Способ количественного определения микробактерий

) Авторизобретен Ф,В. Пе отивотуберкулезный диспансер 11 16 г. Москвы 71) Заявител ОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ива зобретения Целба. Ука ние споая цельуществлео опредеприготов стигаетс и способ ния мико ния мазк риала, ф ледующим анием пр и при м и подсчи тем, коли- актев из ксации микро- парато что при о чественно рий путем патологич ского мат ния, с по и окра скопическим иссле кроскоывают отовятическом ные ма едован 1Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике и оценке тяжести микобактериозов.Известен способ количественного определения микобактерий путем приго 5 товления мазков иэ патологического материала, Фиксации окрашивания с последующим микроскопическим исследованием препаратов ИОднако известный способ трудоемок отребует большого времени исследоместа максимального скопления мико" бактерий,Способ осуществляют следующим образом.Мазки иэ исследуемого материала приготовляют, как обычно для диагнос-. тического обнаружения микобактерий микроскопией, т.е. препаровальными иглами или другими инструментами выбирают подозрительные участки мате. риала (гнойные комочки и т.п.), переносят на предметное стекло и другим предметным стеклом распределяют равномерным слоем между обоими стеклами. Полученную пару мазков маркируют и укладывают дпя просушки и Фиксации на подогреваемую до 0-90 С поверхность. Практически фиксации достигают за 30-60 мин. фиксированные препараты закрепляют по 8- 10 пар в специальные струбционообразные держатели. Окраску раствором аурамина-родамина, промывку, обесцвечивание серной кислотой и солянокислымэтаыолом и докрашивание метиленовойсиней проводят погружным методом,что необходимо для получения сравнимых величин подсчета микобактерий. Микроскопию ведут в люминесцентном освещении при малых 14 средних увеличениях с проверкой олигобациллярного материала под иммерсионным объективом (90 х), Одновременнс обнаружением микобактерий определяют, просмотрев бегло весь мазокпри малом увеличении, место наиболь шего скопления (концентрации) иикобактерий, в котором производят подсчет только в одном поле зрвния,Это число принимают за показательколичества кислотоустойчивых бактерий в исследуемом материале.П р. и и е р 1 Доставленные. для ана лиза образцы мокроты 10 больных разбирают в чашках Петри с помощью игл или уголков предметных стекол, гото" вят парные мазки из каждого образца помещают после маркировки на подогреваемую поверхность на 30-60 мин, По охлаждении закрепляют в держателе, прослаивая прокладками из нарезанных предметных стекол, погружают на 15 мин в раствор аурамина ХХ 00+родамина С (первого 1,0 г; второго 0,1 г на 1 л воды) при комнатной температуре. После окрашивания мазки опускают для ополаскивания в стакан с водопроводной водой, затем на 5-10 мин погружают в 5/-ный водный раствор серной кислоты, на 2 мин переносят в 34-ный солянокислый этанол, После ополаскивания погружением в стакан с водой переносят в 0,1 ф-ный водный раствор метиленовой 40 синей на 2 мин, после чего дают стечь краске и ставят для просушки. Иикроскопию, не откладывая, производят в люминесцентном освещении (светоФильтры на осветителе СЗС, СЗС"745 и ФС, на окуляре ЖС- 1). В зависимости от видимости пользуются увеличениями 100-200 раз (объектив 10-20 х, окуляр 7- 10 х), Одновременно с обнаружением светящихся тел, про 50 верив морфологию при иммерсии 90 х, подсвечивают ориентировочно число микобактерий в поле зрения, Олигобациллярные мазки просматривают при малом увеличении по всей площади для выявления единичных островков в пре 55 парате с большими скоплениями микВНИИПИ Заказ 5535 Тираж Способ количественного определениямикобактерий путем приготовления мазков из патологического материала, фиксации и окраши ва ния с последующим ми кроскопическимисследованием препаратов, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что,. с целью ускорения способа, гото.вят парные мазки и при микроскопическом исследовании подсчитывают места максимального скопления микобактерий.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Афанасьева Ю.ПКузнецова В.И.Динамика бактериовыделения в процессе химиотерапии у больных туберкулезом легких. - "Проблемы туберкулеза", 1977, Н 12, с, 32-36.505 Подписное Филиал ППП "Патент". г. Ужгппп ,Патентф Зак, Я ро 939543фробных клеток. Обязателен просмотрпарного мазка, являющегося контролем анализа. Расхождения в парныхмазках, как. правило, невелики. Результат подсчета является показателем количества выделяемых больным микобактерий, Принятые градации: МБТ+1,МБТ+2, МБТ+5,.МБТ+1 О, МБТ+20, МБТ+30о и ИБТ+ИН (много),. При исследовании1 о нескольких. мазков принимают во вни-.мание наибольший показатель данного.материала. В примере получены следующие данные: 1) МБТ т + 1+2; 2) МБТ:/мазки на предметных стеклах из мозга,печени, почек, асцитической жидкости, селезЕнки золотистого хомячка,зараженного живой вакциной БЦЖ, Обработка препаратов и оценка результатов такая же, как и в примере 1, Результаты: мозг ИБТ: +1+2, легкоеИБТ: +5+5, печень ИБТ; +20+30, почкаИБТ: 0 О, асцитическая жидкость ИБТ:+1+3, селезенка ИБТ: +20+30.Таким образом, предлагаемый споив соб сокращает время исследования до3 ч, в то время как при примененииизвестного способа необходимо 23,36 ч обеспечивать возможность исследования до 100- 150 образцов материала одним сотрудником за рабочий деньи повышение чувствительности бактериоскопического подсчета мик обактерий,Формула изобретения