Способ прижизненного определения массы гонад у самок рыб

рыб и у рыб, кишечник которых заполнен пищей. Кроме того, способ может быть применен только в период предшествующий нересту.Цель изобретения - повышение точности и возможности определения массы гонад в любое время года.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу прижизненного определения массы гонад у самок рыб, исследуемых рыб разделяют на группы так, чтобы индивидуальная масса рыб в группе не превышала или не была ниже средней массы на 250 г, у рыб берут кровь и в сыворотке определяют суммарное содержание гонадотропных гормонов, имеющих иммунохимическое средство к хорионическому гонадотропину, а о массе гонад судят сравнивая полученные данные с предварительно построенной калибровочной кривой, отражаюшей зависимость массы гонад рыб данной весовой 40455055 Изобретение относится к рыбоводству, а именно к способам искусственного рыборазведения, и может быть применено в рыбоводной практике, ихтиологии, фунгологии и генетике для црижизненного определения массы гонад у самок рыб.Известные способы прижиненной оценки степени развития гонад у одноразмерных самок дают только ориетировочные данные, хотя отбор производителей перед получением потомства с высокой плодовитостью и боЛьшими гонадами имеет большое практическое значение в рыбоводной практике.Известен способ прижиненного определения массы яичника рыб, а также индивидуальной плодовитости путем взвешивания 15 самок до и после икрометания 1.Недостатки способа заключаются в неприменимости его для отбора самок перед икрометанием, поскольку данный метод предполагает взвешивание самок и сравнение их массы до .и после икрометания, в длительности способа из-за необходимости ожидания в течение нескольких дней или недель начала икрометания у рыб и в недостаточной точности из-за отсутствия учета массы гонад, остающихся в самке после 25 икрометания.Наиболее близким к изобретению по технической сущности является способ прижизненного определения массы гонад у рыб, основанный на визуальной оценке и применяюшийся во время бонитировки самок в зависимости от степени готовности их нереста, при этом самки оцениваются по степени развития брюшка, по его мягкости, отвислости, по заметности припухлости в области гетитального отверстия, а массу гонад примерно определяют на глаз 2.Однако известный способ имеет низкую точность, .не дает возможности определить степень развития гонад у жирных группы от содержания в сыворотке гонадотропных гормонов.Группировка рыб по массе с интервалом +. 250 г является оптимальной для предлагаемого способа, поскольку более значительный интервал приводит к значительному увеличению статической ошибки метода, а меньший - к излишней дробности группировки, не способствующей повышению точности определения.Для каждой весовой группы предварительно строят калибровочную кривую, отражающую зависимость массы гонад от содержания в сыворотке крови суммарного содержания гонадотропных гормонов, имеющих иммунохимическое средство к хорионическому гонадотропину (ХГ).На фиг. 1 изображена зависимость массы гонад самок белого толстолобика от содержания в сыворотке крови гонадотропного фактора, имеющего иммунохимическое сродство к ХГ, у производителей массой 2,6 - 3,0 кг. Построенная калибровочная кривая имеет сложный криволинейный характер, Как видно из представленных данных самки белого толстолобика массой 2,6 - 3,0 кг имеют в одно и то же время года (весной) гонады разной массы от 10 до 190 г, т. е. у разных рыб разброс различий достигает 19 раз, в то время как суммарное содержание гонадотропных гормонов, имеющих иммунохимическое сродство к ХГ, колеблется у разных рыб в пределах 0,8 - 12 МЕ/мл.На фиг, 2 изображена зависимость массы гонад самок белого толстолобика от содержания в сыворотке суммарного содержания гон адотропных гормонов, имеющих иммунохимическое сродство к ХГ, у производителей массой 3,8 - 4,3 кг. Как видно из представленных данных самки белого толстолобика такой массы точно также имеют в одно и то же время года (весной) гонады разной массы от 30 до 390 г, т. е. они различаются у разных рыб почти в 13 раз, в то время как суммарное содержание гонодотропных гормонов, имеющих иммунохимическое сродство к ХГ, колеблется у разных рыб в пределах 1 - 20 МЕ/мл, т. е. в 20 раз.На фиг. 3 изображена зависимость массы гонад большеротого буффало (представитель семейства чукучановых рыб) от суммарного содержания в сыворотке крови гонадотропных гормонов, имеюших вммунохимическое сродство к ХГ, у самок длиной 37,5 - 40,5 см и массой 1,0 - 1,5 кг. Как видно из представленных данных самки. большеротого буффало таких размеров имеют в одно и то же время года (весной) гонады разной массы от 3 - 5 до 190 г, т. е. у разных самок они различаются в 38 - 63 раза.Такие большие различия в массе гонаду одноразмерных самок обычно всегда имеет место у впервые созревающих рыб, когдаодни рыбы достигли половой зрелости, адругие нет. Суммарное содержание в сыворотке крови гонадотропных гормонов, имеющих иммунохимическое сродство к ХГ, у этих рыб колеблется в пределах 0,3 - 30 МЕ мл, т. е. почти в 100 раз.На фиг. 4 изображена зависимость массы гонад самок мозамбийской тиляпии (представитель окунеобразных рыб) от суммарного содержания в сыворотке крови гонадотропных гормонов, имеющих иммунохимическое сродство к ХГ, у самок массой 0,8 - 1,3 кг. Как видно из представленных данных самки тиляпии в одно и то же время года (зимой) имеют гонады разной массы от 0,2 до 11 г, т. е. у разных самок они различаются в 55 раз. Суммзрное содержание в сыворотке крови гонадотропных гормонов, имеющих иммунохимическое род ство к ХГ, у этих рыб колеблется от 0,15 до 14 МЕ /мл, т. е. почти в 90 раз.Из представленных кривых видно, чтокаждому уровню содержания гонадотропных гормонов в сыворотке крови соответствует вполне определенное значение массы гонад. На основании эмпирических точек, построив калибровочную кривую, один раз можно с довольно высокой точностью определять массу гонад у самок определенной весовой группы. ЗООшибка предлагаемого способа не превышает при этом 10 - 12 О 1 О, что является обычной ошибкой в биологических методах тестирования.Самок рыб, массу гонад которых следует определить, отсаживают на сутки в проточную воду для освобождения кишечника от пищи, затем из хвостовой вены шприцем с толстой иглой берут кровь от каждой самки и получают из нее сыворотку.В сыворотке крови определяют суммарное 40 содержание гонадотропных гормонов, имеющих иммунохимическое сродство к ХГ, и, сравнивая полученные показатели с пред. варительно построенными калибровочными кривыми, находят массу гонад данной самки.Пример 1. Проводят прижизненное опре деление массы гонад у впервые созревающих самок белого толстолобика. Отловленные самки на основании определения индивидуальной массы были рассортированы и выделена наиболее интересная для исследователей в данный момент группы из четырех самок с массой 2,9 +0,1 кг. С помощью шприца с толстой иглой для взятия крови из хвостовой вены берут от 0,8 мл крови от каждой самки и известным путем получают сыворотку крови. В лунки специальной 55 иммунологической планшетки помещают разное количество полученной сыворотки от 1, 11, 111 и 1 У рыбы по 0,025; 0,05; 0,1 и 0,2 мл от каждой рыбы соответсвенно, Доводят объем в каждой лунке до 0,8 мл 0,02 М фосфатным буфером рН 6,4 и в каждую лунку добавляют по 0,1 мл суспензии стандартного препарата агглютината сенсибилизированных ХГ эритрсцитов.Для определения суммарного содержания гонадотропинов в сыворотке крови белого толстолобика, имеющих иммунологическое сродство к ХГ, строят специальный калибровочный ряд со стандартным препаратом гонадотропина хорионического с известной активностью, внося в каждую лунку другого ряда планшетки по 0,1; .0,25; 0,50;0,75; 1,0; 1,5; 2,0, 2,5; 3,0, 3,5, 4,0 и 5,0 МЕ ХГ.В каждой лунке объем доводят до 0,8 мл 0,02 М фосфатным буфером рН 6,4 и в каждую лунку добавляют по 0,1 мл суспензии стандартного препарата агглютината сенсибилизированных ХГ эритроцитов. После добавления агллютината сенсибилизированных ГХ эритроцитов содержимое всех лунок планшетки тщательно перемешивают и помещают планшетку в холодильник, в котором полностью отсутствует вибрация при автоматическом включении и выключении его, мешающая образованию четких зон преципитации, при температуре +4 С, Через 6 ч путем сравнения интенсивности реакции агглютинации (ширины кольца преципитации) в различных концентрациях стандартного препарата ХГ и в. различных концентрациях сыворотки крови белого толстолобика визуально, как например принято при определении концентрации гемоглобина в крови или денситометрически на микроденситометре ИФО в 4, определяют суммарное содержание гонадотропинов в крови самок. Установлено, что у 1 самки общее суммарное содержание гонадотропинов в крови составляет 2 МЕ/мл, у П самки - 5 МЕ/мл, у 111 самки - 3 МЕ/мл, а у 1 У самки - 10 МГмл. Пользуясь имеющейся калибровочной кривой зависимости общего содержания гонадотропинов в крови белого толстолобика, имеющих иммунологическое сродство к ХГ, и массой гонад у самок массой 2,6 - 3,1 кг (фиг. 1, устанавливаем, что у 1 самки масса гонады составляет 77 г, у 11 самки - 142 г, у 111 самки - 114 г и у 1 У самки - 175 г. Для контроля забиваем одну из самок (1). Контрольный анализ показал, что масса яичника у 1 самки составляет в действительности 71 г (иммунологический метод показал 77 г). В данном случае ошибка метода не превышает 10 О 1 О.Пример 2. Проводят прижизненное определение массы гонад у трехлеток большеротого буффало. Отловленные самки на основании определения индивидуальной массы были рассортированы в группы с колебанием массы рыб в каждой группе, непревышающим + 250 г. Одна из выделенных групп имела массу 1250+ 250 г. Из этой группы были отсажены 5 интересующих исследователей в данный момент самок в разные емкости (аквариумы).С помощью шприца с толстой иглой для взятия крови из хвостовой вены берут по 0,7 мл крови от каждой самки и известным путем получают сыворотку крови. В лунки специальной иммунологической планшетки помещают разное количество полученной сыворотки от 1, 11, 111, 1 Ч и Ч рыбы по 0,025; 0,05; 0,1 и 0,2 мл от каждой самки. Доводят объем в каждой лунке до 0,8 мл 0,02 М фосфатным буфером рН 6,4 и в каждую лунку добавляют по 0,1 мл суспензии стандартного препарата агглютината сенсибилизированных ХГ эритроцитов.Для определения общего содержания гонадотропинов в сыворотке крови большеротого буффало, имеющих иммунологическое средство к ХГ строят специальную калибровочную кривую со стандартным препаратом гонадотропина хорионического с известной активностью, внося в кажду лунку другого ряда планшетки по 01; 025; 050; 075; 10; 15; 20; 25;3,0; 3,5; 4,0 и 5,0 МЕ ХГ. В каждой лунке объем доводят до 0,8 мл 0,02 М фосфатный буфером рН 6 4 и в каждую лунку добавляют по 0,1 мл суспензии стандартного препарата агглютината сенсибилизированных ХГ эритроцитов. После до бавления агглютината сенсибилизированных ХГ эритроцитов содержимое всех лунок планшетки тщательно перемешивают и помещают планшетку в холодильник, в котором полностью отсутствует вибрация при автоматическом его включении и выключении, при температуре +4 С. Все последующие операции проводят аналогично операциям, описанным в примере 1. Установлено, что у самки 1 общее содержание гонадотропинов в сыворотке крови, имеющих иммуно логическое сродство к гонадотропину хорионическому, равно 30 МЕ /мл, у 11 самки - 10 МЕ/мл, у 111 самки - 15 МЕ/мл, у 1 У самки - 20 МЕ/мл, а уУсамки 5 МЕ(мл. Пользуясь калибровочной кривой, отражающей общего содержания гонадо тропинов в сыворотке крови большеротого буффало, имеющих иммунологическое сродство к ХГ и массой гонад у самок массой 1000 - 1500 г (фиг. 3), устанавливаем что у 1 самки масса гонад составляет 180 г, 50 у 11 самки - 120 г, у 111 самки - 145 г, у 1 Ч самки - 160 г, а у Ч самки 64 г. Для контроля забиваем одну из самок, выбранную произвольно (11). Контрольный анализ показал, что истинная масса гонад у 11 самки составляет 128 г (им мунологический метод показал 120 г). В данном случае ошибка метода не превышает 10/ц. Пример 3. Отловили двух самок тиляпии неразличающихся по внешним признакам, у которых необходимо установить массу гонад, чтобы отобрать лучшую самку для получения икры и мальков (естественно с большими гонадами), Самок поместили на сутки в проточную ванну без корма для освобождения кишечника от пищи, после чего их взвесили и установили, что масса первой самки составляет 0,95 кг, а второй 0,92 кг. С помощью шприца с толстой иглой для взятия крови из хвостовой вены взяли 0,6 мл крови от каждой рыбы и известным путем получают сыворотку. В пробирку с закругленным дном или в специальную планшетку с лунками поместили разное количество сыворотки от первой и второй рыбы: по 0,025; 0,05 и 0,15 мл. Довели объем в каждой лунке до 0,8 мл 0,02 М фосфатным буфером рН 6,4, Все последующие операции проводят аналогично операциям, описанным в примере 1. Установлено, что у первой самки общее содержание гонадотропных гормонов, имеющих иммунохимическое родство к ХГ, составляет 13 МЕмл, а у второй - 2 МЕ/мл. Пользуясь калибровочной кривой зависимости содержания гонадотропного фактора, имеющего иммунохимическое родство к ХГ, и массой гонад тиляпии (фиг. 4), устанавливаем, что у первой самки масса гонад составляет 10 г, а у второй 3,8 г.Для контроля забили одну самку тиляпии и путем взвешивания установили действительную массу яичников у этой рыбы.Контрольный анализ показал, что масса яичника у первой самки составилиа 10,2 г (иммунохимический метод показал 10 г).Ошибка предлагаемого способа не превышает 10 - 120/О,Наиболее перспективной областью ихтиологических и рыбоводных исследований, в которых может быть применен предлагаемый способ прижизненного определения массы гонад у самок рыб, является формирование высокопродуктивных маточных стад ценных видов рыб. В данном случае экономическая эффективность от внедрения предлагаемого способа определяется тем, что при осуществлении способа достигается снижение трудоемкости и стоимости за счет возможности строгого отбора самок только с большой массой гонад за один раз, например, во время весенней бонитировки маточного стада, когда экстерьерные признаки еще недостаточно развиты. Проведение такого целенаправленного весеннего отбора полностью снимет бонитировку маточного стада перед нерестовым сезоном, т. е.сократит трудоемкость в 2 раза.Способ расширит сезонные возможностиотбора среди.,одноразмерных самок рыб с более развитыми гонададами (более высокойплодовитостью). Планомерный отбор наиболее высокоплодовитых самок, особенно среди впервые сорезвающих рыб, можно проводить не только перед проведением нерестовой компании (как это делается в настоящее время), но и в более благоприятное время для сортировки рыбы осенее-зимнее или зимне-весеннее, при более низких температурах и в более удобное для рыбхозов время, когда нет других работ. Кроме того, проведение сортировки рыбы при более низких температурах (в осенне-зимнее или зимне-весеннее время) значительно сокращает на 15 - 20% отход производителей после ее проведения, чхо позволит сократить на 15 - 20% количество отсаживаемых в ремонт и в маточное стадо рыб для проведения нерестовой компании по следующий год. Соответственно, уменьшение количества рыб в маточном стаде при том же конечном биологическом эффекте (количестве полученной молоди) позволит, кроме того, сэкономить 15 - 20% кормов./Способ способствует повышению точности отбора, так как известные методы оценки степени развития гонад у одноразмерных самок перед нерестом могут давать ошибку в 1,5 - 2,0 раза, в то время как предлагаемый метод дает ошибку не более, чем 10 - 12%.Использование предлагаемого способапозволит снижать количество самок, необходимых для получения определенного количества икры и молоди ценных видов рыб.При одинаковом количестве используемых самок предлагаемый способ повышает в 1,5 - 2,0 раза количество молоди, приходящейся на одну использованную самку, причем снижается количество не только ис пользуемых для получения определенногоколичества молоди самок, но и снижает соответственно и затраты дорогостоящего но гормонального препарата, необходимого для получения икры. Так для получения икры от одной самки белого толстолобика мас сой 4,0 - 4,5 кг необходимо ввести ей ХГ насумму 2,4 руб. В случае экономии 600 самок от инъекций в одном только рыбхозе экономия от стоимости ХГ соответственно составит около 1440 руб.Соста Техред Тираж А. Бобк 7/2 ВНИИПИ Государств по делам изобр 113035, Москва, Ж - 3 иал ППП Патент, г