Способ оценки качества овулировавшей икры рыб

Изобретение относится к методамоценки качества овулировавшей икры промысловых рыб, преимущественнокарповых пород, и может быть использовано в рыбоводстве для отбора доброкачественной икры перед ее искусственным осеменением на рыбоводныхзаводах.Известен способ оценки качестваовулировавшей икры рыб, основанныйна определении количества неоплодотворенных икринок на стадии крупноклеточной морулы после 4 ч и выживаемости эмбрионов на стадии гаст.рулы после 7-8 ч с момента оплодотворения 1 . 15Недостатками данного способа являются ненадежность и длительностьоценки, За этот период овулировавшая икра, даже при хранении ее принизких температурах, теряет способ Оность к оплодотворению.Кроме того, способ не дает исчер-,пывающей оценки качества икры и непозволяет объективно прогнозироватьее результаты, 25Наиболее близким к предлагаемомупо технической сущности и достигаемому эФФекту является способ оценки качества овулировавшей икры рыбпутем определения ее физиологического, состояния 2 .При осуществлении этого способакритерием физиологического состояния икры является зрелость икры,которую определяют по различной,способности обесцвечивания ею водногораствора метиленовой сини, являющейся индикатором.3Пробу икры в количестве 1 см на5 смз раствора метиленовой сини йомещают в плотно закрывающий бюкс,40перемешивают и выдерживают 10-60 минпри комнатной температуре,Оценку качества икры осуществляют по шкале: незрелая икра - раствор не обесцвечивается; зрелая -обесцвечивание раствора в течение30-60 мин, перезрелая - обесцвечивается через 10-15 мин,Однако известный способ характеризуется недостаточной достоверностью, 5 Отак как метиленовая синь при соприкосновении с воздухом окисляется иобесцвечивается, что приводит к искажению результатов анализа.Кроме того, способ неэффективениз-за трудности его реализации, таккак требует тщательности и внимательности при осуществлении,Целью Изобретения является повышение достоверности и объективностиоценки и ускорение процесса. 45 Эти корреляции позволили разработать эталонную шкалу-тест, распределяющую икру по качеству на три категории: "хорошая", "удовлетворительная" и "плохая",Для растительноядных рыб показатели интенсивности дыхания икры в соответствии с этими категориями имеют следующие значения:л Поставленная цель, достигается тем, что согласно.способу:оценки качества овулировавшей икры рыб, преимущественно карповыхпород, путем 65 определения ее ФИзиологического состояния, овулировавшую икру в количестве 0,3 - 0,35 г помещают втермостатированную ячейку полярографа, подводят к ячейке ток при напряжении О,б - 0,8 В и производят определение интенсивности дыхания овулировавшей икры путем измерения концентрации кислорода, а о физиологическом состоянии икры судят по полученным показателям интенсивности дыхания, сравнивая его с заранее установленными эталонными значения-. миСущность способа состоит в том, что после инъецирования ,самок гипоФизарными инъекциями и получения овулировавшей икры последнюю от каждой самки отцеживают в отдельные стандартные пластмассовые миски и тщательно перемешивают гусиным пером. Икру в мисках ставят на короткое время в холодильник во избежание ее порчи. Небольшую часть икры, навеской не менее 1 г, берут .из каждой миски и помещают в фарфоровые чашки. Номера самок на метках, на этикетках мисок и на чашках должны совпадать.Пробы икры переносят в лабораторию и начинают работу по определению интенсивности дыхания. Навеску икры в количестве 0,3 - 0,35 г помещают-в термостатированную ячейку полярограйа с температурой воды 25 - 25,5 С, перемешивают магнитной мешалкой, а затем к ячейке подводят ток при напряжении 0,6 - 0,8 В и производят определение интенсивности дыхания икры путем измерения концентрации кислорода в"ячейке, поскольку в основе способа лежит принцип оценки общего физиологического состояния овулировавшей икры по такому интегральному показателю ее метаболизма, как интенсивность дыхания.Критерием определения ее служит реакция восстановления кислорода на катоде полярографа. Была установлена четкая корреляционная зависимость между выживаемостью эмбрионов на стадиях гаструлы и предличинок и интенсивностью дыхания овулировавшей икры; чем выше интенсивность дыхания, тем выше выживаемость эмбрионов и наоборот.10 Ц 6-81 где Э - интенсивность дыхания,мкатом о/мин/1 гйи В - число делений шкалы междуточками А и В на полярограм.мах, ограничивающих прямолинейную часть кривой; 501 -В - прирост величины потребляемого кислорода за 0,5 мин;время в минутах, соответствующее этой части кривоймежду точками А и В;биологическая калибровка/ленты),Для определения величины Р передначалом серийных измерений интенсивности дыхания овулировавшей икры производят калибровку электрода,основной целью которой является выяснение того, насколько прямолинейна зависимость между показаниями 65 45 55 Икра "хорошая" 0,401 и вышеИкра "удовлетворительная" 0,4-0,3Икра "плохая" 0,299 и нижеДля карпа данные показатели смещены в сторону относительно более высокой интенсивности дыхания и име ют значение:Икра "хорошая" 0,801 и вышеИкра "удовлет. -ворительная" 0,8-0,5Икра "плохая" 0,499 и нижеВ табл. 1, 2 и 3 приведены данные по сопоставлению интенсивностидыхания овулировавшей икры разных 15 категорий качества с выживаемостью получаемых из нее эмбрионов и пред- личинок для белого амура, белого толстолобика и карпа соответственно.20Из табл. 1 - 3 видно, что чем выше,показатель интенсивности дыхания и, следовательно, лучше качество икры, тем больший процент выживаемости имеют эмбрионы и предличинки.При осуществлении способа в качестве катода используют платиновый электрод, а в качестве электрода сравнения - серебряно-хлоридный.Изучение интенсивности дыхания производят с помощью электрода закрытого типа, который подключают к полярограФу при напряжении О,б 0,8 В и скорости движения ленты самописца 20-40 мм/мин. На Фиг.1 приведены полярограммы интенсивности35 дыхания овулировавшей икры белого амура; на фиг,2 - белого толстолобика; на Фиг.3 - карпа.Интенсивность дыхания икры определяют по Формуле 40 электрода и концентрацией кислорода на участке от нуля до максимальной величины измеряемой концентрации.Биологическую калибровку проводят с помощью дрожжей.На Фиг.2 приведена полярограмма дыхания дрожжей и рассчИтана скорость дыхания (цена одного деления ленты выражена в мкатом о/мин/1 г) .Отклонение пера самописца в раст- . воре без дрожжей от линии остаточного тока (т.е. тока, который остается после исчерпания кислорода в ячейке) дает величинукислорода, который растворен при данной температуре.Судя по граФику на Фиг,2,перо само%исца прописывает за 2,5 мин 81 деление при скорости ленты 40 мм/мин, Следовательно,за 1 мин перо прописывает 81 деление; 2,5 мин=32,4 деления. В 1 мл среды содержится. 0,5 мкА, кислорода (согласно справочным таблицам).Таким образом, Р - цена одного деления (1 мм)ленты соответствует- 0,015 мкА кисделениялорода.Полученную по Формуле величину 0(интенсивность дыхания) сравниваютс эталонной, приведенной в тесттаблицах (табл. 1, 2 и 3),и такимобразом устанавливают качество икры ."плохое",Весь процесс измерения интенсивности дыхания икры и оценки ее качества занимает 10-15 мин.Заключение о качестве овулировавшей икры конкретных самок передаютв инкубационный цех. Если икра порезультатам полярограФического из- .мерения интенсивности дыхания оказывается как хорошая, то ее немедленно оплодотворяют сперлой,а затемзакладывают на инкубацию в водоструйные инкубационные аппараты. Если икраоценивается как удовлетворительная,т(ее также немедленно оплодотворяюти закладывают на инкубацию, которуюпроводят в оптимизированном температурном режиме, чтобы максимальноповысить восход личинок из этой икры.Целесообразно также стилизировать выживаемость икры применениемразличных биологически активных веществ, которые вносят в воду.Если же икра оценивается, какплохая, то ее просто выбраковывают 1используют в качестве пищевого продукта.количество икры 0,30-0,35 г которое используют при осуществлении способа, подобрано эмпирически на основании серии методических Опытовмме 1т 7 дена увеДанная навеска является наиболееоптимальной, так как соответствуетмаксимальной интенсивности дыханияикры при принятых условиях ее измерения и дает наилучшую повторяемость результатов,При меньших навескахикры карповых рыб белый амур, белый топатолобик, пестрый толстолобик, карп и др)интенсивность ее дыхания снижается,а результаты, получаемые при повторных измерениях, становятея неста"бильными. При больших навесках икрыинтенсивность ее дыхания увеличива ется, но не пропорционально увеличению навески, что может исказить 11истинное соотношение между количеством овулировавшей икры и интенсивностью ее дыхания, а значит и повли, ять на достоверность конечных результатов и правильность оценки качест,ва икры.Выбор напряжения тока 0,6-0,8 Вобусловлен тем, что полярографическийметод основан на проведении электролиза исследуемого раствора в электрохимической ячейке и интерпретациизависимости между силой тока и потенциалом электрода.Обязательным условием работы сэлектродом является снятие полярографической волны,Волну снимают по точкам, т.е.начиная от О,последовательно увеличивают напряжение по 0,1 В и послекаждого увеличения выжидают одно ито же время (5 мин) для стабилизации электрода при соответствующемпотенциале. Соединив полученные насамописце точки, получают полярографическую волну - кривую восстановления кислорода фиг.З). Плато предельного тока. диффузии лежит в пределах 0,5-0,8 В,Для определений берут напряжение,которое соответствует плато предельного тока и находится не на перегибах кривой - 0,6-0,8 В,П р и м е р 1. Пробу овулировавшей икры белого амура в количестве0,3 г помещают в термостатированнуюполярографическую ячейку при темперад 0туре воды в ней 25 С и перемешиваютс помощью магнитной мешалки, Затемк ячейке подводят ток и подвергаютикру полярографическому исследованию 10 мин. Изучение инсивностидыхания проводят с помощью электродазакрытого типа, который подключаютк полярографу при напряжении 0,6 В.Скорость движения самописца 40 мм/мин,Полученная в результате исследования полярограмма 1 изображена нафиг,1Величина,1 - 8 на полярограили .5 0 за 0,5 мин составляелений, а за 1 мин эта величи 5личивается вдвоеи составляет 14 делений. Поставив известные величиныв формулу интенсивности дыхания, получим: 0,015 14мнщлО/мин/г- 0,10,12том о,3 г икры 0,396 мк мкатом о/мин на 0катом о/мин 0,33 =мин на 1 г икры.оответствии с табл, 1т отнести к категорииительная", поскольку96 укладывается в пре эту икр следуелетворна 00,3; личилы О,Пример вавшей икры бел ве 0,3 г подвер собом, описанным Полученная п ма 3 изображена Величина -8 на 2,4 деления, 3. Навеску ого амура в гали исслед в примере ри этом пол на фиг.1. на поляро а за 1 ми 0,0154 8.0,0072 мкатом о том о/мин/1 г. В соответстви ру следует отнес качества, постол ниже величины 0 Пример ровавшая икра отЗги венно мка- . ет ,2 чина со /мин 3,и с табл. 1 эту ити к икре плохогоьку величина 0,23299 Былтрех.вз амо овул елого в расчете на 0,3 г икры.Конечные результаты представлены. в расчете на 1 г., поэтому величину 0,21 мкатом/о/мин/1 г следует умножить на 3,3 0,21 мкатом о/мин/1 гю 3,3 = 0,639 мкатом о/мин/1 г на 1 г икры.Согласно табл. 1,эту икру следует отнести к икре хорошего качества, так как величина 0,639 выше величины 0,401, соответствующей .икре хорошего качества,П р и м е р 2. Была взята овулировавшая икра белого амура.Навеску в количестве 0,3 гпомещают в термостатированную полярографическую ячейку при температуре воды 25,5 С. Дальнейшее измерение инотенсивности дыхания осуществляли в течение 15 мин способом, описанным в примере 1, при напряжении тока О,65 В, Скорость движения записываю,щего устройства 40 мм/мин.Полученная при этом полярограмма 2 изображена на фиг,1. Величина 4- 8 на полярограмме равна 4 делениям за 0,5 мин,а за 1 мин - 8 делениям.0 015 мкатом о/мин 8.35,0 44,5 коэффициент корреляционного отношения"фИ - количество серий опытов толстолобика, навески 0,3 г подвергали полярографическому исследованию при температуре 25,5 Снапряжении тока 0,7 В, скорости движения записывающего устройства 40 мм/мин способом, описанным в примере 1 в течение 15 мин. Полярограммы представлены на фиг.2,Расчет интенсивности дыхания осу- . ществляли по формуле, приведенной . выше; При этом были получены следую щие показатели интенсивности дыхания: для первой навески - 0,6435 мкатом о/мин/1 г, .для второй - 0,3465 мкатом о/мин/1 г, для третьей - 0,2475 мкатом о/мин/1 г. 15Согласно табл 2,икру, первой наЬески следует отнести к категории хорошая", второй - "удовлетворитель. ная" и третьей - "плохая".П р и м е р 5. Взята навеска ову( лировавшей икры от трех самок карпа в количестве 0,3 г -каждая.Измерение интенсивности дыхания проводят так же, как в примере 1.Полученные полярограммы представ- р 5 лены на Фиг.З.Расчет интенсивности дыхания показал, что для первой навески. эта величина составляет 0,891 мкатом о/мин/1 г., для второй в 0,7425 мкатом о/мин/1 г, для третьей0,445 мкатом о/мин/1 г. Категории качества овулировавшей икры Интенсивность. дыхания овулировавшей икры мкА кислорода Выживаемость эмбрионов на ста-дии гаструлы, Ъ Выживаемость предличинок, % (сразу после их вылупления) Согласно табл.Зкачество икры первой навески следует признать хорошей, второй - удовлетворительной итретьей - плохой.Ошибка в определении интенсивности дыхания овулировавшей икры в пробах составляет 3 и, следовательно,предлагаемый способ обеспечивает получение результатов с хорошей воспроизводимостью,Способ отличается .простотой ибыстротой определения, нетрудоемок,полученные данные легко обрабатываются, что позволяет заблаговременноперед искусственным оплодотворениемколичественно оценить параметры икры и надежно предсказать результаты оценки.Учитывая быстроту осуществленияспособа, он может быть рекомендованв качестве экспресс-теста на рыбоводных предприятиях с заводским разведением рыб и существенно повыситьвыживаемость эмбрионов и выход предличинок в процессе инкубации икры,Внедрение способа в рыбные хозяйства страны ласт возможность повысить выживаемость личинок в среднем на 5-10 и обеспечить дополнительный выпуск рыбной продукции не ниже 1,2 тыс. т общей стоимостью около 780 тыс. руб.Редактор Т,Митейко каэ 9261/2 но 4/5 лиал ПЧП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Тираж 721 ВНИИПИ Государственного по делам иэобретений 13035, Москва, 3-35, Раушло шкапе саквлисцо(6 усл. е ФВи.З Под омитета СССР открытий ая наб., д.