Способ определения состояния макроорганизма

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 178 21 АЗ 3/53 0 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР АТЕНТНОЕ 6 8 ЕТЕНИЯ Е ИЗОБР ИСАН К ПАТЕН с 1(71) Институт молекулярной биологии иге-"нетики АН УССР и Научнсо-исслседователь-ская лаборатория прикладной логики(56) Оценка иммунного статуса человека, Ме-тодические рекомендации. Минздрав, М.,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯМАКРООРГАНИЗМА(57) Использование: медицина, Сущностьизобретения; проводят иммунологическое исследование периферической крови - изолиро ванныхлимфоцитов и клетоклейкоконцентрата на модели Е- и ЕАС-роэетЙзобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для изучения различных состояний сложной биологической системы при моделирований широкого спектра патологических процес-. сов аутоиммунных, ойухолевых, инфекционных и т.п-.; атакже для диагностических исследований и индивидуального, подбора лекарственных средств путем иммунологического тестирования периферической крови при лечении аутоиммуннь,х, опухолевых инфекционных заболеваний, бесплодия или.с-.скообрсазовай ия," Н СТ-теста, микрометода"определенися ЕК-активности лимфоцитов и их Способности трансформироваться в бла-ссты; при этом в тест-сйстемы дополнитель-но и поСледсоватселсьновводят белокассоциисрбввсннссую и безбелковую фракции аутологичйосй натйвнсой"плазмыс й аутологйчны)есс эрйтроцйты, Для уточнения:клиническогодиагноза (природы воспалительных реакций) и формулирования инди- видуальнОгО "ткрсОсгйсОэсасс ЗфсфсЕКтйвНОСтИпредполагаемого леченйя (определения, какие лекарственные средства и вкакой дозировке споссобйы нормализовать" йссходно патологические состояния слймфоцитсов) в тест-системы вводят йрЬТивовоспалительные, гормональные "И"иммусномодулирусю- щие (медиаторы различных звеньев иммунного ответа) средства. Этот способ позволяет провести компьютеризацию обработки результатов исследованйя в автоматическом режиме,снабжен программой для формулирования текстового и графическбго варианта эакслючейия. 1 з,п; ф-лы,Сс в йроцессссес пре- й поСттрансплантационного мониторинга.Известны способы тестирования периферической крови дляопределения иммунного состояния организма. например путемопределениясодержсансИясинСулсисна иИсслЕ- дования динамики егоизменения; определения резистентности организма-при инкубировании лейкоцитов с тест-микро-бной вэвесью в присутствии аутологичной сыворотки; определения иммунореактивности при одновременном проведении двух1782321 О модуляция аутоплазмой: цельноибез белка 17 25 модуляции нет модуляции нет Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами:процентное содержание 14нетабсолютное количество 0,13 нет модуляция актоплазмой; 24модуляции нет26модуляции нет цельнойбез белка модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе:индометацином 2 0 дексазоном 0 ,0л"рекомбинантным интерфероном 13 6Т-хелперы; Т-супрессоры 0,33 2,2:3,3(теофиллиновый тест) 3.2. ЗаключениеПациент Б. Дата исследования 22,11,89, У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями:Способность изолированных Т-лимфоцитов образовывать Е-розетки понижена.Факторы клеточного микроокружения частично компенсируют ситуацию - увеличивают сниженную активность изолированных Т-лимфоцитов.Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную активность изолированных Т-лимфоцитов.Безбелковая фракция аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную активность изолированных Т- лимфоцитов.Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообразовании.Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е- розеткообразовании.Способность изолированных В-лимфоцитов образовывать ЕАС-розетки повышена.Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных В- лимфоцитов.Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов,Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов,Белокассоциированная фракция натив-ной аутологичной плазмы практически неизменяет пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать вЕАС-розеткообразовании,Безбелковая фракция нативной аутологичной.плазмы нормализует способность Влимфоцитов участвовать вЕАС-розеткообразовании.Отсутствие повышения показателейНСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов имоноцитов (индуцированный НСТ-тест) может свидетельствовать об истощении ферментов "дыхательного взрыва"фагоцитирующих клеток.Исходно увеличенное розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами, увеличенные показатели спонтанногоНСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов имоноцитов свидетельствуют в пользу гипотезы о.наличии во внутренней среде организма раздражителя иммунокомпетентнойсферы (антигены экзо- или эндогенной микрофлоры, распознавание нормальных идифференцировочных антигенов аутологичных тканей), причем и чтго способностьлимфоцитов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами увеличивается подвоздействием обеих фракций нативнойаутоплазмы,Таким образом, иммунное воспалениереализуется, вероятнее всего, как продуктами арахидоновой кислоты (простагландинами, лейкотриенами и т.д.), так и"воспалительными" гормонами (типа преднизолона).и ч 1 тго нарушенные показатели лимфоидной функции нормализуются: удалениемаутоагрессивных и иммуноблокирующих21 1782321 22 ксазона и терапевтическими дозами интерферона.Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование.Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпетентной сферы,Пример 4. Полная схема4,1, Результаты иммунологического исследования периферической крови; возраст ч 2 нейтрофилов спонт, 12 индуц 8моноцитов спонт 9 индуц 5Т-лимфоциты (Е-РОК), изолированные на Фиколле:процентное содержание 18абсолютное количество 0,16модуляция аутоплазмой:- цельной 0без белка 0 спонт г индуц.спонт, ( индуц. 40 " 6 С/0,6 - 2,1 х 1 С /л модуляции нет модуляции нет Т-лимФоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате:процентное содержание 36модуляция аутоплазмой: модуляции нет модуляции нет.кпроцентное содержание 28 20- 26;,абсолютное количество . 0,26 . 0,3 - 0,5 1 О lл модуляция аутоплазмой:цельной 0без белка2В-лймФоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате:процентйое содержание 15модуляция;аутоплазмой:цельной 17без белка,25 модуляции нетмодуляции нетдмодуляции нетмодуляции нет эритроцитами: нет нет Розеткообразование лимФоцитов с аутологичнымийроцейтное содержание -" 1 Ьабсолютное количество 0,13модуляциФ аутоплазмой: модуляции нет модуляции нет 2426 цельнойбез белка факторов белокассоциированной и безбелковой фракции нативной аутологичнойплазмы, дексазоном и интерфероном. 3,3, Рекомендации клиницистам, Показано: детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированных аутоагрессивных и иммуноблокирующих факторов аутоплазмы: параллельный курс лечения субтерапевтическими дозами де- ФИО Б. Ф-ла венозной крови: мон 17 п 0 общее количество лейкоцитов ч,8 процентное содержание лимфоцитов 13 Абсолютное количество лимФоцитов 0,91 НСТ"тест; с 6 э 0 лФ 19 Д 22.11,89норма 4,0 - 9,0 х 10. /ла18 - 38".,0,8 - 3,6 х 1 С /л(он"А О, 08модуляции нетТРЯ: .: 1, О: "модуляции нетбез белка спонт. 0,62 модуляции нетУСА 1,53модуляцйи нетКон-А 0,02: модуляции нето йЬРЯ 2,1 -модуляции нет2 1препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе:индометацином 1,Ь 1,М, . дексазоном 1,Э:т 4.2. Заключение " .Безбелковая фракЦий аутологичной Пациент Б. Дата исследования 22.11.89. плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает У пациента. обслуживаемого системой, сниженйую активность. изолированных Т- вторичный иммунодефицит, описываемый лимфоцитОв;., - :,.;-следующими показателями: . -",Белокассоцййрованная фракция натив-Способность изолированных Т-лимфа- " ной аутологичной плазмы".в присутствйи" цитов образовывать Е-розеткйпонижена, . ." клеточного микроокружения усугубляетси-, ,Факторы клеточнбго микроокружения туацию -уменьшает сниженную способ- частично компенсйруют" сит 7 ЙТйю-увели- ность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата чивают сниженную актианостьйзолйрован- участвовать в Е-розеткообразовайий,., ных Т-лимфоцитов:;,.: . Безбелковая фракция нативной аутоло-.: .Белокассоциироваййая фракцйянатив- гичйой плазмы в присутствии клеточного ной аутологичной плазмы усугубляет ситуа-микроокружения усугубляет сйтуацию цию - уменьшает пониженйую активность уменьшает сниженную способность Т-лимизолированных Т-лимфоцитов, фоцитов лейкоконцентратаучаствовать в Е-розеткообразовании.: ф1782321 26 нейтрофилов спонт; 26 индуц. моноцитов спонт. 0 индуц. Т-лимфоциты (Е" РОК), изолированные процентное содержаниеабсолютное количествомодуляция аутоплазмой: 6 2 снонт. с индуц.спонт. ( индуц. на фиколле: 76 0,8 40 - 6 ОЬ0,6 - 2,1.10 ф/л 25Способность изолированных В-лимфо- терфероном ЕК-актйвности и способностицитов образовывать ЕАС-розетки йовышвна.лимфоцитов трансформироваться в бластыФакторы клеточного микроокружения подвлиянием лектйна, нормализующее воз-инвертируют активность изолированныхВ-:действие на эти показатели противовоспалимфоцитов,.- -Б лительных препаратов свидетельствуют вБелокассоциированная фракция йатив- пользу гипотезы о наличии во внутреннейной аутологичной плазмы инвертирует" ак- " среде организма раздражителя иммунокомтивность изолированных. В-лимфоцитов.: - .петентнбй сферы (антигены экэо- или эндоБезбелковая фракция нативной аутоло- генной микрофлоры,. распознаваниегичной плазмы инвертируетактивностьизо нормальных и дифференцирОвочныханти-.лированных В-лимфоцитов,": " .: генов аутологичных тканей), причем 1 и ч 1 тгоБелокассоциированная фракция натив-: способность лимфоцитов образовывать роной аутологичной плазмы практически не эеткисаутологичнымиэрйтроцитамиувелиизменяет пониженную способность В-лим- чивается йод воздействием обеих фракцийфоцитов лейкоконцентрата участвовать в 15 нативнойаутоплазмы.ЕАС-розеткообразовании: Таким образом, иммунное воспалениеБезбелковая фракция нативной аутоло- реализуется; вероятйее всего,"как продуктагичной плазмы нормализует способность В-; " ми арахидоновой кислоты (простагландиналимфоцитов участвовать в ми, лейкокотриенами и т.д.), так иЕАС-розеткообразовании, о "воспалительными" гормонами (типа предБелокассоциированная фракция йатйВ-" - низолона).ной аутологичной плазмы угнетает способ-и чйтго нарушенные показатели лимфо-ность лимфоцитов участвовать в идной функции нормализуются удалениемлектининдуцированной реакции бласттрйн-аутоагрессивных и иммуноблокирующихсформации и увеличивает способность лим факторов белокассоциированной и безбел)фоцитов отвечать на 1 Р, ковой фракции нативной аутологичнойБезбелковая фракция нативной аутоло- плазмы, дексазоном и йнтерфероном..гичной плазмы увеличивает способность 4,3. Рекомендации клиницистам,лимфоцйтов отвечать на митогены бласи- Показано: детоксикационное лечение,рансформацией. направленное на сйижеййе концентрацииБелокассоциированная фракция натив-. безбелковых и белокассоциированных аутоной аутологичной плазмы снижает уровень:" агреСсивных и иммуноблокирующих фактоЕК-активности лимфоцитов.:. ров- аутоплаэмы; параллельный курс: . Отсутствие повышения показателейлечения субтерапевтическимй дозами деНСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и"ксазона и терапевтическими-дозамиинтер 35моноцитов (индуцированный Н СТ-тест) мо- ферона.жет свидетельствовать об истощении фер- ." . Спустя две неделй после окончаниялементов "дыхательного взрыва" чения необходимо контрольное исследовафагоцитирующих клеток.:. нйе.Исходноувеличенноерозеткообразова-": Описание соответСтаует исследованние лимфоцитбв с аутологичными эритроци- ным параметрам состояния иммунокомп 6, 40тами, увеличенные показатели спонтанного-.":тентной сферы,НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и: П р име р 5.Короткая схема,моноцитов, увеличенный уровень спонтанного бластогенеза лимфоцитов, отрицатель-5.1.Результаты иммунологического й 66 ле.ная регуляция Л - 2 рекомб ".: - - 45 дования периферической крови:ная регуляция" - -рекомбийайтным йнф-ла венозной крови:мон 15-" и. 0 с 71э 2лф 12 "Д Ц.04,90обцее количество лейкоцитов-8,8 норма 4,0 - 9,0 1 С /лпроцентное- содержание лимфоцитов 1218 - 38Абсолютное количество лимфоцитов 1,05 . 0,8 - 3,6 1 О /лНСТ-тесг:ц"27 1782321 28 цельной 16без белка 70Т-лимфоциты (Е-РО 1 в лейкоконцентрате:процентное содержание . . 6модуляция аутоплазмой:цельной . : 23Ьез белка35модуляция препаратами в субтерапевтической и терзах: индомгетацином 21 26дгексазогйом 15А-рекомбййантгныгм"интерФеройом 34 4О-лимфоциты (ЕАС"РОК); иэолйровганййе на Фйколлепроцентное "содержание45абсолютное колйчество :0,43модуляция аутоплазмой:цельной12Ьез Ьелка37 .В-лимфоциты (ЕАС- РОК)-в лейкоконцентрате;йроцгентное содержанйе" " 19модуляция аутоплазмой:цельной: 2без белка 31Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эрпгроцейтйое-содержанйе26абсолютное количество 0,27гмодуляция аутоплазмойцельйой 46Ьез белка45модуляция препаратамигв субтерагпевтйческой и тердозе: ийдометацином 10 0 дексазоном 1 О(теофиллиновый тест) модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет апевтической до 18 20 267.0,3-0,510 /л модуляции нет модуляции нетмодуляции нет модуляции нетитроцитами: нетнет модуляции нет модуляции нет апевтической 6 2,2:3,3 г5.3. ЗаключениеПацйент В. Дата исследования 17.04.90.У пациента, обслуживаемого системой; вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями;Способность изолированных Т-лимфоцитов образовывать Е-розетки повышена,Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Т- лимфоцитов.Белокассоциированная фракция нативной аутологичной йлазмы инвертирует активность изолированных Т-лимфоцитов.Безбелковая фракция аутологичной плазмы частично компенсирует ситуацию - уменьшает высокую активность изолированных Т-лимфоцитов.Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично компенсирует ситуацию - увеличивает сниженйую способность Т-лимфоцитов. лейкоконцентратаучаствовать вЕ-розеткообразовании,Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточногомикроокружения частично компенсируетситуацию - увеличивает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообразовайии.Способность изолированных В-лимфоцитов образовывать ЕАС-розетки повышена, гФакторы клеточного микроокруженияинвертируют активность изолйрованных Влимфоцитов,Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов,1782321 30 29 Ф-ла венозной крови мой 15 и 0 с 71 э 2 лФ 12 Д 17,04,30модуляции нет модуляции нет без белка7Т-лимФоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержаниемодуляция аутоплазмойцельнойбез белка модуляции нет модуляции нет 23 35 Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы частично компенсирует ситуацию - уменьшает активностьизолированных В-лимфоцитов.Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную способностьВ-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-роэеткообразовании.Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертируют способность Влимфоцитов лейкоконцентрата участвоватьв ЕАС-розеткообразовании.Отсутствие повышения показателейНСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов(индуцированный НСТ-тест) может свидетельствовать об истощении ферментов "дыхательного взрыва" фагоцитирующихклеток,. Сниженные показатели НСТ-теста моноцитов могут свидетельствовать о ригидности ферментов "дыхательного взрыва" ифункциональной несостоятельности фагоцитирующих клеток.Исходно увеличенное розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами, увеличенные показателй спонтанногоНСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов йизвращенное за счет преобладания Т-хелперных клеток соотношение иммунорегуляторных клеток свидетельствуют в пользугийотезы о наличии во внутренней средеорганизма раздражителя иммунокомпетен- . тной сферы (антигены экзо- или эндогенноймикрофлоры, распознавайие нормальных идифференцировочных антигенов аутологичФИО В,ных тканей), причем и чсго способностьлимфоцитов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами увеличивается подвоздействием обеих фракций нативной5 аутоплазмы,Таким образом, иммунное воспалениереализуется, вероятнеевсего, как продуктами арахидоновой кислоты (простагландинами, .лейкотриейами ит,д,), так и1 С "воспалительными" гормонами (типа преднизолона). а также за счет преобладанияТ-лимфоцитов хелперов.1 и ч 1 тго нарушенные показатели лимфоидной функции нормализуются удалением15 аутоагрессивйых факторов белокассоциированной и безбелковой фракции нативнойаутологичной плазмы, индометацином, дексазоном и интерфероном.5.3. Рекомендации клиницистам.20 Показано: детоксикационное лечение,направленное на снижение концентрациибезбелковых и белокассоциированных аутоагрессивных факторов аутоплазмы; парал-"лельный курс протйвойоспалительного25 лечения субтерапевтическими дозами индометацина, дексазона и интерферона.Спустя две недели после окончанйя ле-чения необходимо контрольное йсследование.30 Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпе тейтной сферы. П ример 6 : Полнаясхема 6.1, Результаты иммунологйческого исследования периферической крови;возраст 851782321 32 модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической Адозах: индометацином 21 26 дексэзоном 15 18Л"рекомбинантным интерфероном 34 4О-лимфоциты (ЕдС-РОК), изолированные на фиколле: 20 - 26/.03 - 0,510/л 450,48 процентное содержание абсолютное количество модуляция аутоплазмой: 12 37 цельнойбез белка модуляции нет модуляции нет В-лимфоциты (ЕАС"РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание модуляция аутоплазмой: 231 цельнойбеэ белка. модуляции нет модуляции нет Розеткообраэование лимфоцитов с аутологичными эритроцитаминет 260,27 процентное содержание абсолютное количество модуляция аутоплазмой нет цельной 46 модуляции нетбез белка45 модуляции нетмодуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтическойдозе: индометацином 1 О 0 дексаэоном 1 О 6(теофиллиновый тест) Естественная киллерная активностьлимфоци то в 19,29+0,8 модуляция аутоплаэмойцельной 2беэ белка 28модуляция препаратами в субтерапевтической идозе: индометацином 10 5 дексаэоном модуляции нет модуляции нет терапевтической 13 10,1-2-рекомбинантным интерфероном (Ец/мл):уровня спонтанного бластогенеэа 16 0,76, 60 0,69300 0,7, 1500 0,5 , 3000 0,6, 75000 б, 15000 0,5гСА-индуцированного бластогенеэа 12 1,12, 60 11300 211500 2,6 3000 127500 07 р 15000 04 Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных Т-лимфоцитов,Безбелковая фракция аутологичной плазмы частично компенсирует ситуацию - уменьшает высокую активность изолированных Т-лимфоцитов,Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично компенсирует ситуацию - увеличивает сниженцельной спонт.РСЛКон 1 РВбеэ белка спонтГСАКон"41 Р 0 6.3. ЗаключениеПациент В. Дата исследования 17.04.90.У пациента, обслуживаемого системой; вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями;Способность изолированных Т-лимфоцитов образовьвать Е-розетки повышена,факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Т- лимфоцитов,1,83 0,55 2,89 2,0 1,65 0,81 2,18 О, 77" модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нетную способность Т-лимфоцитов лейкокон- внутренней среде организма раздражителяцентрата участвовать в Е-розеткообразова- иммунокомпетентной сферы (антигены экнии,зо- или эндогенной микрофлоры, распознабезбелковая фракция нативной аутоло- вание нормальных и дифференцировочныхгичной плазмы в присутствии клеточного антигенов аутологичйых тканей), причемимикроокружения частично компенсирует ч 1 тго способность лимфоцитов образовыситуацию - увеличивает сниженную способ- вать розетки с аутологичнымй эритроцитаность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата уча- ми увеличивается под воздействием обеихствовать в Е-розеткообраэовании. фракций нативной аутоплазмы.Способность изолированных В-лимфо- Таким образом, иммунное воспалениецитов образовывать ЕАС-розетки повыше- реализуется, вероятнее всего. как продуктана, ми арахидоновой кислоты (простагландинаФакторы клеточного микроокружения ми, лейкотриенами и т.д.), так иинвертируют активность изолированных В- "воспалительными" гормонами (типа предлимфоцитов, низолона), а также за счет преобладанияБелокассоциированная фракция натив-, Т-лимфоцитов хелперов,ной аутологичной плазмы инвертирует ак-и аго нарушенные показатели лимфотивность изолированных В-лимфоцитов, идной функции нормализуются удалениемБезбелковая фракция нативной аутоло- аутоагрессивных факторов белокассоции-гичной плазмы частично компенсирует ситу- рованной и безбелковой фракции нативнойацию - уменьшает активностьаутологичной плазмы, индометацином, деизолированных В-лимфоцитов, ксазоном и интерфероном.Белокассоциированная фракция натив,3, Рекомендации клиницистам,ной эутологичной плазмы усугубляет ситуа- Показано; детоксикационное лечение,цию - уменьшает пониженную способность направленное нэ снижение концентрацииВ-лимфоцитов лейкоконцентрата участво- безбелковых и белокассоциированных аутовать в ЕАС-розеткообразовании агрессивных факторов аутоплэзмы; пэрал Безбелковая фракция нативнойаутоло- лельный курс противовоспалительногогичной плазмы инвертирует способность В-: .лечения субтерапевтическими дозами индолимфоцитов лейкоконцентрата участвовать метацинэ, дексазона и интерферона.в ЕАС-роэеткообразовании,:Спустя две недели после окончания леБелокассоциированная фракцйя натив- чения необходимо контрольное исследованой аутологичной плазмы увеличивает уро- ние,вень спонтанного и Кон-А-индуцированного Описание соответствует исследованбластогенеза, уменьшает уровень ГОА- и ным параметрам состояния иммунокомпе 1 РЯ-индуцированного бластогенеэа тентной сферы,Безбелковая фракция нативной аутоло- Сопоставление нового способа с извегичной плазмы увеличивает уровень спон- стными аналогами показывает следующиетанного бластогенеза, снижает уровень преимущества нового способа:ГОА- иРЗ-индуцированного блэстогенеза. 1) использование предложенной компОтсутствие повышения показателей лексной схемы диагностических исследова;НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов ний на основе "общепринятых(индуцированный НСТ-тест) может сеиде- иммунологических приемов (определениетельствовать об истощении ферментов "ды- Е- и ЕАС-розеткообразования, НСТ-тест, рехательного взрыва" фагоцитирующих акция бласттрансформации ит.п,) путемдоклеток, полнительного введения всех факторовСниженные показатели НСТ-теста мо- микроокружения иммунокомпетентных кленоцитов могут свидетельствовать о ригид- ток (клетки лейкоконцентрата, аутоэритроности ферментов "дыхательного взрыва" и циты, аутоплэзма, разделенная нафункциональной несостоятельности фаго- белокассоциированную и безбелковуюцитирующих клеток, фракцию) позволяет получить многоаспектИсходно увеличенное розеткообразова- ную информацию о состоянии макрооргание лимфоцитов с аутологичными эритроци- низма, уточнить клинический диагноз итами, увеличенные показатели спонтанного сформулировать индивидуальный прогнозНСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и эффективности предполагаемого леченияизвращенное за счет преобладания Т-хел- по учету реакции розеткообразования изо-перных клеток соотношение иммунорегуля- лированныхлимфоцитов в присутствии проторных клеток, исходно повышенный тивовоспалительных, гормональных иуровень ЕК-активности лимфоцитов свиде- иммуномодулирующих препаратов, в отлительствуют в пользу гипотезы о наличии во чие от аналогов (1-4). где исследуют только1782321 36 35 митоген, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности диагностики и эффективности коррекции состояния макроорганизма, лечения при одновременном ускорении способа, дополнительно из йериферической крови выделяют аутологичные эритроциты и плазму, которую разделяют на белокасСоцийрованную и безбелковую фракции, а затем проводят иммунологические исследования в следующем порядке: после проведения НСТ-теста и определения Е- и ЕДС-розеткообразования изолированных лимфоцитов и прединкубированных с теофиллийом определяют Е- и ЕАС-розеткообразование изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии лейкоконцентрата, белокассоциированной и безбелковой фракцииаутоплазмы и в присутствии различййх препэратов гормонального, просутствии аутоэритроцитов совместно с различными"иммунотропными препаратамй; определяют естественную клеточную килбласттранСформации на Т- и В-клеточный митоген после изолированнь 1 х лимфоцитов, отдельно от изолйрованных лимфоцитов в 2. Способпо и,1, отличавщийсягем, чтов качестве иммунотропного гормонального препаратаиспользуЮт дексаэон, в качестве противовосйалйтельного индометацин, а в качестве йммуномодулятора - интерферон."(А 1 5 1".Составйтель А ТретьякТехред М,Моргентал Корректор О,Кравцова ": Редактор Заказ 4292" Тираж: Подписное ВНИИПИ Государственногокомитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 изолированные лимфоциты, аутосыворотку,эрйтроциты барана; достигая узконаправленной цели;2) суммарное время проведенйя всегокомплекСа"иммуйологических исследованийсокращено до 4 - 6 ч - 3 сут (вотлйчие"отпрототипа - 7 суток);3) макСимальйый забор кровиуменьшен . до 10-15 мл, в отличие от прототипа -27 мл; .. 4) постановкамножества параллельныхпроб позволяет манипулировать широким диапазойом доз исследуемых лекарственных препаратов;5) обработку результатов и сбСтавлениезаклачений - рекомендаций осуществляютна компьютере вавтоматйзйрованйомре-жиме.Способ испытан на культуре клеток 61 здорового человека, 53 больййх сепсисом; . 21 больного аутоиммунными заболеваниями (ревматизм, бронхйальйая астма, сис- " темная красная волчанка).Диагностировайнйе" соСтоянйя макро-:ортанизмаи рекоМендации поих коррекций;" йолучен нйе и Осле компьютерной обработки подтверждаются клинйческйминаблюдениями и контрольными лабораторными исследованиями,:ф о р м у л а и з о б р ет е й и "я1 Способ.ойределейия состояйия мак роорганизма путем иммунологического исследования периферической крови,включающий получение изолйрованных лимфоцитов и лейкоконцентрата из перифе- "рической крови, проведение НСТ-спонтанного и "индуцированного теста " .сегментоядерных нейтрофилов ийоноцитовв лейкокойцентрате, определение Е-розеткообразования изолированньх лимфоци-тов, прединкубйроваййых стеофиллином, иЕАС-розеткообразования"изолированных . лимфоцитов, определение"еСтеСтвеннойклеточной кйллерной активности, йроведе- "ние реакции бласттрансформации изолйро-ваййых лимфоцитов на Т- и В-клеточный тивовоспалител ьного или иммуномодулирующего" ." действия, оп редел я ют розеткообразование изолированных лим- . фоцитов и отдельно 6 присутствий лейко- концентрата, белокассоциированной и безбелковбй"фракции аутоплазмы и в прилерную активность сначала изолированных г-.лимфоцйтов, а потом отдельно в присутст-вии белокассоцийрованной и беэбелковойфракции аутоплазмы, проводят реакцию прйсутствии белокассоциированной и безбелковой фракцииаутоилазмы и иммунот- ,.ропных ирепар"атов.реакций розеткообразования: лимфоцитов с эритроцитами барана в присутствии иммуностимулирующего препарата (левамизола спленина и т.д.) и лимфоцитов в присутствии аутоплазмы. 5Общим недостатком известных способов является проведение одного-двух имму,ЪологическИх тестов, по которым нельзяобъективно оценить сложную иммунную си. стему организма, 10более информативно исследованиепроводят при осуществлении двухэтайного способа диагностического определения им. мунного" состояния человека, являющийся способом-прототипом. Первый этап, назы ваемый.ориентирующим, включает следующиеоперации: : определение относительного и абсолютного количества.лимфоцйтов; тестыЕ-и ЕАС-розеткообразо-вания для определения относительного и 20 абсолютного количества Т- и В-лимфоцйтов"кровй определение концентрации сь вороточнь 1 х иммуноглобулинов основных классов(М, б, А), определение фагоцитарной " активности лейкоцитов25. Этот этап может быть осуЩествлей вусловиях клинической лабораторййв тече ниесуток.Второй этап, называемый аналйтиче-"ским, включает следующие операции. апре деление субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов (Т-хелперов, Т-супрессоров); прямой тест определения спонтанйой миграции лейкоцитов и тест торможения миграции лейкоцитов с использованием в 35 ; качестве стимулятора фитогемагглютинина(ГОА); оценка функциональных Свойств иммунорегуляторных клеток в тестах конканавалин-А-индуцированной супреСсорной актйвности; постановка важных тестов гиперчувствительности замедленного и немедленного типа на туберкулин, грибковые антигены, ОЙНВ, искомые аллергены; оцен. ка пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов в реакции бласттрансформации на 45" митогены, антигены, аллогенные клетки," определение В-лимфоцитов, несущих поверх- ностные иммуноглобулины разных классов; оценка синтеза йммуноглобулийов вкультуре В.-лимфоцитов; непрямой тест торможе-ния миграции лейкоцитов; оценкаактивности киллерных клеток (К- и ЕК-лимфоцитов); тесты на оценку наиболее значимых медиаторов иммунной системы, в томчисле интерлейкин - продуцирующей активности клеток; определение различных компонентов комплемента; оценка различныхкомпонентов фагоцитоза и рецепторногоаппарата фагоцитов. Если первый этап обязательный, то второй этап является рекомендательным, так как отличается значительной трудоемкостью (необходимо специальное оборудование, дефицитные реактивы, большой опыт и высокая квалификация исполнителя) и продолжительностью (общее время 5-7 сут).Однако несмотря на определение широкого диапазона иммунологических параметров, - способ-прототип является недостаточно точным. Он объективен исключительно в отношении системы и ч 1 го, так как не учитывает участия гуморальных и. клеточных факторов микроокружения в иммунном ответе,. не исследует индивидуального действия иммуннотропных препаратов, применяемых при терапии конкретного патологического процесса. Кроме того, из-за значительной продолжительности процесса - 7 сут, этот способ не обеспечивает оперативной диагйостической информаций.Целью изобретения является повышение точноСти диагностики и эффективности коррекции состояния макроорганизма при одйовремейном ускорении способа,Для достижения цели в способеопреде-, ления состояния макроорганизма путем иммунологического . и следования периферической крови, проводят НСТ- спонтанный и индуцированный тест сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов в лейкоконцентрате, определение Е-розеткообразования изолированных лимфоцитов, прединкубированных с теофиллином, определение естественной клеточной киллерной, активностй-изолированных лимфоцитов, реакцию бласттрансформации изолированных лимфоцитов на Т- и В-клеточные митогены, дополнительно йз периферической крови выделяютаутологичные эритроциты и плазму; которую разделяют на белокассоциированную и безбелковую фракции, а затем проводят иммунологические исследования в следующем порядке: после проведения НСТ-теста и определения Е-розеткообразования йзолированных лимфоцитов, прединкубированных с теофиллином и " " ЕАС-розеткообразования изолированных лимфоцитов последовательно в присутСтвии лейкоконцентрата, белоКассоциИрованной и безбелковой фракции аутоплазмы и в йрисутствии лейко-концентрата совместно с каждым из иммунотропных препаратов гормональното, противовоспалительного и иммуномодулирующего действия Определяют розеткообразованйе изолированных лимфоцитов с аутоэритроцитами и последовательно в присутствии лейкоконцентрата, белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы и совместно с каждым из указанных иммунотропных препаратов; определяют естественную клеточную киллерную активность после изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии лейкоконцентрата и белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы проводят реакцию бласттрансформации на Т- иВ-клеточные митогены после изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии белокассоциированной и безбелковой фракций аутоплазмы и совместно с каждым из указанных иммунотропных препаратов.Существенные отличия нового способа в сравнении с известными аналогами заклюцаются в многоплановом исследовании периферической крови, что обеспечивается изучением поведения в комплексе всех компонентов крови: изолированные лимфоциты, лейкоконцентрат, аутоэритроциты и эутоплазма, дополнительно разделенная на белокассоциированную и безбелковую фракции, а также их разлицных сочетаний в присутствии лекарственных препаратов, Благодаря такому разностороннему имму- нологическому исследованию определяют состояние всего макроорганизма, Так, например, предложенная схема позволяет изучить параметры изолированных лимфоцитов с учетом клеточных факторов микро- окружения (в лейкоконцентрате), а также с учетом влияния естественных пространственных связей между лимфоцитами, которые могут резко изменять показатели поведения изолированных лимфоцитов, исследуемых в способе-прототипе, Включе- ние в обьект исследований безбелковой и белокассоциированной фракции аутоплазмы позволяет определить не только суммарное воздействие гуморальных факторов, как в известных способах, но и разграничить, вкакой фракции плазмы находятся агрессивные(патологические) и компейсаторные(защитные) субстанции. Такое вычленение является принципиально важным, так как позволяет, используя современные инстоументэльные методики экстракорпоральной детоксикации (плазмафарез, гемодиализ, гемосорбция и их сочетания), удалять из макроорганизма вещества, поддерживающие патологический процесс, не ослаблять макросистему одновременным удалением субстанций, нарабатываемых ею для инактивации чужеродной информации,Кроме того, предложенный способ позволяет выявить способности лимфоцитов распознавать аутологичные тканевые анти- гены, например, экспрессируемые на мембранах собственных эритроцитов. Этотфеномен отражает выраженность реакций против перекрестно реагирующих антигенов например, антигенов андо- и экзогенной микрофлоры и антигенов собственных тканей, и редставлен ных на эритроцитах, на которых в разной степени присутствуют мембраноассоциированные структуры, характерные и для других органов; почек, миокарда, печени, поджелудочной железы, соединительной, нервной ткани и т.д.). Он, как эпизодический, сопровождает большинство инфекционных заболеваний, а в опре 5 10 деленном количестве случаев превращается в основное пэтогенетическое звено болезни, что имеет место при аутоиммунных поражениях соединительной и нервной ткани, поцек, сердца, суставов и т.д. как следствие 15 стрептококковой инфекции тестов никогда ранее не проводилось, Оно способствует уточнению клинического диагноза, так как демонстрирует поведение лимфоцитов в присутствии различных факторов:- противовоспалительных - блокирующих синтез продуктоварахидоновой кисло 25 ты: простагландинов, лейкотрйейов простациклинов, эйкозаноидов и т.д.;30 - гормональных - аналогов преднизолона, кортизона и т.д,; - иммуномодулирующих - медиаторов различных звеньев иммуннотб ответа; ийтерферонов, интерлейкинов, тимопоэтинов миелопептидов и др По результатам исследования конкретизируют природу воспалительных реакций или признаки наличия воспалительных медиаторов, формулируют индивидуальные 40 прогнозы эффективности предлагаемого лечения, т,е. утоцняют, какйе лекарственные средства и в какой дозировке способны нормализовать исходнопатологйческивсостояния лимфоцитов,45 Предложеннйй способ позволяет про" вести иммунологицеские исследования периферицеской крови всего за 4 - 6 ч (по короткой) и за 3 сут по полной схеме) в отличие от известного способа. где анализы 50 проводят в течение 7 сут. Новый способ позволяет провести компьютеризацию обработки результатов исследования в автоматическом режиме Способ иллюстрируется описанием общей схемы и примерами выполнения, представленными в форме карты иммунологических исследований периферической крови с рекомендациями клиницисту специально для конкретного больного. Изучение действия иммунотропных20 препаратов в совокупности предложенных. Способ осуществляется по следующей схеме.У пациента забирают 15 мл веноэной периферической крови, которую стабилизируют 2,7-ным раствором ЭДТА (трилон В) 5 в соотношении 1:10, Из 10 мл крови в стандартном градиенте плотности фиколл - ветивных клеток используют изолированные лимфоциты и лейкоконцентрат, определяют отклонение от а в;- ЕАС-розеткообра зова ние (зксп рессия характерных В-клеточных маркеров);а) изолированных лимфоцитов (определяют процентное и абсолютное содержание рографина (1.076 - 1.078) выделяют пулЕАС-розеткообразующих клеток):мононуклеарных клеток, из которых инкуба- . б) в присутствии лейкоконцентрата (опцией на пластиковых поверхностях удаляют 10 ределяют отклонение от а);прилипающие (моноциты, макрофаги) клет- в) в прйсутствии безбелковой фракциики. Из оставшейся крови (5 мл) отбираютаутоплаэмы (определяют отклонение от а илейкоконцентрат, максимально освобож- " б, в качестве эффекторных клеток испольэуденный от эритроцитов и плазмы (около 2ют изолированйые лимфоциты и лейкоконмл). Клетки лейкоконцентрата освобождают 15 центрат);от плазмы трехкратным центрифугировани- г) в присутствии белокассоциированной ем иотмыванием физйологическим"раствофракции аутоплазмы (определяют отклонером. Половину обьема полученйой плазмы " ние от а и б, эффекторйые клетки - изолиропропускаютчерез фильтры с диаметром йор . ванные лимфоциты и лейкоконцентрат).0,17 ммк и, такйм образом, отделяют без Ч - Розеткообразованиесаутологичныбелковую фракцию от белокассоциировай-ми эритроцитами:ной. -.,.:.:,: : .; а) изолированных лимфоцитов (опредеВ условиях и ч 1 го традиционными ме- ляют процентное и абсолютное количество); тодами определяют Е- и ЕАС-розеткообра-б) в присутствии безбелковой фракции эование, . роэеткообразование " с 25 аутоплазмы (эффекторные клетки - изолиаутологичными эритрОцитами, Е-розеткооб-: рованные лимфоциты определяют отклонеразование лимфоцитов, после прединкуба-, ние от а); .ции с теофиллином:показатели в) в йрисутствии белокассоциированнойНСТ-спонтанного и индуцированного тестафракции аутоплазмы (эффекторнйе клетки -сегментоядерных нейтрофилов и моноци изолированные лимфоциты, определяют оттов; активность естествеййых кйллерныхклонениеота).клеток; способноСтьлимфоцитов трансфор-:. Ч - Определение -розеткообразованиямироватьСя в бласты при внесенииразлич- лимфоцитов лейкоконцейтрата в присутстных митогенов. Все указанные реакции: вии иммунотропных препаратов (прединпроводят в соответствии с Методйками со кубация с йрепаратом длится в течение 30гласно рекомендациям, описанным в сйосо-: мин) при 36,7 С);"бе-прототийе (1),;, :.: .,: : - субтерапевтическая(0,1 терапевтйче - НСТ-спонтанный и индуцированный ской дозы) и терапевтическая доза индометестсегментоядерных нейтрофиловй моно-тацинацитов, учитываемый в лейкоконцентрате 40 - субтерапевтическая (0,1 терапевтиче- .(естественном клеточном, гуморальном и , скойдозы)итерапевтическаядозадексазойрОстранственном микроокружениях). ;:на;- Е-розеткообразование (экспрессия .: - субтерапевтическая и терапевтиче характерных Т-клеточных рецепторов) -ская доза альфа-рекомбинайтного интера) изолированных лимфоцитов (опреде ферона.ляют процентное и абсолютное содержание, Ч - Определение розеткообразованияЕ-розеткообразующих клеток); :,;: лймфоцитов, прединкубированных согласб) прединкубировайных с теофиллийом но условий этапа Ч, с аутолбгйчными эритизОлированных лимфоцитов (Т-хелперные и " роцитами.Т-супрессорйые клетки, определяют их аб Ч - Определение естественной килсолютные количества и соотношение);лерной активности (против аутологичныхв) в присутствии лейкоконцентрата (оп-опухолевых клеток, при-отсутствйи последределяют отклонение от а); : .:,них в качестве мишеневых используют клетг) в присутствий безбелковой фракцйи . киперевиваемой линии человеческогоаутоплазмы (в качестве эффекторных клеток 55 миелолейкоза - К);используют иэолйрованные лимфоциты и . а) изолирОванных лимфоцитов;лейкоконцентрат) определяют отклонение. - 6) в присутствии белокассоциированот а и в; ,ной фракции аутоплазмы (эффекторныед) в присутствии белокассоцйирован-" клетки - изолированные лимфоциты), опреной фракции аутоплазмы в качестве эффек- деляют отклонение от а);модуляции нет модуляциинет. Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате: ,фгнФпроцентное содержание " " - 15модуляция аутоплазмой:цельной -10 модуляции .нетбеэ белка 3 модуляции нетмодуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах:индометацином 27 23 дексазоном 20 20 .А-рекомбинантным интерфероном 17 20 При необходимости в схему тестирования могут быть внесены и другйе препараты- субтерапевтических и терапевтиче(различные гормоны: инсулин, глюкагон,Ских доз индометацина;кортизол; иммуномодуляторй лимфо- и мо-- субтерапевтических и терапевтиченокины; антибиотики, цитостатики; нарко ских доз дексазона;тические вещества и т.д,) в зависимости от - 1 -2-рекомбинайтного интерферонаконкретных задач;;,: . вдиайазбйе клййически используемых доз,в) в присутствии безбелковой фракции пересчитанных йа Зп ч 11 го культивирование:"аутоплазмы (эффекторные клетки - изоли- " 12, 60, 300, 1800, ЗООО, 7500. 15000 МЕмл.рованные лимфоциты), определяют откло Короткая схема "исследования"требуетнение от а., .:, минимального времени длявоспроизведеЙН - . Реакция блаСттрансформации ния. В йей отсутствуют методы, требующиелимфоцитов йа Г-клеточный митоген, на- . стерильностииусловийдляработысрадиопример, фитогемагглютинин (ВЗА, Зегча, 30 активными метками. Она включает -Ч этамкг/мл) и преимущественно В-клеточный 15 пы. Но ее информативность явномитоген, например, липополиса - харид - недостаточнадляйсследованияопухолевой(1.РЯ, Яегча, 100 мкг/мл):, .:; . болезни, при которой необходимо получе-а) изолированных лимфоцитов (учет ин-": нйеобъективныхданных и"о"характере взадекса стимуляции); ., ;. : имных влияний бластомыиб) в присутствии безбелковой фракции 20 макроорганиэма.аутоплазмы (эффекторные клетки - йэоли- " Полная схема более трудоемка и вклюрованные лимфоциты, определяют отклоне- чает все о 6 исанные этапы, Она позволяетние от а);:: . ". : :.;."., более детально исследовать состояние макроорганизма, в том числе опухолевую бов)вприсутствиибелокассоциированйой 25 лезнь, и более йзбирательно подойти кфракции "аутоплазмы(эффекторные клетки--выбору вида и дозй коррегирующих препаизолированнЫелимфоциты,определяютот-ратов,клоненйе от а); . :. ", " "- ".:," "; Короткая схемаг) внесение в тест-системы,кроме"фито-При"м е"р "1; 1;1 Результаты иммунологемагглютинина различных иммунотропнйх 30 гического исследовЪНЙя периферическойпрепаратов::.:. крови:ФИО А,; .: возраст 60,Ф-ла венозной крови; мон. 7 п 0 с,61 элф 2 ч Д,21,01.90Общее количество лейкоцитов -7,8 нор а ,0-9,0 10 " /лВ-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолировайные на фиколле:йроцентное содержайие :6 . 20-26абсолютное количество .0 11 0,3-0,5 х 10 ф /лмодуляция аутоплазмой;:,цельной1 - " модуляции йетбез белка 4модуляции нетВ-лимфоциты ЕАС-РОЙ) в лейкоконцентратепроцентное содержание .-"4модуляция аутоплазмойцельйой 1 :модуляции нетбез белка 0 ."модуляции нетРозеткообразование лим 4 оцитов с"аутологичными зритроцитами:процейтное содержание : .0 ". " нетабсолютное количество ":;. . 0 "",. нетмодуляция аутоплазмой: ц:,-.,цельйойО " модуляции нетбез белка " " 0 . .: " модуляции йетмодуляция:препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе:индометацином О 0 дексазоном 0 0А-рекомбмнантйым интерфероном ",: - 00Т"хелперы: Т" супрессоры : : .,. 2,О .,: 2,2:3,3(теоФиллиновый тест)3 . .. .:.1сС1.2. Заключение"-.Безбелковая фракция нативной аутолоПацйентА.Датаисследования 24;01,90.гичной йлазмй в присутствии клеточногоУ пациента; обслуживаемого системой,микроокружения усугубляет ситуацию -вторичный иммунодефицит, описываемыйуменъшает сниженную способность Т-лимследующими показателями:5 фоцитов лейкоконцентрата учаСтвовать в ЕСпособность изолированййх Т-лимфа- .:, розеткообразовании.цитов образовывать Е-розеткиВонижена, Способность йзолированных В-лимфоФакторы клеточного микроокружения цитов образовыватьЕАС-розетки понижеусугубляют сйтуацию - уменьшают снижен- :на.йую активность изолированных Т-лимФоци- . Факторы клеточного микроокружениятов - ..:; ":практически не изменяютпойижвнную ак- - .Белокассоциированйая фракция натйв-тИвноСть изолированных В-лимфоцитов..ной аутологичной плазмы усугубляет ситуа-Белокассоцийрованная фракция нативцию - уйейьшает пониженную активность.: ной аутОлогичной плазмы усугубляет ситуа-изолйроаанныхТ-лимфоцитов,15 цию - уменьшает"поййженную актйвностьБезбел ковая фракция -аутологичной изолированных В-лимфоцйтов,плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает ." Безбелковая фракция натйвной аутолосниженную активность изолировайных Т-:, гйчнойплазмьгпрактическйнеизменяетполимфоцитов.."ниженную активность йзолированныхБелокассоциированная фракция натив В-лимфоцитов.ной аутологичной плазмы в присутствииБелокассоцийрованная фракция йативклеточного микроокружения усугубляет си- ной аутологичной плазмы практически нетуацию - уменьшает сниженную способ- изменяет пониженную способйость В-лимность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата фоцитов лейкокойцентрата участвовать вучаствовать в Е-розеткообразовании. 25 ЕАС-розеткообразовании,14 13 .1782321Безбелковая фракция нативной аутоЛО-Показайо; детоксикационйое лечение, гичной плазмы усугубляет ситуацию - направленное на сйижение концентрации уменьшает сниженную спбсобность В-лим-безбелковых и белокассоциирбванных ймфоцитов лейкоконцентрата участвовать в мунодепрессивны факторов в нативной ЕАС-розеткообразовании. 5 аутоплазме." параллельный курс противоТаким образом, нарушения в иммуно- воспалительной терапии субтерапевтичекомпетентной сфере обусловлейы иммуно" скими дозамйййдометацина идексазона; депрессивным воздействием на функции : Спустя две недели после окончания лелимфоцитов клеточного и гуморального чения необходимо контрольное исследовамикрдокружения : - .; .; 10 ние. Описание соответствуетЬ чИго нарушенные показатели лимфо- - исследованным йараметрамсостояния имидной функции нормализуются: удалениеммунокомпетентной сферы.факторов белокассоциированной и безбел-ковой фракцииаутологичной плазмы, декса-П р и м е р 2;. Полная схема зоном,индометацином,:, 15 2.1.Результатыиммуйологическогоисс 1.3. Рекомендации клиницистам,:ледования периферическойкрови;модуляции нетмодуляции нет модуляции нет модуляции нет ФИ 6 А. ","..,:- возраст 60,0Ф-ла венозной крови: мон7 и О- "с 61 э 4: лф 24 Д 24.01.90Общее количество-лейкоцитов 7"8 : норма 4,6 -.9,0 х 10 /лВПроцентное содержание лнмфоцитов 2418 " 38,Абсолютное количество лимфоцитов 1 870,8 - 3,6 х 10 /л. ф без белка :.;,: 3- модуляцйи йетмодуляцияпрейаратами в субтерапевтической и терапевтнцескойдозах. ,нндометацином - 27 : 23дексазоном20 : 20А-рекомбинантным интерфероном 1720В-ллимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на Фиколлеупроцентное содержание ".-.,.:, 6 . . 20 - 26%абсолютное количество , ;:.":." .О, 1 1 -: О, 3 .-. О, 510 /лмодуляция аутоплазмой:цельной": . 1без белка ",4В-лиифоциты (ЕАС"РОК) в лейкоконцентрате:процентное содержание" ,;-.: ., 4модуляция аутоплазмой:цельной:.. 1 :. модуляции нетбез белкаО ;модуляции нетРозеткообразование лимфоцйтов с аутологйчнымн зритроцитами:процентное содержание.0 . нетабсолютное количество.О. .нет15 1782321 1 б модуляция аутоплазмой; цельной О модуляции нет без белка 0 иодуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтическойдозе: индометацинои 0 0 дексазоном 0 О(теофиллиновый тест) Естественная кнллерная активность лиифоцитов;2 ч 19,29+0184 модуляция аутоплазиой;цельной 29 модуляции нетбез белка чг модуляции нетмодуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтическойдозе: индометацином 10 13 дексазонои 13 16г.рекоибннантным интерфероном 1 ЕД/ил): 12 1 О, 60 12,300 10 1500 14 300 8 р 7500 015000 0;Реакция блаСттрансформаций лиифоцитов;уровень спонтанного выше ГСА-индуцированного бластогенезаРСА-индуц. бластогенез 0,65 3 - 8Кон-А 123 3-8ьРз , , -"-О 38 3 - 6иодуляцйя аутоплазмой;цельной спонт. 0,69 иодуляцни нетРСА1,0 модуляции нетКой"А. 0,08 модуляции нетЬРБ1,0йодуЛяциинетбез белка спонт. 0,97 ,модуляции нет-2-рекоибинантным интерферонои (ЕД/ил)уровня спонтанного бластогенеза 12 0,86, 60 1,0, 300. 1,0,1500 Т,1, . 3000 1,3, 7500 1,0, 15000 1,3УСА"ййЯу 4 йрбванного бластогенеза 12 0,9, 60 0,6, 300 0,6,:1500 0,6, 3000 О,.-,7500 О, 7, 15000 0,5сниженную активность "изолированных Т 2.2, Заключениелимфоцитов.",.Пациент А. Дата исследования 24.01.90, ,БелокасСоциированная фракция нативУ йациента, обслуживаемого системой, ной ачтологйчйой плазмь 1 вприсутствии- вторичный иммуйодефицит, "опись 1 ваемый 5 клеточного мйкроОкружвнйя усугубляет сиследующими показателями;туацию - уменьшает сййженную способСйособность изолированных Т-лимфо- ность Т-.лимфоцитов лейкоконцентрата,цитов образовывать Е-розетКи понижена. участвовать в Е-розеткообразовании,Факторыклеточного микроокружения Безбелковаяфракция нативной аутолоусугубляютситуэцию - уменьшаютснижен гйчйой плазмы в присутствий клеточногоную активность изолированных Т-лимфоци- микроокружения усугубляет" ситуацию - ,, тов, "- -- уменьшает сниженную способность Т-лимБелокэссоциированная фракция натив- фоцитовлейкоконцентрата участвовать в Еной аутологичной плазмы усугубляет ситуа- розеткообразовании,цию - уменьшает пониженную активность 15 Способность изолированных В-лимфоизолированных Т-лимфоцитов.цйтов образовывать ЕАС-розетки понижеБезбелковая фракция"ачтологичнойна.плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает(и ч 1 го нарушенные показатели лимфо 10 идной функции нормализуются: удалениемфакторов белокассоциированной и безбелковой фракции аутологичной плазмы, дексаэоном,индометацином.2.3. Рекомендации клиницистам,15 Показано: детоксикационное лечение,направленное на снижение концентрациибезбелковых и белокассоциированных иммунодепрессивных факторов в нативнойаутоплазме; параллельный курс противо 20 воспалительной терапии субтерапевтическийи дозами индометацийаи дексазона.Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование.25 Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпетентной сферы,П.р имер 3, Короткая схема3,1, Результаты иммунологического иссле 30 дования периферической крови:возраст 420 с 64 з О лф 19 Д 22 11 89норма 40 - 9 Ох 10 з /л19 18- 38 У,0,91 0,836 х 10 /л ФИО Б. Ф-ла венозной крови мон 17 и общее количество лейкоцитов 4,8 процентное содержание лимфоцитов абсолютное количество лимфоцитов НСТ-тест нейтрофилов спонт,12 инлуц. моноцитов спонт, 9 индуц. т"лимфоциты (Е-РОК), изолированные процентное содержаниеабсолютное количество спрнт, с индуц.спонт, с индуц,на Фиколле: 18 0,16 40 " 60/, 0,6 - 2,1 10 ф/л модуляция аутоплазмой:0 модуляции нетт"лимфоцитов (Е-Р 01:) в лейкоконцентрате:процентное содержание 36модуляция аутоплазмой;0 модуляции нетмодуляции нетмодуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтическои дозах:индометацином 25 23 дексазоном 22"2 рекомбинантным итерфероном 19 34В"лимфоциты (ЕАС-РОК) изолированные на Фиколле.280,26 20 - 26%03-0510 /л процентное содержание абсолютное количество модуляции аутоплазмой: модуляции нет модуляции нет цельнойбез белка В-лимфоциты (ЕЛС-РОК) в лейкоконцентрате:процентное содержание 19 Факторы клеточного микроокружения практически не изменяют пониженную активность изолированных В-лимфоцитов.Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную активность изолированных В-лимфоцитов,Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную активность изолированных В-лимфоцитов,Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании.Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании.Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы резко угнетает Кон-А-индуцированный бластогенез лимфоцитов, снижая его до уровня РОА- и ( РЯ-индуцированного бластогенеза,Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы увеличивает уровень ЕК-активности лимфоцитов,Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы резко увеличивает уровень Е К-активности лимфоцитов.Таким образом, нарушения в иммунокомпетентной сфере обусловлены иммунодепрессивным воздействием на функции лимфоцитов факторов клеточного и гуморального микроокружения.