Способ прогнозирования осложнений тимэктомии у больных миастенией

)5 О 01 й 33/4 ОСУДАРСТВЕ ННОЕ ПАТЕНТНЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ВТОРСКОМУ ЕТЕЛЬСТ ктике за пр ых м , что диаль меди- судар- вания довв э ания ном ении ри НА окисл боль иагно бл. уденЯ ОС ЬНЫХ не, а польривного состояния диание гомеостаза,Возможность ранней диагностики нарушения гомеостаза при тимопривном состоянии у больных миастенией и повышение точности диагностики при использовании заявляемого способа объясняется тем, что предложенные показатели - МДА при спонтанном и НАДФН-индуцированном ПОЛ, характеризующие функциональное состояние клеточных мембран, отражают любые нейроэндокринные изменения происходящие в организме, наступающие задолго до изменений со стороны иммунной системы и в частности те, которые наступают при тимопривном состоянии.Установлено, что тримэктомия в ряде случаев вызывает увеличение содержания малонового диальдегида при спонтанном перекисном окислении липидов и снижение содержания МДА при НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов в(71) Ленинградский педиатрическиицинский институт и Ленинградский гственный институт усовершенствврачей им. С.М.Кирова(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЛОЖНЕНИЙ ТИМЭКТОМИИ У БОЛМИАСТЕНИ ЕЙ(57) Изобретение относится к медиименно к неврологии, и может быть Изобретение относится к медицине, аименно неврологии, и может быть использовано в клинической практике для диагностики нарушений гомеостаза при тимоп ривном состоянии у больных миастенией.Целью предлагаемого изобретения является ранняя диагностика нарушений гомеостаза при тимопривном состоянии у больных миастенией и повышение точности диагностики,Поставленная цель достигается тем, что в способе диагностики нарушений гомеостаза при тимопривном состоянии у больных миастенией путем исследования крови согласно изобретению определяют содержание малонового диальдегида (МДА) при спонтанном и НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов (ПОЛ) в эритроцитах и при увеличении содержания МДА при спонтанном ПОЛ и снижении содержания МДА при НАДФН-индуцированном ПОЛ по сравнению с больными без тимопзовано в клиническои пра стики нарушений гомеоста ном состоянии у больн Сущность его состоит том содержание малонового спонтанном и НАДФН-инд рекисном окислении липи и при увеличении содерж диальдегида при спонтан окислении липидов и сниж малонового диальдегида и цированном перекисном дов по сравнению с тимопривного состояния д рушение гомеостаза, 3 та для диагнои тимопривиастенией, определяют дегида при ованном перитроцитах малонового перекисном содержания ДФ Н-индуении липиными без стируют на 1827623эритроцитах. Это позволяет использовать предложенные показатели для диагностики нарушений гомеостаза при тимопривном состоянии у больных миастенией,Необходимость и достаточность использования 2-х показателей в заявленном способе (содержания малонового диальдегида при спонтанном и НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов в эритроцитах (объясняется тем, что 1-ый показатель - содержание малонового диальдегида при спонтанном перекисном окислении липидов используется для оценки исходного уровня перекисного окисления липидов в клетке, 2-ой показатель - содержание малонового диальдегида при Н АДФ Н-индуци рован ном перекисном окислении липидов, используется для оценки компенсационных возможностей клетки на действие прооксиданта - НАДФН. Сочетание 1-го и 2-го показателей позволяет оценить исходный уровень и возможный резерв адаптации любой клеточной мембраны в ответ на происходящие в организме нейроэндокринные изменения, наступающие при тимопривном состоянии у больных миастенией.Заявленный способ был использован при обследовании 60 больных миастенией после тимэктомии. Для сравнения эти же больные были обследованы с использованием способа-прототипа. В качестве контроля использовали комплексное клинико-электромиографическое обследование, Обследование проводили через 6 месяцев, 1 и 2 года после тимэктомии. Результаты представлены в табл. 1.Из данных табл. 1 видно, что среди обследованной группы больных фвыявления нарушения гомеостаза при тимопривном состоянии у больных миастенией с использованием заявляемого авторами способа диагностики путем определения содержания малонового диальдегида при спонтанном ПОЛ и НАДФН-индуцированном ПОЛ составил 31,5 через 6 месяцев, 78 через 1 год и 90 через 2 года после тимэктомии. Это оказалось в 2,1 раза выше через 6 месяцев после тимэктомии и в 1,4 раза выше через 2 а года после тимэктомии, чем при диагностике нарушений гомеостаза при тимопривном состоянии у больных миастенией с помощью способа диагностики используемом в прототипе. Нарушение гомеостаза, наблюдаемое при тимопривном состоянии у больных миастенией подтверждено также и данными контрольного обследования, Данные таблицы 1 свидетельствуют также о том, что способ- прототип практически не обеспечивает воз 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 можность диагностики нарушений гомеостаза на ранних стадиях после проведения тимэктомии выявляемости составляет 15), тогда как заявленный способ обеспечивает на ранних стадиях от 31,5 до 78 выявляемости нарушений гомеостаза. Данные авторов заявляемого решения также показывают, что в ряде случаев даже через 2 года после тимэктомии нарушения гомеостаза не выявляются, что по-видимому можно объяснить развитием компенсаторных сдвигов, происходящих в организме,Таким образом, именно предложенная совокупность признаков обусловливает появление у заявляемого решения нового свойства - возможность оценки нейроэндокринных изменений в организме по функциональному состоянию клеточных мембран, что обеспечивает возможность ранней диагностики нарушений гомеостаза при тимопривном состоянии у больных миастенией и позволяет повысить точность диагностики в 1,2 - 1,4 раза.Способ осуществляется следующим образом; 5 мл, взятой у больного крови стабилизируют гепарином 25 ЕД/мл. Плазму, лейкоциты и тромбоциты отделяют центрифугированием при 1500 об/мин в теч.10 минут с последующим их удалением из пробирки, Выделенные таким образом эритроциты троекратно промывают охлажденным физиологическим раствором, центрифугируют при 1500 об/мин, в теч.10 минут, каждый раз тщательно отсасывая надосадочную жидкость. Состав реакционной среды при спонтанном перекисном окислении липидов - 37 мкМ трис-НС, 262 мкМ КС (рН 7,4), 0,3 мл. плотно отцентрифугирован н ых эритроцитов. Конечн ый объем среды 1,89 мл. При НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов в среду дополнительно вводят 1 мкМ НАДФН. Исследуют содержание малонового диальдегида при спонтанном и НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов, Инкубацию реакционной среды с выделенными эритроцитами проводят при температуре 37 С, в течение одного часа. После инкубации к исследуемой пробе добавляют 1,9 мл. 15 раствора трихлоруксусной кислоты и 0,1 мл 0,04 ЭДТА, после чего пробирки помещают в ледяную баню. Осадок отделяют центрифугированием. К 2 мл полученного надосадка приливали 2 мл 0,5 раствора 2-тиобарбитуровой кислоты и помещали в кипящую баню на 10 мин. Пробы охлаждают в ледяной бане, после чего измеряют оптическую плотность пробы на спектрофотометре СФ - 26 при длине волны 532 нмпротивдистиллированной водой. Сравнивают полученные значения со значениями соответствующих исходных показателей у больных миастенией без тимзктомии. Исходные показатели - содержания малонового диальдегида при спонтанном и НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов были получены при обследовании 30 больных миастенией без тимэктомии. Содержание малонового диальдегида при спонтанном ПОЛ у больных миастенией составляет 0,044 - 0,002 опт.ЕД, Содержание малонового диальдегида при НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов у больных миастенией без тимэктомии составляет 0,099 + 0,003 опт.ЕД, При достоверном увеличении значений показателей (содержания малонового диальдегида) полученных при спонтанном и НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов у больных миастенией с тимопривным состоянием по сравнению с больными миастенией без тимопривного состояния диагностируют нарушение гомеостаза. Достоверным считали отклонения выходящие за интервал Хд,П р и м е р 1. Больная Е., 24 года, жен., ИБ 4672, клиника нервных болезней Лен.ГИДУВа. Диагноз: Миастения, генерализованная форма, средней степени тяжести, Тимэктомия 88 г. Длительность заболевания 3 года, Проводимая терапия: прием антихолинэстеразных параметров, Диагноз миастении подтвержден дополнительными методами обследования: электромиография, исследование функции вилочковой железы метионином, положительнаяя фармакологическая проба.Согласно заявленному способу определяли содержание малонового диальдегида при спонтанном и НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов в эритроцитах. Способ осуществляли следующим образом: 5 мл взятой у больного крови стабилизировали гепарином 25 МЕ/мл. Плазму, лейкоциты и тромбоциты отделяют центрифугированием при 1500 об./мин, в течение 10 мин, с последующим их удалением из пробирки, Выделенные таким образом эритроциты троекратно промывали охлажденным физиологическим раствором, центрифугировали при 1500 об,/мин в течение 10 мин, каждый раз тщательно отсасывая надосадочную жидкость. Состав реакционной среды при спонтанном перекисном окислении липидов: 37 мкМ трис- НС 262 мкМ КС 1(рН 7,4), 0,3 мл плотно отцентрифугированных эритроцитов, Ко 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 нечный объем среды 1,8 мл. При НАДФН- индуцированном перекисном окислении липидов в среду дополнительно водили 1 мкМ НАДФН. Исследовали содержание малонового диальдегида при спонтанном и НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов, Инкубацию реакционной среды с выделением эритроцитов проводили при температуре 37 С в течение одного часа, После инкубации к исследуемой пробе добавляли 1,9 мл 15 раствора трихлоруксусной кислоты и 0,1 мл 0,04 М. ЭДТА, после чего пробирки помещали в ледяную баню. Осадок отделяли центрифугированием. К 2 мл полученного надосадка приливали 2 мл, 0,5; раствора 2-тиобарбитуровой кислоты и помещали в кипящую баню на 10 минут, Пробы охлаждали в ледяной бане, после чего измеряли оптическую плотность на спектрофотометре СФ - 26, при длине волны 532 нм. против дистиллированной воды. Значения показателей содержания малонового диальдегида при спонтанном и НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов представлены в табл. 2. Результаты исследования продуктов перекисного окисления липидов при спонтанном и НАДФН-индуцированном ПОЛ выражали в процентах принимая за 100 содержание МДА при спонтанном и НАДФН-индуцированном ПОЛ больных миастенией без тимопривного состояния.Изданныхтаблицы видно, чтоуже через 6 месяце после тимэктомии у больного наблюдается достоверное повышение содержания МДА при спонтанном ПОЛ до 125 по сравнению с исходным значением 100 при достоверном интервале15 и достоверное снижение МДА при НАДФН-индуцированном ПОЛ до 82;4 по сравнению с исходным значением - 100;, при достоверном интервале + 13 . Таким образом, заявляемый способ позволяет диагностировать нарушение гомеостаза уже через 6 месяцев после тимэктомии,Для сравнения проводили обследование больного по способу-прототипу. Для этого определяли содержание Т и В лимфоцитов с помощью метода розеткообразования с эритроцитами барана и концентрацию иммуноглобулинов в сыворотке крови А, С, М методом радиальной иммунодиффузии в агаре по МАИСИ, Исходные значения показателей были получены авторами заявляемого решения при обследовании 20 больных миастенией без тимэктомии. Из данных таблицы видно, что все оцениваемые показатели иммунного статуса остались без существенного изменения напротяжении всего периода наблюдения, что не позволяет определить нарушение гомеостаза у больного миастенией после тимэктомии.В качестве контроля использовали комплексное клини ко-электромиографическое исследование(Б.М.Гехт и соавторы "Ранняя диагностика и лечение миастении и миастенических синдромов" методические рекомендации, Москва, 1987 г,). Полученные данные позволили подтвердить нарушение гомеостаза на уровне медиаторных систем у обследуемой больной.Таким образом, диагноз, поставленный по заявляемому способу подтверждается данными контрольного обследования, Способ-прототип не позволяет выявить нарушения гомеостаза.П р и м е р 2. Больной П 29 лет, муж., ИБ 4525, клиника нервных болезней Лен.ГИДУВа. Диагноз: Миастения, генерализованная форма, средней степени тяжести, Тимэктомия 1986 г. Длительность за боле ван ия 5 лет. П роводимая терапия; прием антихолинэстеразных препаратов. Диагноз миастении подтвержден дополнительными методами обследования: электромиография, исследование функции вилочковой железы метионином, положительная фармакологическая проба. Согласно заявляемому способу определяли содержание малонового диальдегида при спонтанном и НАДФН-индуцированном перекисном окислении липидов в эритроцитах. Способ осуществляли так же, как и в примере 1. Для сравнения проводили обследование больного по способу-прототипу. В качестве контроля использовали комплексное клиникоэлектромиографическое исследование, Полученные результаты представлены в табл. 3,Изданныхтаблицы видно, чтоуже через 6 месяцев после тимэктомии у больного наблюдается достоверное повышение содержания МДА при спонтанном ПОЛ до 130 по сравнению с исходным значением 100, при достоверном интервале + 15 и достоверное снижение МДА при НАДФН-индуцированном ПОЛ до 80 по сравнению с исходным значением - 100 , при достоверном интервале + 13 . Таким образом, заявляемый способ позволяет5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 диагностировать нарушение гомеостаза уже через 6 месяцев после тимэктомии.Для сравнения проводили обследование больного по способу-прототипу. Дляэтого определяли содержание Т и В лимфоцитов и концентрацию иммуноглобулинов вышеописанным способом, Из данных таблицы видно, что оцениваемые показатели иммунного статуса оставались без существенного изменения на протяженийпервого года после тимэктомии и только через 2 а года после тимэктомии были выявлены значимые изменения отдельных показателей иммунного статуса (количество Т и В лимфоцитов, а также концентрация иммуноглобулинов класса А и С), что позволило диагностировать нарушение гомеостаза у больных миастенией после тимэктомии.В качестве контроля использовали комплексное клинико-электромиографическое исследование. Полученные данные позволили подтвердить нарушение гомеостаза на уровне нейромедиаторных систем у обследуемого больного.Таким образом заявляемый способ позволяет осуществить раннюю диагностику, достоверность которой подтверждается данными контрольного обследования, Способ-прототип не обеспечивает ранней диагностики.Использование заявленного способа обеспечивает возможность ранней диагностики нарушений гомеостаза при тимопривном состоянии у больных миастенией и позволяет повысить точность диагностики в 2,1 - 1,4 раза по сравнению со способом-прототипом за счет возможности оценки нейроэндокринных изменений в организме по функциональному состоянию клеточных мембран. Достижение положительного эффекта подтверждается актом апробации,Формула изобретения Способ прогнозирования осложнений тимэктомии у больных миастенией путем исследования крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ранней диагностики и повышения точности способа, определяют содержание малонового диальдегида в эритроцитах до и после обработки НАДФН, Н, и при увеличенном содержании малонового диальдегида в эритроцитах без воздействий и сниженном после обработки НАДФН,Н по сравнению с нормой прогнозируют развитие осложнений тимэктомии.10 1827623 Таблица 1 Табл и ца 2 Способ об- следования Исслед. по- ед. измер. Больные миастенией после ТЭказатели без ТЭ 6 мес 2 г. 1 г,Заявляемый сод. МДА при спонт. ПОЛ% 100% 125% 147% 170% сод. МДА при НАДФ Н-индуцир. ПОЛ% 8% 8,5% 9% 9% иммуноглобул иное мкмоль/л А 1 1,3 10,3 10 С М 73,8 72,8 72 73 1,42 1,45 1,3 1,3 Контроль комплексное клинико-электро миографическое об- следование выявлено нарушение медиаторного гомеостаза1827623 12 Таблица 3 Больные миастенией Способ об- Исслед. последования казатели ед. измер. без ТЭ после ТЭ 6 мес 1 г,2 г,Заявляемый сод. МДА при спонт. ПОЛ% 15 О% 165% сод, МДА при НАДФ Н-индуцир, ПОЛ 1 ОО%мкмоль/л 1 1,0 1 1,0 10 8,0 72,8 71,5 С М 71 65,5 1,3 1,0 1,2 1,2 Редактор Заказ 2357 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, ЖРа шская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Контроль комплексное клинико-электро миографическое об- следование выявлено нарушение нейромедиаторного гомеостаза Составитель В.ЛобзинТехред М.Моргентал Корректор Г.Кос