Камера для формирования электрофоретических гелей

) С 01 Ы 27 Н КТРОтроистредназмолекулт быть 1, переднейманжеты 3. няя стенкакорпуса 1 п стенке, огр ранство камерпризмы со сглми ребрамилотняет и гер пространстволевыми кассетКорпус 1 иверстием 6 илсти, две бокоВнутренняя попереходит в пбез изломов,Установлензонтального и стью гориедняя ая с возмо емещен, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ И А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1(7,1) Институт почвоведения и фотосинтеза АН СССР. (54) КАМЕРА ДЛЯ ФОРМИРОВАНИЯ ЗЛЕ ФОРЕТИЧЕСКИХ ГЕЛЕЙ(57) Изобретение относится к лабораторной технике, а именно к ус нам для формирования гелей, п наченных для разделения макро методом электрофореза, и може Изобретение относится к лабораторной технике, а именно к устройствам для Формирования гелей, предназначенных для разделения макромолекул методом электрофореза, и может быть использовано в биохимических, биофизических и химических исследованиях.Целью изобретения является обеспечение возможности изменения количест, ва и толщины формируемых пластин гелей и Формирования гелей цилиндрической формы.На фиг. 1 изображено устройство, общий вид; на фиг, 2 - устройство с рядом гелиевых трубок; на фиг. 3 - корпус устройства; на Фиг. 4 - подвижные стенки с манжетой.Камера для формирования электрофо ретических гелей, состоит из корпуса использовано в биохимических, биофизических и химических исследованиях,С целью обеспечения возможности изменения количества и толщины формируемых пластин гелей и формирования гелей цилиндрической Формы в камере дляформирования электрофоретических гелей, включающей корпус, переднюю стенку и эластичную манжету, передняястенка установлена с .возможностью горизонтального перемещения внутри корпуса, по периметру передней стенкивыполнено углубление, а эластичнаяманжета размещена в лазе, образованном углублении передней стенки и внутренней поверхностью корпуса. 4 ил. тенки 2 и эластичной рабочем состоянии перед- располагается внутри аллельно его задней 1/ ичивая внутреннее просты в форме прямоугольной аженными нижними боковьг ластичная манжета 3 упметизирует внутреннее камеры, заполненное геами 4 или трубками 5. меет заднюю стенку с оти патрубком в нижней чавые стенки и основание. верхность боковых стенок оверхность основанияс Генка 2 выполнена в виде прямоугольной пластины, Нижняя и боковые грани пластины сглажены. По периметру передней стенки 2 выполнено углубление 7 под эластичную манжету 3.Подготовку устройства к работе начйнают с заполнения камеры гелевыми кнессетами или трубками, Для этого крпус 1 укладывают задней стенкой на горизонтальную поверхность.Гелевые кассеты для электрофореза в вертикальной пластине геля, состоящфе из двух параллельных пластин с боковыми прокладками между ними, собирают непосредственно в корпусе либ предварительно. В последнем случае в одящие в кассету элементы скрепляют м жду собой подходящим образом, нап имер липкой лентой. Далее кассеты 4;последоватечьно укладывают в корпус 1, начиная от задней стенки, проклад 1 вая между ними листы материала, с особствующего правильному разъедин нию кассет после формирования геля. 25 П и этом кассеты 4 опираются нижними у лами на внутреннюю поверхность. кори са 1 в месте перехода боковых стен к в оснсвание, а их нижний край параллелен основанию корпуса 1. Образу юЦаяся щель между кассетами 4 и основанием рамы 1 служит для равномерно;,го заполнения кассет гелевым раствором и однородного распределения графента пористости геля. Уложенные в корпус 1 кассеты 4 с прокладками меж у ними образуют стопку. Число и толна кассет в стопке может изменяться в широких пределах, достигая максимальной толщины стопки, выбранной 4 О при конструировании корпуса 1.Трубки 5 для формирования цилиндрических гелей укладывают в раму 1 в Один или несколько полных слоев параллельно бОкОВым стенкам Диаметр 45 йходящих в слой трубок должен быть одинаков. Если необходимое для формирования Число трубок меньше полного слоя, нижние концы части трубок в слое герметизируют. При этом в завис,имости от способа заполнения герме- тизируют лишние трубки или трубки, предназначенные под гель. Между нижНими концами трубок 5 и основанием рамы 1 оставляют небольшой зазор, верхние концы трубок выравнивают.1Далее на стопку кассет 4 или трубок 5, установленных в корпусе 1, укладыВают переднюю стенку 2. Переднюю стенку 2 прижимают к стопке и основаниюрамы 1 так, что между углублением 7стенки 2 и внутренней поверхностьюбоковых стенок и основания корпуса 1образуется паз. Уплотнение и герметизацию камеры производят эластичнойманжетой 3, запрессованной ее в образованный паз. После этого камеру устанавливают в вертикальное положениеи заполняют гелевым раствором. Заполнение производят сверху через одну изкассет 4 или трубок 5 или снизу черезотверстие 6 в задней стенке рамыПоследний способ предпочтительнее приформировании градиента пористости исверхтонких пластин геля. Заполнениегелем установленных в камере трубокможет быть произведено одновременноили последовательно каждой отдельнойтрубкой с загерметизированным концом.В последнем случае камера выполняетроль вертикальной подставки.После формирования геля камеруразбивают, выступающий за пределы формы гель обрезают, кассеты и трубки сгелем разъединяют и используют для4электрофореза либо хранят в подходящих условиях,Известный Отливочный стенд для отливки пластин геля для вертикальногоэлектрофореза представляет собой камеру, состоящую из корпуса, съемнойпередней стенки, и манжеты которыеограничивают внутреннее пространствов форме прямоугольной призмы. Корпуссостоит из задней стенки, двух боковых стенок и основания, Передняя стенка представлена прямоугольнойпластиной, размеры которой соответствуютразмерам внешней, передней поверхности корпуса. Гелевые кассеты с листами провощенной бумаги между ними собирают в вертикальную стопку внутрикорпуса до ее заполнения, накладываютпереднюю стенку и уплотняют камерувинтовымИ зажимами.Герметизация внутреннего пространства камеры достигается в момент уплотнения эа счет эластичной манжеты,расположенной в П-образном лазе напередней поверхности корпуса. Заполнение камеры гелевым раствором производят сверху через одну из кассет приформировании однородных гелей. Приформировании гелей с градиентом пористости заполнение производят снизу через патрубок в нижней части переднейстенки и паз в основании корпуса. Ука"1612248 6 занное устройство предназначено для содержащего 5 Х акриламида, 0,2 Х меформирования определенного числа платиленбисакриламида, 0,375 М трис-НС 1, стин геля заданной толщины, Недо-рН 8,9, О,ОЗХ тетраметиленэтилендистатком предлагаемого устройства яв - амина и 0,05 Х персульфата аммония. ляется невозможность варьировать чис- На слой гелевого раствора высотой ло и толщину формируемых пластин в 80 мм наслаивают воду. После полимешироких пределах по желанию экспери- Ризации разделяющего геля воду удаментатора. Кроме того, устройство не ляют, в трубки вносят гелевый растпозволяет формировать цилиндрические 10 вор, содержащий 2,5/ акриламида,0,626 Х метиленбисакриламида, 0,62 МПримером практического применения трис-НС 1, рН 6,9, 0,06 Х тетраметиленизобретения служит использование ка- этилендиамина и 0,06 Х персульфата меры для формирования электрофорети- аммония и полимеризуют слой концентических гелеи .под кассеты поперечным 15 рирующего геля высотой 5-6 мм. После размером 88 х 58 мм и трубки длиной 90- окончания полимеризации камеру разби мм. рают, трубки разъединяют и очищают отКамера изготовлена из оргстекла и геля, в том числе обрезают слой геля, имеет габариты 100 (высота) х 76 (ши- выступающий снизу. Оставшееся незарина) х 50 мм (толщина). Внутреннее 20 полненным гелем пространство у верх- пространство корпуса имеет размеры него конца трубок используют для вне х 58,5 х 39 мм, нижние боковые. грани90 х 5 сения образца перед электрофорезом. переходят в основание по радиусу 5 мм. П р и м е р 2. ФормированиеПодвижная передняя стенка со сглажен- пластин геля толщиной 0,6 мм с градиными нижней и боковыми гранями разме ентом пористости акриламида 10-20 Х ром 90 х 58 х 9 мм имеет углубление по пе- для диск-электрофореза мембранных . риметру внешней поверхности глубиной белков хлоропластов с додецилсульфа и шириной 1,5 мм. В качестве зла- том натрия.нстичнои манжеты использована силико- Корпус укладывают задней стенкой новая трубка диаметром 2,5 мм. Макси вниз на горизонтальную поверхность. мальная глубина внутреннего простран- Кассеты, состоящие из стеклянных пластва камеры составляет 30 мм и выбра- стин 88 х 58 х 1,2 мм и боковых проклана из расчета формирования 10 пластин док 90 х 4 х 0,6 мм, собирают непосредстгеля тол иной О 6 ммщ ,6 в кассетах тол- венно в корпусе, укладывая между ними листы провощенной бумаги. На стоп щиной 3 мм каждая.П име 1 Фр р 1. Формирование 5 Х ку пластин накладывают переднюю стен 35полиакриламидного геля в шести т бр д ля в шести труб ку и герметизируют камеру силиконовой ках для диск-электрофореза водораст - трубкой, Камеру устанавливают строго творимых белков хлоропластов, вертикально и заполняют снизу раствоВ корпус укладывают Девять трубок 40 ром с градиентом концентраци акр высотой 90 мм вн т енну ренним диаметром амида, Для этого в отверстие в ниж мм и наружным 6 мм. Нижние концы ней части задней стенки вставляют трех трубок предварительно герметизи- штуцер с прикрепленным к нему пластируют, На слой трубок накладывают пе- ковым капилляром с диаметром отверреднюю стенку, после чего верхние стия около 1 мм. концы трубок выравнивают так, что Камеру через капилляр заполняют нижние концы выше основания корпуса водой до формирования слоя 2-3 мм на 1-2 мм. Переднюю стенку плотно над основанием. Затем капилляр подприжимают к слою трубок и основанию соединяют к установленной выше каме- корпуса и в образующийся паз между 0 ры системе из двух сообщающихся соуглублением передней стенки и внут- судов, содержащих соответственно но реннеи поверхностью рамы пальцами 6 мл гелевого раствора 10 Х акриламивпрессовывают силиконовую трубку, да и 20 Х акриламида и 20 Х сахарозы, Камеру устанавливают в вертикальное а также 0,2 Х метиленбисакриламида, положение, отверстие в нижней части 0 75 Г 1 трис-НС 1 Н 8 9 0 1/ задней стенки затыкают пробкой. цилсульфата натрия, 0,3/ тетраметилЧерез верхний конец одной из трубок в камеру заливают около 10 мл аммония. Заполнение камеры ведут из гелевого раствора разделяющего геля, сосуда с 1 ОХ-ныл акрилампдом при по 1612248стоянном перемешивании формируемого й нем градиента, После заполнения камеры гелевым раствором с градиентом концентрации и плотности в камеру через капилляр вводят еще 4-5 мл раствора 20 Х-ного акриламида с саха 1 озой или другого раствора большой плотности для заполнения пространста между нижним краем кассет и дном амеры.После полимеризации разделяющего еля высотой около 80 мм с градиен". ом пористости, камеру разбирают, ынимают стопку кассет и обрезают ишний гель вдоль нижнего края. Касеты с гелем можно хранить при 4 С в ечение месяца. Перед электрофорезом ассету отделяют от стопки по слою умаги. Верхнюю часть кассеты,заполяют раствором концентрирующего геля, одержащего 6 Е акриламида, 0,082 меиленбисакриламида, 0,125 М трис-НС 1,Н 6,9, 0,1 додецилсульфата натрия, ,04 Е тетраметилэтилендиамина и 0,053 г 1 ерсульфата аммония. Для этого кассез 1 у вновь устанавливают в камере или на другой вертикальной подставке. В концентрирующем геле формируют карма.- ЪНы, вставляя в кассету гребенку, имек 1 щую восемь зубчиков с размерами 5 х МЗх 0,6 мм. По окончании полимеризат 1 ии концентрирующего геля, кассету Вставляют в аппарат для электрофореза образцы вносят в карманы и проводят электрофорез по существующей методике.Таким образом, предлагаемая камеа для формирования электрофоретичесх гелей позволяет формировать пластинчатые и цилиндрические гели для вертикального электрофореза. Число и толщина формируемых гелей может измеНяться в широких пределах и ограничена сверху максимальной глубиной камеры, выбранной при конструировании.Камера может быть использованадля формирования гелей другой конфигурации или для других видов электроФореза, если она дополнительно укомплектована подходящими для этих целейгелевыми кассетами, внешние поверхности которых или Формуемой ими стоп=ки параллельны.ГПо изобретению изготовлены дваопытных образца. Одна из камер дляформирования гелей рассчитана на ис пользование гелевых кассет с поперечным размером 88 х 58 мм и трубок длиной 90-100 мм, другая - на использование кассет размером 150 х 238 мм итрубок длиной 150-160 мм. Максималь ная вместимость камер составляет соответственно 10 кассет толщиной 3 ммкаждая под пластины геля толщиной0,6 и 10 кассет толщиной 5,1 мм подпластины геля 1,5 мм. Обе камеры ус пешно используются в экспериментальной работе.Формула изобретения30 Камера для Фбрмирования электрофоретических гелей, включающая корпус,и эластичную манжету, о т л и ч а -ю щ а я с я тем, что, с целью обеспечения возможности изменения количества толщины формируемых пластин гелейи Формирования гелей цилиндрическойФормы, передняя стенка установлена свозможностью горизонтального переме-.щения внутри корпуса, по периметрупередней стенки выполнено. углубление,а эластичная манжета размещена в пазу, образованном углублением передней стенки и внутренней поверхностьюкорпуса,1612248 Составитель О. ЗобнинТехред Л.Сердюкова Корректор М, Пожо Блан едакт каз 382 Тираж 509 Подписно Государственного комитета по изобретениям и открьгтиям при Г 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5