Способ выращивания актиномицетов

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскизСоциапистическикРеспублик//С 12 Р 1/06 3 Ъоударстеенные кантат СССР ао делаю нзобретеннй н открытнй(72) Авторы изобретения Н. К. Джангалина, И. Х. Шигаева и Н. Б, АхматуллинаФьКазахский ордена Трудового Красного Знаменигосударственный университет им. С. М.",Кироваи Институт микробиологии и вирусолой"АН Казахской ССР(54) СПОСОБ ВЬЗРАЩИВАНИЯ АКТИНОМИЦЕТОВ 1Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам выращи.вания актиномицетов,Известен способ выращивания актииомицетов на питательной среде. Сти"5муляция роста достигается тем, что посев выдерживают в магнитном поле околсдвух недель 11,Недостаток этого способа - егодлительность. оНаиболее близким по техническойсущности и достигаемому эффекту кпредлагаемому является способ выращивания актиномицетов на питательнойсреде, содержащей кукурузную муку икрахмал, необходимые минеральные солив условиях аэрации среды.Согласно известному способу культуру продуцента Асс,дг 1 зецз выращивают.на качалке в колбах с питательной средой, содержащей кукурузнуюмуку, крахмал, сернокислый аммоний,хлористый натрий, фосфорнокислыйкалий, мел и энантовую кислоту (для разобщения процесса окислительного Фосфорилирования) в течение 36 ч. Выращенный. посевной материал переносят на засев питательной среды того же состава в посевной аппарат, где культура выращивается при 27+1 оС в течение 18-20 ч. Готовый"посевной материал переносят в ферментеры со стерильной питательной средой того же состава. Ферментация длится 48- 55 ч 21.Недостатком известного способа является то, что он не обеспечивает получение посевного материала в короткие сроки, протекает недостаточно интенсивно, а выход антибиотика относительно невысок и составляет всего 9600 мкг/мл.Цель изобретения - ускорение прироста биомассы актиномицетов и интенсификация биосинтеза антибиотика.Поставленная цель достигается тем, что в способе выращивания актиномицетов на питательной среде, со3 939544 держащей кукурузную муку, крахмал и необходимые минеральные соли в условиях аэрации среды, в качестве стимулятора роста используют Й-метил-Й- -нитро"Й-нитрозогуанидин или Й-нитрозоэтилмочевину в концентрации соот-6ветственно 1) 10 -310 мг/л и 1 10 - 3 10 мг/л.П р и м е р 1. Выращивают Асй.9 й 1 зец 5 шт Р- 110 на синтетичес 1 кой среде следующего состава,3: йайО 0,1; КС 0,05, КНРО 4 380 О, 1; М 904 7 Н зО О, 05, сахароза 3, водопроводная вода до 100 мл, рН,6. Приготовленную среду разливают в кол з бы емкостью 750 мл по 100 мл, стерилизуют автоклавированием при 0,8 атм в течение 40 мин. Затем в колбы вносят стерильно раствор Й-метил-й-нитро-й-нитрозогуанидина в концен о трации 2,510 мг/л, приготовленный Таблица 1. иомдссд) мг/лтимулято онцентрация, мг/л 11 пасаж, ч пассаж.,Й 8 т т т.1 О-5 1 О10 П р и м е р 3, Инкубируют Асе.цг 1 зецз шт, Р- 110 на питательной среде следующего состава,4:кукурузная мука 2,0; крахмал 1,5; в сернокислый аммоний 0,5-0,6; фосфорнокислый калий 0,03; повареннаясоль 0,2, мел 0,5, железо сернокислое 0,025, вода водопроводная до100,0. Приготовленную среду разливаы ют в колбы емкостью 750 мл по 100 мл,стерилизуют автоклавированием при1,2 атм в,течение 40 мин, затем в колбы вносят стерйльно раствор Й-метилП р и м е р 2. Выращивают Ясй.дгзеоз шт . Р- 110 аналогичнымобразом, но в синтетическую средудобавляют раствор й-нитрозоэтилмочевины в концентрации 2,5 .10 мг/л,приготовленный на фосфатно-цитратномбуфере (табл. 1), Наивысшие показатели биомассы при использованииэтого стимулятора в концентрации2,5 1 О мг/л превышают контроль на130. Степень стимуляции приростабиомассы граничными концентрация".: меньше,на фосфатном буфере, и споровуюсуспензию (или кусочек картофельногоагара с культурой) Ас.цг 1 зецз шт.Р- 110, Засеянные колбы ставятна качалку (220 об/мин) и выращиваютпри 27 ф 1 оС (1 пассаж.). Через 72. чинкубирования выращенный мицелийпередают на засев питательной средытого же состава и следят за накоплением биомассы (11 пассаж.). Количество биомассы определяют общепринятым весовым методом,В табл. 1 приведены данные о влиянии нитрозосоединений на накоплениебиомассы культурой Асс.цг 1 зецз шт.Р- 110 на синтетической среде .Как видно из табл, 1, количество биомассы продуцента через 24 чкультирования во втором пассаже при4концентрации стимулятора 2,5 10 мг/лсоставляет 3003. ),-Й-нитро-М-нитрозогуанидина в концен- тательной среды приведенного состава трации 2,510 мг/л и суспенэию (или, . в аппарат с посевной средой, где кусочек картофельного агара с куль- выращивают вегетативный посевной турой), Асй, ог 1 зецз Р-110. За- материал в течение 18-20 ч. Готовым сеянные колбы ставят на качалкуо5 посевным материалом засевают колбы (220 об/мин) и выращивают при 271 С с ферментационной средой того же в течение 18-24 ч (вместо положенных состава. Антибиотическую активность 36 ч). Выращенный в колбах посев- определяют методом диффузии в агар с тестной материал передают на засев пи- организмом Вас.зцЬ 111 з АТТСС 6633. Таблица 2 Антибиотикообразование шт. Р-110 при добавлениистимулятора в посевную среду Концентрациястимулятора,мг/л френментационная среда Посевйая среда Контроль" Числитель - использование 18-часовознаменатель - использование 24-часоматериала.Как видно иэ табл, 2, влияние стимулятора на антибиотикообраэование в граничных пределах вызывает меньшую стимуляцию.40П р и м е р 4. Выращивают Йсй.цг 1 зецв шт. Р-110 аналогичным го посевного материала,вого посевного образом, на в посевную среду добавляют раствор й-нитрозоэтилмочевиныв концентрации 2,510 мг/л, приготовленный на фосфатно-цитратномбуФере. Т а б л и ц а 3 Антибиотическая активность шт. Р-110 Асй.цг 1 зецзпри добавлении стимулятора в посевную среду3 Конц стим мг/л Контроль-нитро-й-нитрозогаунидина, приготовленный на фосфатном буфере,в концентрации 2,5 10 мг/л.Таблиц а 4.шт. 223-70 ФУ Асй, уг 1 зевьв посевную среду. Антибиотическая активность при добавлении стимулятора Концентрация стимулятора, мг/л Ферментационная среда Посевная среда Контроль%Числитель - использование 18-часового посевного материала,знаменатель - использование 24-часового посевного материала Данные табл. 4 показывают, что при 5внесении стимулятора в посевную среду с культурой щт. 223-70 ФУ увеличивается антибиотическая активность проду"цента на 132 и сокращается сроквыращивания посевного материала на 5 В 12-18 ч.Таким образом, предлагаемый способ выращивания микроорганизмов с внесением в посевную среду малых 1 доз нитрозосоединеняй интенсифици рует прирост биомассы и биосинтез антибиотика. Иаксимальное увеличение биомассы при введении нитрозоДанные табл. 3 показывают, что при использовании стимулятора в концентрации 2,5 10 мг/л сокращается срок выращивания посевного материала на 12-18 ч и увеличивается антибиотикообразование на 1514. Граничные концентрации НЭИ оказывают меньаую стимуляцию.-6 гуанидина в концентрации 2,5 10 мг/л составляет 3007., а нитрозоэтилмочевины в концентрации 2,5 1 О мг/л 130. Иаксимальное стимулирование процесса биосинтеза антибиотика при внесении. нитрозогуанидина в концентрации 2,5 10 мг/л на Ферментационной регламентной среде составляет 1353 и при введении нитрозоэтилмочевины в концентрации 2,510 мг/л 151.Изобретение дает возможность сократить срок выращивания посевного материала на 12-18 ч по сравнению с известным способом,9формула изобретения 939544 10 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРИ 200122, кл. С 12 К 1/06, 1964.о2. Авторское свидетельство СССРй 675070, кл. С 12 0 9/00, 1976. Составитель В, Голимбет Техред и, Тепер Корректор М. Шароши Редактор Л, филь Заказ 4599/40 Тираж 505 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "патент", г. Ужгород, ул, Проектная,Способ выращивания актиномицетов на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал, необходи мые минеральные соли, в условиях аэрации среды, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения прироста биомассы актиномицетов и интенсификации биосинтеза антибиотикаа, в каче ст ве стимулятооа поста используют М-метил-М-нитро-М-нитрозогуанидин или М-нитрозоэтилмочевинув концентрациях соответственно110 - 3 .10 мг/л и 110 -3 10 мг/л.