Способ получения стафилококкового бактериофага
Формула | Описание | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1526225
Авторы: Валеева, Вискова, Насибуллин, Нигматуллин, Пушкарева
Формула
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВОГО БАКТЕРИОФАГА путем выращивания стафилококков в условиях аэрации и перемешивания в жидкой питательной среде с последующим заражением бактериофагом, инкубацией посевов и стерилизующей фильтрацией целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода бактериофага и его литической активности, выращивание стафилококков проводят в течение 2,5 3 ч, заражение бактериофагом осуществляют при достижении концентрации бактерий 1 1,7 млрд/мл из расчета 1 фаговая частица на 6 7 бактериальных клеток и инкубирование проводят в течение 3 3,5 ч, а стерилизующую фильтрацию проводят на микропористых мембранах.
Описание
Цель изобретения повышение выхода бактериофага и его литической активности.
П р и м е р Размножение стафилококкового бактериофага проводят в реакторе со смонтированной системой перемешивания и аэрации.
Культивирование проводят в мясопептонной питательной среде Мартена с добавлением глюкозы до конечной концентрации 0,4% рН 7,3-7,5.
Для размножения стафилофага используют 6-9 производственных штаммов стафилококков. В качестве посевной используют 18-часовые бульонные или 18-часовые агаровые культуры, из которых готовят нативную смесь и засевают в питательную среду до концентрации 2-3
107 клеток/мл. Культивирование бактерий проводят при постоянном перемешивании со скоростью 150-200 об/мин и аэрации 1,5-2 л воздуха на 1 л среды. В процессе культивирования стафилококков периодически определяют концентрацию микробных клеток по калибровочному графику оптической плотности стафилококков на ФЭКе 56М со светофильтром N 6. График строят с использованием оптического стандарта мутности.После 2,5-3-часового культивирования в экспоненциальной фазе роста, когда оптическая плотность культуральной суспензии достигает 0,6-0,9 ед, что соответствует 1-1,7 млрд/мл по графику, в реактор вносят бактериофаг из расчета 1 инфекционная фаговая частица на 6-7 бактериальных клеток с учетом данных их одиночного цикла развития фага.
Латентный внутриклеточный период размножения фага 45-50 мин. Через 3-4 генерации фага, длящейся 3-3,5 ч, наступает видимый лизис бактериальных клеток, сопровождающийся просветлением культуральной среды приблизительно до оптической плотности 0,06 ед. Затем фаголизат фильтруют через стерилизирующие фильтры непосредственно из реактора. Полученный отфильтрованный фаголизат характеризуется высокими литическими свойствами, лизируя 96% титровочных культур в разведении фага 107-108 (по Аппельману).
В таблице даны сравнительные результаты выхода бактериофагов трех опытов по известному способу и трех опытов по предлагаемому.
Предлагаемый способ обладает высокой производительностью, технологичен. Получаемый целевой продукт (в количестве 30-40 л) имеет высокую литическую активность (107,6
0,19), разница в литической активности составляет 15,6 раза.Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству медико-биологических препаратов. Цель - повышение выхода бактериофага и его литической активности. Стафилококковые бактерии культивируют в мясо-пептонном бульоне Мартена при постоянном перемешивании и аэрации до концентрации бактерий 1 - 1,7 млрд/мл. Заражение бактерий производят при множественности инфекции 1 фаговая частица на 6 - 7 бактериальных клеток, культивирование ведут в течение 3 - 3,5 ч до максимального просветления фаголизата. Стерилизующую фильтрацию проводят на пористых мембранах. Литическая активность 107,61-0,19 (по Аппельману), т.е. 90%.
Рисунки
Заявка
4344713/13, 16.12.1987
Уфимский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова
Вискова Р. С, Нигматуллин Т. Г, Насибуллин И. Х, Валеева Т. С, Пушкарева М. М
МПК / Метки
МПК: C12N 7/00
Метки: бактериофага, стафилококкового
Опубликовано: 27.05.1995
Код ссылки
<a href="https://patents.su/1-1526225-sposob-polucheniya-stafilokokkovogo-bakteriofaga.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения стафилококкового бактериофага</a>
Способ определения концентрации бактерий в суспензии
Номер патента: 1231077
Опубликовано: 15.05.1986
Метки: бактерий, концентрации, суспензии
...ЕасеаЫз) и трех грамотрица(тельных видов (ЕзсЬегдсЬда со 1, Рзецйошопаз аегцд 1 поза, ЯеггаЯа шатсезсепз) бактерий выращивают на мясопептонном агаре. Клетки смывают со среды 0,15 М раствором ИаСУ и сус пендируют. В оптическую кювету внося 3 мл буфера трис -НСР (100 ммоль, рН 7,5), этидиум бромид (6 мкмоль) и измеряют интенсивность флуоресценции красителя по примеру 1. В тот .же образец вносят суспензию одного из видов микроорганизмов в концентрации, соответствующей оптическойТаблица 1ДобавленыЭДТАТ итритонХ30 Исследуемый вид Без доба- бактерий вок+ сезсе П р и м е ч а н и е. (+) - наличие при-роста флуоресценции; (-) - отсутствие при- О роста флуоресценции.П р и м е р 4. Клетки Е. соКвыращивают на мясопептонном агаре, а также на...
Устройство для концентрации бактерий
Номер патента: 676917
Опубликовано: 30.07.1979
МПК: G01N 27/28
Метки: бактерий, концентрации
...1, внутри которого размещена цилиндрическая емкость 2 для проб жидкости, имеющая отверстие 3 для заливки жидкости, и камеры-накопители 4. В противоположных сторонах корпуса 1 установлены электроды б, расположенные в камерах б для раствора электролита, соединенные с камерами-накопителями 4 через полупроницаемые мембраны 7. Камеры-накопители 4 в момент забора концентрата через отверстия 8 отделены от емкости 2 задвижками 9.Электроды б вставлжтся в соответствующие гнезда устройства и фиксируются в них.Камеры б для раствора электролита заполняются электролитом. Задвижки .9 устанавливаются в верхнем положении так, чтобы камеры-накопители 4 оставались открытыми со стороны емкости 2 для проб жидкости. Исследуемый образец жидкости заливается в...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus l, используемый для получения моноклональных антител к днк зависимой рнк-полимеразе бактериофага т7
Номер патента: 1640157
Опубликовано: 07.04.1991
Авторы: Дегтярев, Костюк, Кочетков
МПК: C12N 5/00, C12P 21/08
Метки: антител, бактериофага, гибридных, днк, животных, зависимой, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, рнк-полимеразе, штамм
...признаки. Среда длякультивирования - среда ДМЕМ: сыворочка эмбриона коровы (10 ), сыворотка новорожденных телят (10 .), глютамин (2 ммоль), пируват натрия (1 ммоль), 2-меркаптоэтанол (0,05 ммоль), пеницилин/стрептомицин (1000 ед/мл).Характер роста - стационарная суспензия. Метод снятия - встряхнвание.Частота пассирования 2-3 раза в неделю. Посевная доза 150 тыс. клеток на 1 мл. Кратность рассева 5-10 раз.Контроль контаминаций. Бактерии, грибы и микоплазмы не обнаружены,Культура прививается и растет в виде асцита в перитонеальной полости мьппей БАЕВ/С, За 7 дней до введения клеток мышам-реципиентам вводят по 0,5 мл пристана. Асцит образуется через 10-15 сут после введения 1-5 млн клеток.Продуктивность штамма. Первичная...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus l, используемый для получения моноклональных антител к днк зависимой рнк-полимеразе бактериофага т7.
Номер патента: 1640158
Опубликовано: 07.04.1991
Авторы: Дегтярев, Костюк, Кочетков
МПК: C12N 5/00, C12P 21/08
Метки: антител, бактериофага, гибридных, днк, животных, зависимой, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, рнк-полимеразе, штамм
...61.Консервация клеток. Клетки ИМБСзаморожены на 36-м пассаже. Общееколичествоампул 20, по 4 млн клетокв ампуле. Криозащитная среда - рос-.товая,П р и м е р 1. Культивированиегибридных клеток ИМБС, .Во Флаконы для культйвированияклеток вносят гибридные клетки в концентрации 100-200 тыс клеток в 1 млсреды ДМЕМ, содержащей 10% эмбриональной сыворотки коровы, 10% сыворотки новорожденных телят, 2 ммольглютамина, 1 ммоль пирувата натрия,0,05 ммоль 2-меркаптоэтанола,1000 ед,/мл пенициллина/стрептомицина. Клетки инкубируют 2-3 сутв стационарном состоянии при37 С в атмосфере 6% СО. Концентрацияклеток, превышающая 1 млн в 1 мл,неблаго"приятна для роста клеток ивызыв ает их,гибель. Культуральнуютометра.Моноклональные антитела, продуцируемые...
Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus l., продуцирующий моноклональные антитела к бактериям рода brucella
Номер патента: 1604849
Опубликовано: 07.11.1990
Авторы: Байтубаев, Булашев, Дмитриев, Касьянов, Муканов, Несмеянов, Ромахов
МПК: C12N 5/00, C12P 21/08
Метки: brucella, антитела, бактериям, гибридных, животных, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональные, продуцирующий, рода, штамм
...-ние ночи. Полученные антителосодержащие материалы: супернатант и очищенную асцитную жидкость с конечнойконцентрацией иммуноглобулинов 8 мг/млиспользуют как реагенты для излученияспецифичности взаимодействия монАТ40 с тестируемыми антигенами с помощьюРМА и ТИФА,Характеристика полезного продукта,МонАТ относятся к классу 18 С подклассу 2 а. Они специфичны к эпитопу45 кор части полисахаридной цепи ЛПСбруцелл. Константа связывания 0,6 хх 10М.Методы оценки специфичности МКА:реакция микроагглютинации - (РМА) итвердофазный иммунофермвнтный анализ(ТИФА),Контаминация штамма. Контаминантовлинии, включая бактерии, грибы, дрожжи и микоплазму, не обнаружено.Криоконсервация. К осадку гибрид 55ных клеток добавляют .эмбриональнуюсыворотку теленка, а...
Предыдущий патент: Стенд для прочностных испытаний шасси летательного аппарата
Следующий патент: Головка для электрохимикомеханической обработки
Случайный патент: Устройство для контроля разностенности детали