Способ контроля аллергенности живых гриппозных вакцин

(КОМИТЕТИ ОТКРЫТИЮ 17 Г 1 К 391 и)з А 6 /45 ГОСУДАРСТВЕИСЬПО ИЗОБРЕТЕ ИРПРИ ГКНТ СССР СПЙСДЙ АВТОРСКОМ(21) 4711040/1337) Изобретение относится к медицинской (22)26,06.89 . , . промышленности, биотехнологии, вакцин- (46) 07;01.92, Бал. В 1 ": "но-сывороточному производству и может . .,: (71)1-йЛенйнградский медицинский инсги- быть использовано при производстве вактут им. акад. И.П.Павлова и Ленинградский цинных препаратов на основе куриных зглб.- научно-исследовательский институт вакцин рионов. Целью изобретения является и сывороток- ";. .:,- повышение точности и ускорение способа, (72) В.И.Трофимов, А,И,Крашенюк, Л.Н.Да- Для этого испытуеглые вакцины в виде аэро- нилов; В;С.Сергеев, В.П.Бондаренко, золя вводят собакам, предварительно сен- Э.Г.Лукьянова, БЛО.Трекало и М.Л.Филип-: сибилизированным овальбумином. При: пова -: : . :,; . определенной пороговой концентрации(53) 576.8.097.2(088.8) .: . -. :.: ": ,овальбумика в препарате живой гриппозной вакцины(ЖГВ) у собак не развивается(56) Перадзе Т.В. и др. Противогриппозные приступа бронхоспазма. При содержании профилактические препараты. - М,: Меди- овальбумина в ЖГВ выше пороговой велицина, 1986, с. 186.:,.:. чиныу собак развивается бронхоспазм, что сАвторское свидетельство СССР, :. выражается в виде реакции "затрудненногоЬ 1334080, кл. О 01 И 33/48, 1987" . выхода", Выбор экспериментального кивоОачз В. Реруз О. Е 99. аегцу,пйоепга тного обусловлен тем, что собаки не болеютчасспе апб гпщцпо 9 оЬопе апОЬосуз, - ,. гриппом, Изобретение может быть исполь- Аег 9 у,1976,ч.57, Ь 4, р.373-383.. зовано для контроля различных вакцин с Яаэрозольным способом введения, в техно (54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ АЛЛЕРГЕННО-логии производства которых используют ку-СТИ ЖИВЪХ ГРИППОЗНЫХ ВАКЦЛН риные эмбрионы. 4 табл. дО ЪИзобретение относится к медицинскойпромышленностибиотехнологии, вакцин. но-сывороточному производству и можетбыть использовано при производстве вак цинных препаратов на основе куриных змбрионов,Известен способ оценки алларгизирую.щих свойств инактивированных гриппозныхвакцин путем сецснбилизации морских свиок овальбумином с последующим введением им ингктивированной гриппознойвакцины (ИГВ). При содержании в образцах Я ИГВ овальбумина в концентрации выше 5яика мкг/мл у морских свинок возникает выраженная анафилактическая реакция при парентеральном введении препарата, ьИзвестен также способ определения аллергенных свойств сорбированных гриппозных вакцин, содержащих овальбумин. Суть изобретения состоит в .определении гомоцитотрогалых реагийовыхантител, которые выявляютея у экспериментальных животных на 7-8 сут после введеня испытуемых препаратов.- едостатком известных способов явля- на котором регистрируюи уют показатели фуцкется то, что они не могут бить применены ции дыхания, Показая, оказателем нарушениядля Оценки аллер;зиругоших свойств жи- . Оронхиальцой проходимости явр ходимости является сни гриппозных вакцин, поскольку.все ИГВ 5 жение обьемной сорости потока выдоха зьвводятс, парентерально (подкожно или 1 с более, чем 20-250,по сравнению с исвнутрикожно), Все и.-;вестные методы про- ходной Для исключенлючения неспецифическихверки аллергенностя вакцин являготсл чрез- возд"йствий на броронхиальную проходивычайцо трудоемкими и длительными, мость и индивидуаС, видуализацию этого показатеуществуют подходы по оценке аллер ляусобакзаписываю ис"д ; ют исходные показателигизации 1 л В по появлению антител к оваль- проходимости бронхов. Затем проводят инумину у привитьгт экспериглентальных галяцию 5 мл физиологическо оического раствора и. животцых или по появлению в сыворотках регистрируют в течение 15 мин, показатели. таких животных имиуноглобулинов Е -ОЕ проходимости брон . 3, бу Ъронхов. то время выбраноОднако прил 1 еняеглие при этом методы яв экспериментал но с учетом воздухообменаляотся сложными и длительными, что за-, и полного использоваи льзования ингалируемоготрудняет определение качества ИГВ по вещества. После этого собакам проводяталлергенцости. ицгаляциго овальбумином различных конЦель изобретения - повышение точно- центраций, приготовленных на физиологисти и ускорение способа, . 20 ческом растворе, Используют следующйеДля этого испытуемые вакцины вводят: концентрации овальбумина в 5 мл физиолособакам, предварительно сенсибилизиро- гического раствора: 100, 200, 500, 1000 иванным овальбумциом, в виде аэрозоля. 2000 мкг табл. 1),При определенной порошковой концентра- . Как следует из табл. 1 собаки обладаютции Овальбумина в ггрепарате живых грип индивидуальной способностью реагироватьпозных вакцин ЖГВ) у собак не на овальбумин, что учитывают при испытаразвивается приступа бронхоспазгла. При нии аллергизирующих свойств ЖГВ.,Вместесодержании овальбумийа в ЖГВ выше по- с тем установлено, что минимально провороговой величины у собак развивается цирующаядозасоставляет 100 мкгв 5 мл,т,спазм бронхов, что вьгражаетсяв виде реак е, концентрация овальбумина 20 мкг/мл,ци 1 "затруднецного выдоха". Выбор экспе- Предварительные опыты с использованиемриментального животного Обусловлен тем, меньших доз(25-50 мкг в 5 мл) не выявляютчто собаки не болеют гриппом. реакции у всех собак, Кроме того, как следур и м е р 1. Оценка чувствительности ет из табл, 1, максимальное удлинение прособак к овальбумину, .:.35 должительности выдоха на ингаляциюИспользугот бесгсродцых собак - сам- плацебо (физиологический раствор) не пре. цов в возрасте 3-4 лет, весом 20-25 кг, Сен-вышает 25;6 от исходного уровня,сибилизациго овальбумином препаратом При проведении опытов по испытаниоПО "Олейне" пятикратной кристаллиза- различных серий.ЖГВ получены результации) проводят по следующей схеме; началь ты, представленные в табл. 2.ная доза 4000 мкг на каждую собакуподкожно в холку, каждые две недели дозу . П р и м е р 2, Условия экспериментаувеличивалина 400 мкгдодостижения 2000 Описаны рацее в примере 1, Собаке Ь 2мкг, т, е. 5 иньекций с интервалом в 2 неде- производят ингаляцию ЖГВ производствали. Затем вводят труды подкожно ежеце Одесского предприятия и ЛенНИИВС со 1дельно по 2000 мкг, после чего собак держащих различные концентрации овальиспользуютвэксперименте.Для цоддержа- бумина в 1 мл, и изучают реакциюния уровня сенсибипцзации за две недели бронхиального дерева на ингалируемыедо проведения эксперимента собак сецси- ЖГВ (табл,2).билизируют, вводят 1 раз в неделю по 400 50мкг овальбумина, Из табл. 2 следует, что зкспериментальЗксперимейт прсоодят следующим Об- ный препарат ОЧиЩЕннОй ЖГВ ЛенНИИВСне вызывает бронхоспастической реакциираэом,Сооак наркотизируют введением внут- сенсибилизировэцной собаки (/выд,(25;.ривеннотиопентала гглрия 1;-ного 50 - 100 55 В то же врегля вэкцица Одесского предпримл ца собаку, По дос-.я+енин тркоза собак ятия вызываю у эксперемонтального живо-интубируют, с помощью у образной трубки тного четко выраженное снижениеподключают к ультразвуковому ицгалятору показателей броцхиальцой проходимости0,)-50 ГДР) и пневг-,Отахографу с трубой фЧвглд67,7 к 15 мин) и клинически ы"А" Флейша йвейцася) объемом 1 л/с; к раженный броцхоспазм.17 О 3121 ВТаблица 1 Ход зксперимента Показатели проходимости бронхов (Чвдоха/Чвыдаха),л/с Собака; о(-25/-32 -36/-45 -38/-45 0,21/0,150,18/0,120,17/0,12П р и м е р 3. Изменение показателейбранхиальной проходимости после ингаляции ЖГВ приведены в табл. 3.Условия эксперимента описаны ранее впримере 1.Как следует из табл. 3, у сенсибилизированнай собаки М 2 зкспериментальный пре, парат очищенной ЖГВ ЛенНИИВС невызывает бронхоспастической реакции (Чвыд.25 Я В то. время как у собаки М 3 ,вакцина Одесского предприятие вызывала резкое снижение показателей проходимости бронхов ( Ь Чвыдг 69 ф 5 на 10 мин), что сопровождается клиническими признаками бронхаспазма (удлиненный .выдох). Сухие хрипы при аускультации.П р и м е р 4, Условия экспериментаописаны ранее в примере 1,Из табл, 4 следует, что зксперименталь:ная вакцина ЖГВ ЛенНИИВС не вызываетзначительного изменения показателей про, 6ходимасти бронхов (Увыд. 25) у сенсибилизированнай собаки К. 5. После ингаляции ЖГВ Одесского предприятия отмечаются значительные изменения показателей про ходимости бронхов у сенсибилизированнойсобаки М 4 ( Л У=39 Я которая нерезко : реагировала и на ингаляцию чистого овальбумина (табл, 1),Формула изобретения 10 Способ кон",роля аллергеннасти живыхгриппозных вакцин, включающий введение вакцины в организм животного, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, изхивотных 15 используют собак, предварительно сенсибилизираванных овальбумином, введение осуществляют ингаляцианным способом, об аллергеннасти судят по снижению бронхиальнай проходимости более, чем на 25% по 20 отношению к исходному значению этого показателя.7703121 Таблица 3 аблица Состааитель И. ТарееааТехред М.Уоргеитал Корректор Л. Бескид ербер Реда кто лц при ГКНТ СС оизаодстоенно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 1 каз 12 Тираж ВНИИПИ Государственного комитета 113035 Уоскаа Ж