиология, 1976,9, 70 - 74.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АВИДНОСТИ АНТИТЕЛ(57) Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения авидности антител в различных иммунных сыворотках. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа за счет определения двух основных признаков авидности антител: скорости и полноты связывания одновременно. Проводят реакцию непрямой иммунофлуоресценции с иммунными сыворотками на предметных стеклах с мазками из тест- штамма бактерий. Результат учитывают с помощью микрофлуометрии. Скорость связывания антител с антигеном определяют как процент интенсивности свечения на 1,3 и 5-й мин к 20-й мин протекания реакции, а полноту связывания - как интенсивность свечения в милливольтах на 20-й мин. 1 табл.1245313 Формула изобретения Составитель М. Васильев Редактор С. Патрушева Техред И. Верес Корректор Г. Решетник Заказ 3937/3 Тираж 660 Подписное ВНИИГ 1 И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения авидности антител в различных иммунных сыворотках.Цель изобретения - ускорение и упро 5 щение способа за счет определения двух основных признаков авидности антител: скорости и полноты связывания одновременно одним методом.Способ осуществляется следующим образом,10Проводят реакцию непрямой иммунофлуоресценции с иммунными сыворотками на предметных стеклах с мазками из тест- штамма бактерий, при этом результат реакции учитывают микрофлуорометрией.Скорость связывания антител с антигеном определяют как процент интенсивности свечения на 1,3, 5-й мин к 20-й мин протекания реакции, а полноту связывания - как интенсивность свечения в милливольтах на 20-й мин. 20Пример 1. Сравнение авидности антител в трех мелиоидозных гипериммунных сыворотках.Готовят мазки из взвеси типичного мелиоидозного штамма с концентрацией 10" мелиоидозных тел в 1 мл. Исследуемые сыворотки (А, Б, Б) в рабочем разведении наносят на мазки и инкубируют каждую 1, 3, 5 и 20 мин на отдельном мазке (стекле).Промываюг препараты и наносят на них люминесцирующую сыворотку против иммуноглобулинов того вида, от которого получены гипериммунные сыворотки, в соответствующем рабочем разведении. Инкубируют 20 мин и промывают. Препараты микроскопируют и измеряют интенсивность свечения с помощью микрофлуорометрии с применением фотонасадки и люминесцентного мик 35 роскопа, интенсивность выражают в милливольтах выходного напряжения фотоумножителя. Подсчитывают процент интенсивности свечения на 1, 3 и 5-й мин к 20-й мин и анализируют полученные результаты Гсм. таблицу). Иммунные Процент интенсивности Интенсивностьсыворотки свечения к 20.й мин на: свечения на20 мин, мВ1 мин 3 мин 5 мин 20 мин Л 42 77 93 100 310 Б 32 61 84 100 280 В 30 46 61 100 260 Процент нарастания интенсивности свечения характеризует скорость связывания антиген ант 1 лтелами, а абсолютная величина ее на 20-й мин - полноту связывания.По этим критериям авидность антител в гипериммунной мелиоидозной сыворотке А наивысшая.Таким образом, способ позволяет ускорить определение авидности антител в 3 - 4 раза по сравнению с известным способом и упростить его за счет определения двух параметров авидности не в двух отдельных опытах (по известному способу), а в одном,Способ определения авидности антител путем взаимодействия антител с антигеном с последующим учетом результатов реакции, отличаюи 4 ийся тем, что, с целью ускорения и упрощения 1 способа, учет реакции осуществляют с помощью микрофлуорометрии в реакции непрямой иммунофлуоресценции и определяют интенсивность свечения, при этом скорость связывания определяют как процент интенсивности свечения на 1, 3, 5-й мин к 20-й мин, а полноту связывания - как интенсивность свечения на 20-й мин.