ZIP архив

Текст

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 2 М 9/46 12 й 9/46, 1/112 й 1/66) ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТВЕДОМСТВО СССР(5 ТНОЕ ЕТЕ ИСАН ЕЛЬСТВУ АВТОРСКОМ няться в пищевой промышленности и ине. С целью упрощения способа и ения процесса эа счет сокращения в культивирования продуцента в питаую среду, на которой выращивают мицет Азрегдоз пзцешз ВКПМ Р- носят в качестве индуктора синтеза раназы и источника углерода культуую жидкость .еосопоз 1 оз гпезепте- ВКПМ Вс содержанием декстра мг/мл и редуцирующих веществ мг/мл. Преимущество предлагаемого ба заключается в доступности и легкоиготовления индуктора, снижении его нтрации в питательной среде в 1,5-2 сокращении сроков культивирования цента в ферментере на 18 ч при сохравысокого уровня декстраназной ак- (/) сти до 80 ед./мл, 6 табл. приме медиц ускор сроко тельн микро 342 в 54) СПОС 57) Изоб ии, а име назы и СО 8-581 10-12; МаКОз - 0,3; КС - 0,05; Мд 304 7 Н 20 - 0,05; КН 2 Р 04 - 0,1; автолизат дрож- О жевой или ферментолизат биомассы микро- р организмов - 0,2-0,5; рН 5,0-5,2 (вода - остальное), Культивирование ведут в течение 84 часов в колбах на качалке (180 об/мин) или 42-48 часов в ферментере при поотоянном перемешивании (200 об/мин), ); аэрации - 1 объем воздуха/1 обьем сре- а ды/мин и температуре от 29 до 31 С, В качестве посевного материала используют 48- часовой инокулюм, полученный в колбах на питательной среде вышеприведенного состава,Таким образом, декстран вводится в питательную среду непосредственно в составе культуральной жидкостиецсопоз 1 ос(71) Институт микробиологии АН БССР и Научно-производственное объединение "Биотехнология"(72) А.Г.Лобанок, О.Н,Зинченко, Г,А.Молодова, Т.И.Данилова, А.К.Хасирджева, В.И.Шило, З,А.Рожкова, Е.И.Беленькая, И.И,Кюдулас, О,Е,Анченко и В.И,Лауцюс (56) Авторское свидетельство СССР М 896069, кл. С 12 й 15/00, 1980.Авторское свидетельство СССР М 1756355, кл. С 12 й 9/64, 1987. ОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕКСТРАНАЗЫ ретение относится к биотехнолонно к способу получения декстраз .ми к роми цетов, и может Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения декстраназы иэ микромицетов. Фермент может найти применение в пищевой промышленности при переработке сахарной свеклы, пораженной слизистым бактериоэом и для приготовления профилактических средств против кариеса зубов.Целью изобретения является упрощение способа и ускорение процесса за счет сокращения сроков культивирования продуцента.Способ заключается в том, что продуцент Азрегдцз пзце(оз ВКПМ Р 342 выращивают на оптимизированной среде следующего состава в мас. (: культуральная жидкостьецсопозтос (пезептегосез ВКПМ ральн госез на 24- 30-60 спосо сти пр конце раза, проду нении тивно 1808873 А 118088733везептего 1 без беэ его предварительного мг/мл, редуцирующих веществ - 30 мг/мл, выделения и очистки. Причем используют Наряду с декстраном она содержит автоликультуральную жидкость определенного, зованные клетки бактерий, фруктозу, обраэкспериментально обоснованного состава, зовавшуюся из сахарозы в процессе а именно с содержанием декстрана от 24 до 5 синтеза декстрана, а также другие продукты 32 мг/мл и концентрацией редуцирующих жизнедеятельности бактерий 3 леземевеществ от 30 до 60 мг/мл. Кроме того, мно- гоЫез, которые могут служить дополнительгократными экспериментами установлено, ным источником углерода для продуцента что культуральная жидкость 3 везеп 1 е- декстраназы. Содержание декстрана в пиго 1 без является хорошим индуктором синте тательной среде, приготовленной на основе за декстраназы,лишь для А.1 пзцемз ВКПМ 1 лезеп 1 егоЫез составляет 0,25 о , В контР 342,рольных вариантах в качестве индукторэ исП р и м е р 1. Получение культуральной пользуют декстран в концентрации 0,25 и жидкости 3 лезептего 1 без. 0,5%.3.лезептего 1 без культивируют на пита Дестраназную активность измеряют в тельной среде следующего состава (%): КС 1 глюкозных единицах, Результаты приведе - 0,01;: 9504 7 Н 20 - 0,01; КН 2 РО 4 - 0,1; ны в табл.2.Ма 2 НРОд 12 Н 20 - 0,25; ИНЕС - 0,05; пеп- Из представленных результатов видно, тон - 0,02; дрожжевой экстракт - 0,1; саха- что грибы Реп 1 с 1111 цгп рзсаг 1 цт, Репс 31 цв роза или меласса - 10, вода - остальное. 20 1 цп 1 сц 1 озцт, Яр 1 саг 1 а чо 1 асеа и дрожжи Культивирование осуществляют в колбах 3 1 ропч 1 сез зр. накапливают максимальное Эрленмейера беэ аэрации и пер 6 Мешива- количество фермента на средах с декстрания при температуре от 24 до 26 С. Количе- ном в количестве 0,5%. На среде с культу- ство декстрана в культуральной жидкости ральной жидкостью активность гораздо определяют, осаждая его этиловым спиртом 25 ниже, Культивирование А 1 пзцевз ВКПМ Г- и высушивая до постоянного веса при 342 на питательной среде с 10% культураль ОС. Результаты опыта приведены в . ной жидкости 3 лезептего 3 без позволяет табл,1 достичь такого же уровня накопления деПредставленные в табл,1 результаты кстранэзы в среде, как при использовании в показывают, что при культивировании на 30 качествеиндукторадекстрана.среде с мелассой(отход сахарной промыш-П р и м е р 3, Культивирование А 1 пзцленности, содержащий сахарову) обрэзова- е 1 цз на средах с декстраном и культуральние декстрана идет хуже, чем на среде с ной жидкостью 3 лезепсего 1 без ВКПМ В- сахарозой, Максимальное количество пол.исахарида в обоих случаях накапливается к 35 Культивирование проводят в колбах Зр часам культивирования и составляет нэ ленмейера на качалке при температуре от сахарозе от 29,8 до 30,0 мг/мл, на мелассе 39 до 31 С в течение 4 суток на среде, содердо 17,2 мг/мл. жащей кроме индуктора следующие компоП р и м е р 2, Культивирование рэзлич- ненты (%): автол изат дрожжевой - 0,3; ных продуцентов декстраназы на питатель йайОз - 0,3; КН 2 РОа - 0,1; КС 1 - 0,05; ных средах с декстраном и культуральной М 9304 7 Н 20 - 0,05; вода - остальное, рН жидкостью 3.везепсего 1 без. 5,0-5,2. В качестве индуктора используютВ качестве продуцентов используют на- йолиглюкин или культуральную жидкость иболее активные в образовании декстрана- часовой культуры 3 лезептегоЫез, ползы культуры РепсПцв рзсаг 1 цв БИМ 45 ученную на питательной среде с сахарозой Г, Реп 1 сИПап 1 цп 1 сцозца 15, Ярсага или мелассой, Результаты представлены в ч 1 о 1 асеа ВКПМ Р 464, Азрегц 1 Ицз 1 пзцевз табл,3.ВКПМ Р 342 и 3.1 рогпусез зр Из данных, представленных в табл.З,Культивирование НроДуцентов прово- видно, что при культивировании продуцента дят в колбах на питательных средах опти на среде с полиглюкином максимальный мального для кйждого йродуцента состава, уровень активности (от 80 до 83 ед/мл) .на- В качестве Индуктора используют культу- блюдается только при концентрации этого ральную жидкость 3.лпезеп 1 его 3 без в коли-полисэхарида в среде от 0,5 до 1,0 о . Исчестве 10 о ;которуополучают,культивируя пользование в качестве индуктора культу- бактерию в течение 48 ч на среде с 10055 ральной жидкости 3,спезептего 1 без, сахарозы. Перед добавлением в питатель- полученной на среде с сахарозой, позволяет нуюсредукультуральнуюжидкостьавтокла" достичь такого уровня активности уже при вируют. Концентрация декстрана в концентрации декстрана 0,26(10 кч;ькультуральной жидкости составляет 25 туральной жидкости), Оптимальной для накопления декстраназы концентрацией10 15 20 25 30 35 40 4550 культуральной жидкости в питательной среде является 10-12;. Снижение или повышение ее содержания в питательной среде для культивирования А,1 пзцетцз приводит к уменьшению активности декстраназы. Культуральная жидкость 1.глезеп 1 его без, полученная на питательной среде с мелассой, не обеспечивает активный синтез декстраназы А,1 пзцетцз и не может быть использована в качестве индуктора,П р и м е р 4, Культивирование А пзцешз на питательной среде с культу- ральной жидкостью 1.гпезепегос 1 ез различного состава.В опытах используют полученную на питательной среде с сахарозой 48-часовую культуральную жидкость 1,пезеп 1 егос 1 ез ВКПМ В, различающуюся по содержанию декстрана (от 20 до 32 мг/мл) и редуцирующих веществ (от 30 до 100 мг/мл), Культуральную жидкость вносили в питательную среду в количестве 10;4. Результаты представлены в табл.4,Из таблицы видно, что определяющее значение имеет концентрация декстрана в культуральной жидкости, При содержании декстрана ниже 24 мг/мл декстранаэная активность в среде не достигает своего максимального значения,Концентрация декстрана от 24 до 32 мг/мл позволяет достичь уровня активности от 78,0-82,0 ед/мл, Существенное значение имеет и концентрация редуцирующих веществ(РВ), В примерах 3-7 она находится в интервале от 38 до 60 мг/мл и не влияет отрицательно на накопление декстраназы, В случаях, когда концентрация.РВ составляет от 70 до 100 мг/мл, происходит репрессия синтеза декстраназы, даже если концентрация декстрайа при этом оптимальная.П р и м е р 5, Культивирование А.пзце 1 цз ВКПМ Рв ферментере,Состав питательной среды (в мас,о ): культуральная жидкость 1.тезеп 1 егоЫез - 12 или полиглюкин - 0,5; автолизат дрожжевой - 0,3; ИаКОэ - 0,3; КН 2 Р 04 - 0,1; КС 1 - 0,05; М 9 Я 04 7 Н 20 - 0,05; воды - остальное, рН 5,0-5,2. Аэрация - 1 объем воздуха/объем среды/мин, Перемешивание - 200 об/мин, температура культивирования 30. +1. Результаты эксперимента и редставлены в табл,5. Представленные в табл,5 результаты показывают, что при использовании в качестве индуктора культуральной жидкости 1, щезеп 1 егоЫез синтез декстраназы происходит более интенсивно и максимум накопления фермента наблюдается к 42-48 часам, в то время как в известном способе максимал ьный уровень активности декст раназы - 63-80 ед/мл удается достичь эа 60-70 часов культивирования в ферментере.П р и м е р 6. Культивирование А,пзце 1 цз ВКПУ Ев колбах,Культивирование проводят в колбах Эрленмейера объемом 250 мл со 100 мл питательной среды такого же состава, как в примере 5, на качалке со скоростью 180 об/мин при температуре 30 1". Результаты приведены в табл.6,Из данных, представленных в табл,б,видно, что и при культивировании в колбах на питательной среде с к,ж, 1,везепегоЫез максимум накопления декстраназы наблюдается раньше, чем при культивировании на питательной среде с полиглюкином,Таким образом, преимуществами предлагаемого решения по сравнению с известным являются; доступность и легкость приготовления индуктора; снижение его концентрации в питательной среде в 1,5-2 раза, сокращение сроков культивирования продуцента в ферментере на 18 ч и в колбах на 12 ч при сохранении высокого уровня декстраназной активности,.Формула изобретения Способ получения декстранаэы, предусматривающий глубинное культивирование продуцента Азрег 911 цз 1 пзцетцз ВКПМ Гв аэробных условиях на питательной среде, содержащей индуктор декстраназы, автолизат дрожжевой, минеральные соли и воду, до максимального накопления активности декстраназы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа и ускорения процесса за счет сокращения сроков культивирования продуцента, в качестве индуктора синтеза декстраназы и основного источника углерода используют 9-15 мас.; культуральной жидкости бактерииецсопозтос везептего 1 без ВКПМ Вс содержа- . нием декстрана 24-32 мг/мл и редуцирующих веществ 30-60 мг/мл.1808873Таблица 1 Динамика накопления декстрана при культивировании , пзезеп 1 егоМез на среде с сахарозой и мелассойаблица 2 Культивирование различных продуцентов на питательных средах с декстраном и культуральной жидкостью-581 1,гпезеп(егобез ВКблица 3 тивировэние А,пзое 1 цз на средахличнымн укторам1 О 1808873 Продолжение табл,З. Таблица 4 Культивирование А.пзоетцз на питательной среде с культуральной жидкостью лпезептегоЫез различного состава Таблица инамика накопл кости АЛпзцесоз ния активности в культуральной жидпри культивировании в ферментере12 1808873 Продолжение табл,5 Динамика накопления декстраназы при культивировании А. 1 пэце 1 ц ВКПМ Ев колбахРедактор В.Трубченко Составитель В,СоинаТехред М.Моргентал Корректор М,Петров акаэ 1258 Тираж. Подписное ВНИИПЙ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Произво венно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина,

Смотреть

Заявка

4486435, 26.07.1988

ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ АН БССР, НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ "БИОТЕХНОЛОГИЯ"

ЛОБАНОК АНАТОЛИЙ ГЕОРГИЕВИЧ, ЗИНЧЕНКО ОЛЬГА НИКОЛАЕВНА, МОЛОДОВА ГАЛИНА АЛЕКСЕЕВНА, ДАНИЛОВА ТАТЬЯНА ИВАНОВНА, ХАСИРДЖЕВА АЛЬБИНА КОНСТАНТИНОВНА, ШИШЛО ВАЛЕНТИНА ИВАНОВНА, РОЖКОВА ЗОЯ АФАНАСЬЕВНА, БЕЛЕНЬКАЯ ЕЛЕНА ИВАНОВНА, КЮДУЛАС ИГНАС ИППОЛИТОВИЧ, АНЧЕНКО ОЛЬГА ЕФИМОВНА, ЛАУЦЮС ВИКТОРАС ИОНОВИЧ

МПК / Метки

МПК: C12N 1/14, C12N 9/46

Метки: декстраназы

Опубликовано: 15.04.1993

Код ссылки

<a href="https://patents.su/6-1808873-sposob-polucheniya-dekstranazy.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения декстраназы</a>

Похожие патенты