Штамм гриба fusаriuм oxy sроruм (sснlеснт) snyd. ет наns. var. оrтносеrаs (арр ет w ) в, используемый для оценки сои на устойчивость к фузариозу

(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм гриба Гцзагца охузрогцп 1, используемый для создания искусственного фона при оценке сои на устойчивость к фузариозу, Целью изобретения является получение нового штамма гриба, обладающего более высокой вирулентностью по отношению к сое. Штамм гриба Рцзаг 1 оа охузрогцгп (зсЫес зпуд. ет Напз чаг. огйосегаз(арр, ее, пг) В 1 а 693 - 4 выделен иэ растений сои, пораженных фузариозом, идентифицирован по сис еме Билай В. И., депонирован в коллекции ВНИИСХМ под ЬЬ 36. В полевых условиях при заражении устойчивой линии сои ВИР -К - 8845 через почву вирулентность штаммаЕозагоа охузрогца М 693 - 4 (ВНИИСХМ36. превышала вирулентность природногоизолята 693 на 12,60 ь. 4 табл. Культурально-морф одого-биохимические и Хорошо растет на фельно-декстрозном аг ванных отходах овса, п 1 среде Чапека при паве ном культивировании. При культивировав агаре при 22 - 25 С в теч ся колонии размером 7,ровными краями, миц плотный, обратная сто новая. Макроконидии о день культивирования, клеточные, обильные об ном мицелии (7,0 М,04 промежуточные и вер неокрашенные.алогические и физириэнаки штамма.сусло-агаре, картоаре, на стерилизоиеницы и на жидкойрхностном и глубинГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР У СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Институт экологической генетики АНМССР.(56) Простакова Ж. Г. и др. Патогенная микрофлора сои. Кишинев, 1986, с, 11 - 19, 57.Методика оценок устойчивости сои к болезням и вредителям (Методические рекомендации СГИ) /Под ред. Бабаянц Л. Г.,Одесса, 1985, с, 30,(54) ШТАММ ГРИБА Р ЗАЯ 10 МОХУЯРОЯОМ (ЯСН ЕСНТ) ЯИУО. ЕТ НАМЗЧАЯ. ОЯТНОСЕЯАЗ (АРР. ЕТ, В/Я) В 1.А 1, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЦЕНКИ СОИ НА УСТОЙЧИВОСТЬ К ФУЗАРИОЗУ Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм гриба Розаг 1 оа охузрогоа (зс)1 есп) зпуб. ес. Напз, чаг, огйосегаз (арр. е 1. ччг) Ва, используемый для создания искусстввнного инфекционного фона при оценке сои на устойчивость к фуэариозуЦель изобретения - получение нового штамма, обладающего более высокой вирулентностью по отношению к сое.Штамм гриба Гцзагоа охузрогца (зс)1 есп) зпуб, е 1, Напз чаг. оп)осегаз(арр. ес. Яг) В 1 а 693 - 4 выделен из растений сои, пораженных фузариозом, идентифициро-. ван по системе Билай ВИ, депонирован в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии под М 36. ии штамма на сусло- ение 7 сут образуют - 7,3 см, круглые с елий паутинистый, рона лилово-кармитсутствуют на 15-й микроконидии одно- разуются в воздушмкм), хламидоспоры хушечные, гладкие, 1687195Нэ картофельно-декстрозном агаре привыращивании в тех же условиях колонииразмером.%,8-7,2 см, круглые, край ровный,невысокие, слабопушистые, поверхностьтемно-лилового цвета с карминовым оттенком, обратная сторона темно-лиловая.Спорообрэзующий, макроконидии отсутствуют, микроконидии одноклеточные,обильные, образуются в воздушном мицелии (6,8+0,02 мкм), хламидоспоры промежуточные и верхушечные, гладкие,неокрашенные,На твердой среде Чапека колонии размером 5,0 - 6,1 круглые, невысокие, неровные, пленчатые, слабопушистые, свозрастом уплотня ющиеся от белого до слаборозового цвета, обратная сторона белаяили желтоватая.Спорообрэзук)щий, макроконидии отсутствуют, микроконидии одноклеточные,обильные, образуются в воздушном мицелии (7,6+0,03 мкм), хламидоспоры промежуточные и верхушечные, гладкие,неокрашенные,Штамм растет при 4 - 37,5 С, оптимальная температура роста 22 - 25" С, рН среды5,4 - 8,2, оптимальное значение рН среды6,0-6,2,Отношение к источникам углерода: усваивает сахарозу и крахмал. Отношение кисточникам азота: усваивает МайОз, КЙОз,казеин, соевый белок, альбумин.Штамм не имеет маркерных признаков,Обладает способностью к биосинтезу фузариевой кислоты, ее содержание в культуральной жидкости 14-дневноВ культуры. 40,8 - 53,5 мкг/мл (при выращивании в стационарных условиях нэ жидкой среде Чапека при 22 - 25 С).Активность протеолитических ферментов при использовании в качестве субстратаказеина - 0,590 усл, единиц, при использовании К 2-бензоил-О,:аргинин-и-нитроанилида - 0,140 усл,ед.Признаки штамма устойчивы, Штаммхранят на сусло-агаре под вазелиновыммаслом при 4 С 3-6 мес, затем пересевают.Штамм гриба Розагцгл охузрогогп(зсЫесЬ) Япуб, е 1;, Напз чаг. ог 1 осегаз Арр.е 1, ччг) ВПа 1 693 - 4 отобран из 451 изолятов,выделенных из больных растений сои настадии всходов и в фазе цветения в различных экологических зонах Молдавии.Этими изолятами проведено искусственное заражение иЗолированных корнейсои устойчивой линил Ки восприимчивого сорта Букурля по модифицированномуметоду Кепда 11,еэФ 1984, Выделенныеизоляты гриба выращивают на чашках Петри на твердой среде сусло-агар в течение 210 20 25 нед. при 25 С, Для заражения отдельных корней, помещенных в чашках Петри, используют диски мицелия, вырезанные сверлом диаметром 1,5 мм.Для искусственного заражения сои используют корни 5-дневных растений, выращенных в проСтерилизованном песке при увлажнении до 60 О или в рулонах увлажненной фильтровальной бумаги при 25 С из семян, предварительно простерилизованных в течение 2 мин последовательно 96;- ным этиловым спиртом и водным раствором КМпОчРезультаты, полученные при инфицировании корней сои восприимчивого сорта и устойчивой линии сои, представлены в табл,1 и 2,Из полученных данйых следует, что наибольшую длину гниения корня при контакте с культурой гриба (без нанесения повреждений) восприимчивого сорта Букурия и устойчивой линии К - 8409 вызывает штамм Е. охузрогощ чаг. огйосегаз М 693, превышающий по патогенности все выделенные и исследованные изоляты (табл. 1).Пример использования штамма для йолевого инфекционного фона,Рассевают хранящиеся культуры на жидкую среду Чапека, выращивают 5 дн . на овса - 1 ч, воды нэ 2,5 ч. субстрата) стерилизуют при 1 атм., 1 ч, Заражение субстрата проводят жидкой средой, содержащей10000 спор/1 мл культуральной жидкости.Выращивают при комнатных условиях (1825 ОС) в течение 15 дн,Пример использования штамма для40 оценки сои на устойчивость к фузариозу. Полученный описанным способом инокулюм вносят в почву при посеве семян из расчета 100 г инфекционного материала на 1 м.Оценку поражаемости сортов сои проводят по поражению корневой системы при раскапывании 10 растений из каждого ряда и оценки поражаемости по площади поражения данного органа: 50а55 0 - растения здоровые, без признаков заболевания.;1 - поражение очень слабое, наблюдаются отдельные мелкие точечные пятна, занимающие не более 10. поверхности органов растения;2 - поражение слабое - 11-25.поверхности;3 - поражение среднее - 26 - 507 ь;4 - сильное пораженив (свыше 50, но ие более 75), растения сильно угнетены; 30 качалке или 10 дн. в стационарных условиях. Увлажненный субстрат (отходы пшеницы,1687195 Так как оценка поражэемости проводится по максимальному индексу развития болезни, более высокий уровень патогенности возбудителя позволяет более четко дифференцировать устойчивость сорта и проводить индивидуальный отбор линий - источников устойчивости к фузариозным корневым гнилям, При этом определяется,что Хабаровскаях Асерша, Чайка х Абер 1 э являются восприимчивыми, а не средневосприимчивыми, Ргсезоу Приморская 520 - средневосприимчивыми, а не устойчивыми, что имеет место при использовании прототипа. Сорта и гибриды со стабильным уровнем реакции подтверждают свою характеристику. Поэтому использование для создания инфекционного фона штамма М 693-4 обеспечивает более четкую иммунологическую характеристику, т.е. достигается ускорение селекционного процесса с меньшими затратами труда, полевыми площадями и инфекционной нагрузкой нэ природную среду,Формула изобретения Штамм гриба Розагащ охузроща (з спес 1 т) зпуб, е 1 Напз чаг, огсЬосегаз (арр, е 1 Иг) ВИа, ВНИИСХМ % 36, используемый для оценки сои на устойчивость к фузариозу. Таблица Характеристика выделенных природных изолятов Г.охузрогша чаг.оггЬосегаз по способности к поражению корней сои приискусственном, заражениит Изолят Величина пс. ажения корня, мм Повторности Х-тпх Реакция У В У У В У В У В У В У В У В 240 210. 300 300 35,0 34,0 33,0. 33,0 10 0 10 0 100 15 0 4,0 0 0 0,6 20,0 25,0 35,0 25,0 0 0 , 5,0 10,0 100 100 150 150 10 О 15 О 10 О 20 О 200 450 200 300 50 20 30 40 50 50 80 90 0 0 0 0 20 0 150 20 0 20 О 150 300 20 0 200 30,0 30,0 30,0, 31,0 693 20165 706 43 627 702 У - устойчивая линия;В - восприимчивый сорт 5 - очень сильное поражение (свыше750 ), наблюдается гибель растений.Для диагностики резистентности набора сортов использовали шкалу (табл, 3), гдеразвитие (индекс болезни), в котором число 5) больных растений и степень(балл) пора- .жения, вычислялось по формулев=Х оо,и 1где Й - развитие болезни; 10- сумма произведений числа растений с одинаковыми признаками пораженияна соответствующий им балл поражения;п - общее число растений;К - высший балл шкалы учета. 15Набор из 12 исследованных сортов сои.и гибридов распределялся по группам устойчивости следующим образом;средневосприимчивые - Ргдезэу, Приморская 529, гибрид 676, йаг; 20восприимчивые - Скынтея, Хабаровскаях Аберта, Чайка х Абер 1 а, Аурика,ф Мар Ргез 1 о;сил ьновосприимчивые - Кишиневская 16, Букурия, Бельцкая.(табл. 4), 25В полевых условиях при заражении через почву показатели патогенности на12,6 оь превышали показатели, полученныепри заражении природным изолятом.30 20,035,020,0О40,0О10,015,030,05,010,0030,020,020,0 250+2134,0+0,4.130+2029,0+3,614, и+1,8021,0+3,521,0 2,428 22 0 4,791,04,471,748,214,472,734,1.5,21,32,307,85,44,68Таблица 2 1 б 87195 ина гниения корня,Номерклонов прииичивыйукурия) той ивая л8409 10,0 10,0 12,0 25,0 4 6 7 8 10, 0,0 10,0 10,0 0,0 10,0 11,0 10,0 10,0 12 13 14 15 16 17 10,11,12,10,10,10,1 О,0 10,0 12,0 12,0 12,0 12,0 3 3 б Вкала для диагностики устойчивости образ сои к фузариозу Обозначения Развитие лезин, ЕИммунологическаяхарактеристикаобразцов 0-1011-25 Зысокоустойчивы Устоичивые Средневосп Реедезоу Зо сприимчи Оиле)НОВОсп еимчивые 26-5 5.1-7 76-1 ВВ ивые 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Определение патогенности моноспоровых клоновизолята 693 по результатаи искусственногозаражения корней сои 30,0 5,0 15,0 34,0 30,0 30,0 30,0 16,0 30,0 25,0 30,0 25,0 30,0 25,0 25,0 15,0 10,0 25,0 25,0 25,0 25,0 25,0 30,0 28,0 30,0 15,0 30,0 30,0 30,01 б 87195 1 О Та блица 4 Ф Поражение проростков сои при искусственном заражении через почву штаммов 693-Н по сравнению с исходным известным штаммомнтенсивность развития корневых гнилей, 7 Сорта, гибриды сои Штамм 693-4 Превышение риродныйзолят 693 7,430,05,9 69,2 80,0 91,9 61,8 50,0 86,0 П р и м е ч а н и еф среднее значение превышения = 12,6 Х,Составитель Т. ПолянскаяТехред М.Моргентал Корректор О, Кравцова Редактор М. Келемеш Заказ 3657 Тираж 351ВНИИПИ Гос да ственногПодписноеосударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "П " . Уатент, г. жгород, ул. Гагарина, 101 СкынтеяКишиневская БукурияХабаровскаяхАйер МЧайка х АбервРтЫевоу.Приморская 529Бельцкая Аурика