Способ хранения культуры клеток животных и человека

Номер патента: 1199796

Авторы: Гаврилюк, Карнаухов

ZIP архив

Текст

1199796 Составитель Л. МаныкинТехред Т.Фанта Редактор Н. Гунько Корректор С. Черни Тираж 524 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Заказ 7796/30 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к биологии и можетбыть использовано в биотехнологии, медицинеи ветеринарии для обеспечения переживанияи сохранения клеток животных и человека.Цель изобретения - увеличение длительнос ти переживания клеток.П р и м е р 1. Хранение культуры кле:ток фибробластов ВНК - 21,Готовят 1%.ную субмикронную эмульсиюкомерческого масляного раствора витаминаА (содержащего 3,5% витамина А или25800 м, ед. в 1 млу путем экструзии смеси 99 мл среды Игла (няи Хенкса), 1 млмасляного, растворавитамина А и 0,1 млФфосфоднпида,(или,нроксанола), который добавляют для получения устойчивой эмульсии, надезинтеграторе клеток микроорганизмов(ДКМ - 1) до получения эмульсии с размеромчастиц 0,1 - 0,2 мкм,Полученную субмикронную эмульсию добавляют в количестве 0,1% (т.е, 0,01% исходного масляного раствора витамина А) в пита.тельную среду Игла, содержащую 10% сыворотки крупного рогатого скота, куда затемвносят выращенную культуру клеток фибро.бластов ВНК - 21 в количестве 2 ф 10 кл/мли выращивают в этой среде в течение 24 ч.при 37 С.Затем выдержанные в такой среде клеткипереносят в обычную для фибробластовростовую питательную среду Игла с 10%сыворотки крупного рогатого скота и хранятв ней лрп 37 С.без смены питательной среды. В этих условиях клетки сохраняют своюжизнеспособность в течение 50 сут. Жизнеспособность клеток определяют с помощьюприжизненной окраски 0,1%-ным растворомакридинового оранжевого и нейтральногокрасного в течение 1 в 2 мин, Количество, живых клеток после хранения предлагаемымспособом составляет 50%.П р и м е р 2. Хранение культуры кле.ток эпидермоцитов человека.Готовят 1%-ную субмикронную змульсгпокомерческого масляного раствора смеси витаминов А и Е аналогично примеру 1,и добавляют ее в количестве 0,5% (т. е,0,005% исходного масляного раствора) в питательную среду 199, содержащую 20%5 фетальной сыворотки крупного рогатого ско.та.Выращенную культуру клеток кератиноцитов человека вносят в полученную средув количестве 2 ф 10 кл/мл и выдерживают5в ней в течение 48 ч при 37 С.оЗатем выдержанную таким образом культуру переносят в питательную среду 199,содержащую 20% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, и хранят в ней прио15 37 С без смены питательной среды,В этих условиях клетки сохраняют своюжизнеспособность в течение 160 сут. Количество жизнеспособных клеток после хранения составляет 50%. Жизнеспособность опре 20 деляют аналогично приыру 1.П р н м е р 3. Хранение культурыклеток почек эмбриона человека,Готовят 1%-ную субмикронную эмульсиюкомерческого облепихового масла (содержит25 230-300 мг каротиноидов: Ж, /3,-каротины,ликопин, зеаксантин, фитофлюин и т. д.)апалогично примеру 1 и добавляют ее в ко.личестве 1% (т.е, 0,01% исходного облепихового масла) в питательную среду 199, содер.30 жащую 10% сыворотки крупного рогатогоскота,Первичную культуру клеток почечного эпителия эмбриона человека в количестве2 10 кл/мл помещают в приготовленную35 среду и выдерживают в ней при 37 С в течение 24 ч. Затем эти клетки переносят дляхранения в обычную ростовую питательнуюсреду 199 с 10% сыворотки( крупного рога.отого скота и хранят в. ней при 37 С без40 смены питательной среды.В этих условиях клетки сохраняют свою:жизнеспособность в течение 90 сут, Жизнеспособность клеток определяют аналогично примеру 1. Количество живых клеток после хранения их в течение 90 дней составляет 50%.

Смотреть

Заявка

3717762, 29.03.1984

ИНСТИТУТ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ФИЗИКИ АН СССР

КАРНАУХОВ ВАЛЕРИЙ НИКОЛАЕВИЧ, ГАВРИЛЮК БОРИС КАРПОВИЧ

МПК / Метки

МПК: C12N 5/00

Метки: животных, клеток, культуры, хранения, человека

Опубликовано: 23.12.1985

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-1199796-sposob-khraneniya-kultury-kletok-zhivotnykh-i-cheloveka.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ хранения культуры клеток животных и человека</a>

Похожие патенты