Способ определения жирнокислотного состава фосфолипидов

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ш С 01 0 33/48 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ФОСФОЛИПИДОВ пу 80.1091066 тем экстракции липидов, отделения ихметодом тонкослойной хроматографии,обработки слоя сорбента; содержащегофосфолипиды, раствором метилирующего .агента с последующим газохроматографическим анализом .о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью упрощения и сокращения времени анализа,слой сорбента обрабатывают растворомхлористого тетраметиламмония в щелочной смеси метанол-хлороформ, отделяютсорбент, повторно добавляют щелочнойраствор хлористого тетраметиламмония.Составитель Н.ВалееваТехред Т.Дубинчак Корректор В.Бутяга Редактор Л.филь Заказ 3073/40Тираж 823 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ПЛП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная. 4 3 10910Изобретение относится к аналитической химии и биохимии и может бытьиспользовано при количественном определении жирнокислотного состава фосфолипидов,5Известен способ определения жирнокислотного состава фосфолипидов путем экстракции липидов, отделенияих методом тонкослойной хроматографии, обработки слоя сорбента, содержащего фосфолипиды, раствором метилирующего агента с последующим газохроматографическим анализом 1 3.. Недостатком известного способаявляется сложность и длительность 15анализа.Цель изобретения - упрощение исокращение времени анализа.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу определения жирнокислотного состава фосфолипидов путем экстракции липидов, отделения их методом тонкослойной хроматографии, обработки слоя сорбента,содержащего Фосфолипиды, раствором 25метилирующего агента с последующимгазохроматографическим анализом слоясорбента обрабатывают раствором хлористого тетраметиламмония в щелочнойсмеси метанол-хлороФорм, отделяютсорбент, повторно добавляют щелочнойраствор хлористого тетраметиламмония.Способ осуществляют следующимобразом,1Навеску силикагеля с Фосфолипидами35помещают в колбу на 20 мл, в которуюдобавляют 5 мл смеси растворителейхлороформ-метанол (1:1), содержащуюсмесь гидрата окиси калия и хлористого тетраметиламмония с концентрациейкаждого по 5 мг/мп. Смесь встряхиваютв течение 10 мин, растворитель Фильтруют. и добавляют к нему 0,4 мл хлороформ-метанольного раствора едкогокали и хлористого тетраметиламмония,раствор концентрируют под вакуумомили в токе азота до 0,1 мл и алик 66 ъвотную часть (1 мкл) вводят в испари"тель хроматографа.П р и м е р. Ткань печени крысы(1 г) экстрагируют 20 мл смеси хлороформметанол по Фолчу, после чего экстракт липидов в количестве 10-12 мг, в пересчете на сухое вещество наносят на стеклянную пластину с силикагелем для тонкослойной хроматографии, Разделение липидов проводят в системе гексан-эфир-ледяная уксусная кислота (75:25:2).Полосу Фосфолипидов соскребают с пластины. Затем к силикагелю добавляют 1,5 мл смеси растворителя хлороформ-метанол (1:1), содержащий смесь едкого кали и хлористого тетраметиламмония (каждый в концентрации 5 мг/мл). Смесь взбалтывают в течение 10 мин, отфильравывают силикагель. К раствору добавляют 0,4 мл хлороформ-метанольного раствора смеси едкого кали и хлористого тетраметиламмония (при необходимости раствор концентрируют под вакуумом) и аликвотную часть (1 мкл) вводят в испаритель хроматографа. "Вырухром" с пламенно ионизационным детектором. Используют колонку длиной 2 м, заполненную силанизированным хромосорбом с 57. полидиетиленгликольсукцината. .Температура колонки 200 С, детектоора 300 С, иснарителя 330 С. Газ-носитель - аргон. Испаритель хроматографа заполняют на 1/3 кусочками мелкораздробленной проволоки из нержавеющей стали.Количественный расчет проводят методом внутренней нормализации по площадям пиков.Использование способа в биохимических исследованиях при определении жирнокислотного состава фосфолипидов позволит сократить время анализа до 25 мин. Способ прост в исполнении, исключает использование агрессивных реактивов.