Способ определения содержания клеток в микробных препаратах

СОЮЗ СОВ.ТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 1 М 33/483 САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ У маатвмч% К микр оби Иэобрлогик имикробищевой иколическлеток ение относитс может быть использ логической, медициомышленности для о вано вской и пипр ед елениямикробныхционных мер ной венного содержанияразличных компози посуде в эксикавлаги (Р О ).ти порошка клет МаС 1 той же вают подсушиваниГОСУДАРСТВЕННЬЗЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОРСНОМУ СВИДЕТЕЛ(71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов(57) Изобре ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯМИКРОБНЫХ ПРЕПАРАТАХ тение относится к микро препаратах.Целью изобретения является повышение точности определения.На фиг.1 изображен градуировочны график зависимости тока через измер тельную ячейку от содержания клеток Е. со 1 М 17 в пробе препарата; на фиг.2 " градуировочный график зависимости тока через измерительную ячейку от содержания клеток Вас 111 ц СЬцг 1 щепзв в пробе препарата.Сущность способа заключается в следующем.Дозированную пробу сухого препар та, содержащего микробные клетки,.801684676 А 1 биологии и направлено на повышениеточности определения содержания клеток в микробных препаратах. Дозированную пробу сухого препарата, содержащего микробные клетки, помещаютв электродную ячейку, нагревают откомнатной температуры до 100 оС и измеряют ток ячейки, возникающий принагревании. По величине максимального тока, пользуясь градуировочным графиком, определяют содержание клеток в пробе препарата. Для каждого видакультуры снимают свою градуировочиуюкривую. 2 ил., 2 табл,помещают в электродную ячейку и изяют ток при нагревании от комнаттемпературы до 100 С.По величине максимального тока по градуировочному графику определяют содержание клеток в пробе препарата.Для каждого вида культуры снимают свою градуировочную кривую.Снятие градуировочной кривой производят следующим образом,Выращенную на минеральной среде до стационарной фазы роста культуру концентрируют центрифугированием или с помощью сепаратора, а затем высушивают лиофильно. Высушенную биомассу размалывают в керамической ступке и .хранят в закрытои торе с поглотителемДля замещения час точной биомассы беру дисперсии и обезвожием в эксикаторе с Р О. Готовят различные пропорции клеточной биомассыи ИаС 1, содержащие 107., 207,1007 клеточной биомассы. Затем дозированную пробу каждой смеси поочередно помещают в измерительную ячейку иизмеряют ток при нагревании от комонатной температуры до 100 С,По величинам максимальных токовдля каждой пробы строят градуировочный график зависимости величины максимального тока от количественногосодержания клеточной биомассы в пробе препарата.15П р и м е р 1. Построение градуировочной кривой для культуры Е, со 1.М,Культуру Е, со 1 Мвыращеннуюна глюкозоминеральной среде до стационарной фазы роста концентрируют центрифугированием (4000 об/минв течение 30 минполученный концентрат содерлит около 907. влаги). Концентрат Е, со 11 Мвысушивают лиофильно. Высушенную лиофильную биомассу Е. со Мразмалывают в керамической ступке и хранят в эксикаторе с Р О для исключения увлажнения30Для количественного замещениячасти порошка Е. со 11 МберутМаС 1 той же дисперсности и подсушивают в эксикаторе с поглотителемвлаги РО. Готовят несколько композиций с различным содержанием Е.со 1 ь.И 17: О 20 ф 33 з 40 е 50 э 67 1007Затем поочередную пробу каждой при.готовленной смеси с помощью дозаторапомещают в измерительную ячейку.Измерительная ячейка - двухэлект 40родная импедансометрическая ячейкаимеет титановые электроды, находящиеся на фиксированном расстоянии воФторопластовом корпусе. Ячейка разъемная. Предусмотрена промывка, обработка и стерилизация, Наружный кожухи резьбовой крепеж обеспечивают наделчую фиксацию межэлектродного расстояния и достаточную герметичностьместа помещения пробы материала.Объем пробы составляет О, 06 см . Измерение тока производят на установке, состоящей из ИМТ,5 (измеритель малых токов), самопишущего милливольтметра н блока подключения ячейки, состоящего из контактной системы, помещенной н термсстат с зада ваемой скоростью нагрева и с диапазонои нагрева до 150 С.Ячейку с препаратом подключают к контактной системе и измеряют ток в процессе нагрева от комнатной температуры до 100 С. В процессе нагрева6регистрируют самопишущим милливольтметром величину напряжения, пропорциональную току через ячейку с препаратом, Ток вычисляют по формуле йн 1+ 1 сбд Ввы И К,где 18 х хИ и К Иток через ячейку; ток и сопротивление на выходе измерителя;Фиксированное сопротивление, соответствующее диапазону измерителя тока; ИЭМ 1 с и - соответственно коэффициентусиления измерителя и коэффициент обратной связи Цс/Ъ 1 ) .По вычисленным значениям максимального тока для каждой из проб препарата, содержащего определенное количество клеток Е,со 11 М, строят градуи -ровочный график зависимости тока че -рез ячейку от содержания клеток впробе препарата (фиг.1).Пробу препарата, содержащего микробные клетки Е,со 1 ь М, объемом0,06 смз помещают в ячейку, ячейкуподключают к измерительной установке. Замеряют ток при нагревании откомнатной температуры до 100 С. МакО-1симальный ток составляет 3,6210 А.По градуировочному графику определяют содержание клеток Е.со 11 Мвпробе препарата. Оно составляет 65,9.11,57.,Параллельно в пробе исследуемогопрепарата определяют содержание микробных клеток методом посева проб.Оно составило 66,17В табл.1 приведены результаты поспределению содержания микробныхкг ток в препаратах данным способоми по способу посева проб.П р и м е р 2. Построение градуироночной кривой для Васд 11 цз Ьцги 1;епзз проводят по аналогии с построением градуировочного графика дляЕ,.со 1 х М,Культуру В. гЬцгпдепзз, выращенную на глюкозоминеральной среде40 концентрируют, сушат, приготавлива - ют порошок который хранят и зксика торе с поглотителем влаги РО.Для количественного замещения час 5 ти пор о ка В. СЬих 1 щепв т.в берут МаС 1 той же дисперсности и подсушивают в эксикаторе с Р 05, Готовят несколько композиций с различным процентным содержанием В, 1 шг 1 пепя 1 в: О, 20, 33, 40, 50, 6 /, 1007. Затем поочередно так же как и в случае с Е.со 1 т. Мпробу каждой приготовленной смеси с помощью дозатора помещают в измерительную ячейку, описание которой приведено вьппе, и измеряют ток через ячейку в процессе нагрева от комнатной температуры до 100 С на установке н по методике, указанной в примере 1. 20По вычисленньм значениям максимального тока для каждой пробы грепарата, содержащего определенное количество клеток Вас 111 ия Ьпг 1 пбеп 81 в,строят градуировочный граФик за висимости тока через ячейку от содержания клеток в пробе препарата (фиг.2)..Пробу препарата, содержащего клетки В. СЬцгдпдепя 1 в, объемом 0,06 см помещают в измерительную ячейку, ячей 1 ку подключают к измерительной установке, Замеряют ток при нагревании -от комнатной температуры до 100 С. Максимальный ток составляе 7 0,64 х-1 Й 35 Х 10 А. По градуировочпому граФику определяют содержание клеток В.СЬцг 1 пяепяьв в пробе препарата. Оно составляет 34,71,5 Х.В табл.2 приведены результаты по определению содержания клеток1Вас 111 цв Ьиг 1 пВепв 1 в в препаратах данным способом и по способу посева .проб.".аким бравом, данный способ позволяет повь.сить точность Определения содержания клеток в микробных ирепа, атах,Г Содержание клеток в препарате, Х Препарат данный способ способ попосеву проб 65,911,5 66, 0+4, 0 32,111,5 32,043,0 14,8+1,5 15,0.2, 0 Т а б л и ц а 2 Прела- Содержание клеток ч препарарат тах, Х данный способ способ попосеву проб 75,411,5 34,741,5 15,3+1,5 74,04-4,0 35,0+3,0 15,0+2, 0 Формула и зобр ете нилСпособ определения содержания клеток в микробных препаратах, вклю ыющий приготовление пробы препарата, измерение параметра и оценку количества клеток по градуировочному граФику, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности определения содержания клеток, нагревают пробу сухого преларата до 100 С, опреденяют электрический ток, возникающий в пробе препарата в процессе нагрсвания, а в качестге измеряемого параметра используют максимальньй ток в пробе препаратаТ а б л и ц а 11 Ь 8467 б 0 иг.2 Составитель Н. Алкеевбченко Техред Л.СердюковаКорректор Л.Пилипенко Редактор каз 3502 Тираз ПодписноеНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 КНТ СССР Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, у гарина, 101 махфДо-Д 2 Л 50 100 Доля ВассвХХиб +Ииъмуетв, %