Способ получения трифенилметанового красителя

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИФЕНИЛМЕТАНОВОГО КРАСИТЕЛЯ обработкой фуксина основного паральдегидом в солянокислой среде с последующим осаждением целевого продукта триарилметановым красителем, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности красителя к гистологическим структурам, времени его хранения и снижения длительности процесса, в качестве исходного фуксина используют фуксин основный для микробиологических целей, обработку ведут в водной среде, а осаждение - до рН раствора 6 - 7 с использованием в качестве триарилметанового красителя фенолфталеина в водном щелочном растворе.

Изобретение относится к области анилинокрасочной промышленности, в частности к способу получения трифенилметанового красителя, который может быть использован в медицине, в гистологии и гистохимии.
Цель изобретения - повышение чувствительности красителя к гистологическим структурам, времени его хранения и снижение длительности процесса.
В качестве исходного фуксина используют фуксин основной для микробиологических целей, обработку ведут в водной среде, а осаждение - при рН раствора 6-7 с использованием трифенилметанового красителя фенолфталеина в водном щелочном растворе.
П р и м е р 1. Растворяют 1,0 г фуксина основного для микробиологических целей в 50,0 г дистиллированной воды, содержащей 2,38 г концентрированной соляной кислоты (d = 1,19 г/см³), добавляют 1,98 г паральдегида (d = 0,99 г/см³) и перемешивают с помощью магнитной мешалки в герметично закрытой колбе при 20^оС в течение 8 ч, после чего реакционную смесь оставляют на ночь. К раствору, содержащему 50,0 г дистиллированной воды, 1,0 г кристаллической щелочи NaOH и 4,0 г фенолфталеина, добавляют реакционную смесь, приготовленную вышеупомянутым способом, выпавший осадок отфильтровывают и высушивают. Выход красителя в сухой форме составляет 5,1 г, краситель представляет собой фиолетово-синий порошок, хорошо растворимый в спирте и нерастворимый в воде.
П р и м е р 2. Применение красителя. 0,25 г полученного продукта растворяют в 50 г 70%-ного этилового спирта и добавляют 0,5 г концентрированной соляной кислоты (d = 1,19).
Готовят кусочки поджелудочной железы крысы, морской свинки и кролика, заливают их смесью Ружа, затем заливают в парафин и готовят гистологические срезы толщиной 5-6 мкм на микротоме. Далее срезы депарафинируют и проводят окисление в смеси, состоящей из 3,0 г 3%-ного раствора калия перманганата, 3,0 г 3%-ного раствора серной кислоты и 44,0 г дистиллированной воды в течение 0,5-1,0 мин. Затем срезы обеспечивают в 2%-ном водном растворе метабисульфита калия или натрия в течение 20 с, промывают в дистиллированной воде 5 мин.
Окрашивают в вышеприготовленном растворе красителя в течение 2 мин. Далее срезы проводят по спиртам возрастающей крепости (70%, 80%, 96%, 100%), по ксилолу и заключают в полистирол. Результат анализа: в цитоплазме бета-клеток островов Лангерганса обнаруживают специфическую зернистость (гормон инсулин), окрашенную в темно-фиолетовый цвет, в стенках кровеносных сосудов и соединительной ткани выявляются эластические мембраны и волокна, гранулы тучных клеток, а также секрет-муцин в бокаловидных клетках.
П р и м е р 3. Сравнительный пример. Готовят сравнительные растворы для окрашивания срезов: 1-й красящий раствор по Габу содержит 0,25 г альдегидфуксина Габу (порошка), 0,5 г соляной кислоты (d = 1,19 г/см³) и 50,0 г 70% -ного этилового спирта, 2-й красящий раствор (прототип) содержит 0,25 г красителя, полученного на основе фуксина основного для фуксинсернистой кислоты с осаждением эозином К (порошок), 0,5 г соляной кислоты, (d = 1,19 г/см³) и 50,0 г 70%-ного этилового спирта, 3-й красящий раствор - раствор (предлагаемый) приготовленный по примеру 1. 4-й красящий раствор - раствор (предлагаемый), хранившийся после приготовления в течение 11 мес в холодильнике при 4^оС.
Крашение срезов поджелудочных желез крысы, морской свинки и кролика, полученных аналогично примеру 1, проводят в соответствии с операциями по примеру 1, но фиксацию в растворах 1-4 проводят в течение 1 мин, другую часть срезов 2 мин, третьи срезы 5 мин, четвертые 10 мин. Последующая обработка срезов аналогична примеру 1.
Получают следующие результаты: после 1 мин окрашивания в красящем растворе 1 срезы не окрашиваются, в растворе 2 срезы не окрашиваются, в растворе 3 появляются окрашивание эластических волокон и слабая окраска секреторных гранул в бета-клетках. В растворе 4 окрашивания не наблюдают.
После двухминутного окрашивания в красителях 1, 2, 4 окрашивания срезов не происходит, но появляется слабый фон некоторых гистологических структур. В растворе 3 четко и эффективно окрашиваются эластические мембраны и волокна секреторных гранул в цитоплазме бета-клеток островков Лангерганса, гранул тучных клеток, слизистого секрета бокаловидных клеток.
После пятиминутного окрашивания во всех растворах наблюдается окрашивание структур, но по сравнению с раствором 3 значительно более слабое. Интенсивность окраски срезов железы в растворе 3 остается без изменения, что свидетельствует о полном связывании красителя с биологически активными субстанциями тканей поджелудочной железы через 2 мин, причем никакого мешающего фона не наблюдается. Через 10 мин окрашивания интенсивность окраски во всех растворах одинакова, но микроскопированию в растворах 1 и 2 мешает фон, требующий последующей дифференцировки в трех порциях 70%-ного подкисленного спирта.
Таким образом, чувствительность красителя по предлагаемому изобретению и гистологическим структурам наивысшая из испытанных. Это подтверждает пример крашения свежеприготовленным раствором красителя в течение 2 мин клеток паравентрикулярных и супраоптических ядер гипоталамуса и секрета в базофильных клетках аденогипофиза, что подтверждает универсальность красителя.
Хранение красителя в течение 11 мес не нарушило способности его окрашивать гистологические структуры при равном с прототипом времени прокрашивания. Раствор красителя сохраняет красящие свойства, в то время, как краситель Габу и краситель по прототипу полностью утрачивает это свойство и их используют только сразу после приготовления.
Время процесса получения красителя по предлагаемому изобретению составляет 2 сут, красителя Габу 5 сут, красителя по прототипу 4 сут, т.е. время процесса сокращается в 2-2,5 раза.
Изобретение относится к области анилинокрасочной промышленности, в частности к способу получения трифенилметанового красителя для гистологического и гистохимического анализа. Фуксин основной для микробиологических целей обрабатывают паральдегидом в солянокислой среде с послудующим осаждением целевого продукта фенолфталеином. Изобретение позволяет повысить чувствительность к гистологическим структурам и время хранения раствора красителя, снизить длительность процесса в 2 раза засчет проведения обработки в кислой водной среде и проведения осаждения при pH раствора 6 - 7 фенолфталеином в водном щелочном растворе.