Способ моделирования острой ишемии сердца

(54) С ИШЕМИИ ОСТРОЙ СОБ МОДЕЛИРОВЕРДЦА 7 инсти- Н СССР ния сок з крысы псодержащи ДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ АНИЕ ИЗОБРЕТЕН(71) Научно-исследовательскийтут медицинской энзимологии АМ(56) Ке 1 Ье 1 Э.К., Ночейо М.1Ашер. 3. рйуз 1 о 1, 1979, ч.237,р, 247-252. увеличения срока поддержаатительной способности серд ет предупреждения истощения ических соединений сердце рфузируют солевым раствором м рибоэо-фосфат.Изобретение относится к биохимии и медицине и обеспечивает сохранение жизнеспособности миокарда в условиях недостаточного его снабже - ния кислородом.Цель изобретения - увеличение срока поддержания .сократительной способности сердца за счет предупреждения истощения макроэргических сое динений,Способ осуществляется следующим образом.Состояние ишемии вызывали перфузией сердца. модифицированным соле вым раствором Кребса-Хензеляйта, не ;,насыщаемым карбогеном (95% 0+57 СО ) ,и не содержащем глюкозу. В этих условиях проведена серия опытов с добавлением рыбозо-Фосфата в пер фузионный раствор, Регистрировали частоту и амплитуду сердечных сокращений с последующим расчетом Функциональных показателей состояния изолированного сердца, В левом желудочке 25 энзиматическим методом определяли содержание АТФ, АДФ, АМФ и креатинфосфата. 30В сравнительных исследованиях ,при перфузии изолированного ишемизированного сердца модифицированным . солевым раствором Кребса-Хенэеляйта, содержащим или не содержащим рибозо- . -5-фосфат, судили о способности рибо- З 5 зо-фосфата влиять на уровень АТФ, креатинфосфата и функциональное состояние сердца.Показано предотвращение падения уровня АТФ и в меньшей степени кретинфосфата в ишемизированном миорде только за счет введения в модиицированный бикарбонатный буфер Кребса-Хензеляйта рибоэо-Фосфата 1 ри полном исключении из него дополйительных Факторов коррекции - глю- козы и аминокислот, которые были Использованы в известном способе наряду с аденозином. На стадии ишемии При введении рибозо-фосфата. уста 50 ,Новлено улучшение Функциональных показателей состояния изолированного Сердца. При введении рибозо-Фосфата в модифицированный бнкарбонатный буфер Кребса-Хензеляйта, не насыщен" Ный карбогеном и не содержащий глюкозу скорость образования АТФ составЭсинтеза этого соединения при введении аденоэина (по известному способу). В отличие от известного способа показана коррекция рибозо-фосфата уров- . ня энергобогатых соединений на стадии ишемии, а .не в постишемический период, когда наблюдается нормализация процесса обмена в миокарде.П р и м е р . Крысам-самцам весом 250-300 г линии Вистар вводили тиопентал натрия ( из расчета 50 мг/кг веса). Через 3-4 мин проводили вскры" тие грудной клетки, извлекали сердце и помещали в охлажденный.до 4 С физиологический раствор (0,9 % ИаС 1) для остановки сердечной деятельности. В, аорту вводили металлическую канюлю (наружный диаметр 2,5 мм, внутренний 1,8 мм), соединенную шлангом с термостатируемым резервуаром, который соединен через перистальтический насос с термостатируемой колонкой, в которую из баллона под давлением поступает смесь газов (карбоген - 957. О + 57. СО). Через левое ушко в полость левого желудочка вводили латексный баллончик. Латексный баллончик соединен с электроманометром Е 1 еша-зсопапйег 34, который в свою очередь соединен с мингографом МпдоцгаЕ 34 для регистрации частоты и амплитуды сердечных сокращений. Перфузию осуществляли по Лангендорфу. Перфузионным раствором служил модифицированный бикарбонатный буфер Кребса-Хензеляйта следующего составами глюкоза 5 шМ, инсулин 0,4 Ед/л, ИаС 1 118 мМ, ЯаНСО 24 мМ, КС 1 4,7 мМ;, МАЗОф 7 Н О 2,5 мМ; КН РО ),5 мМ; ЭДТА 0,45 мМ, СаС 1 2,43 вМ, рН 7,4; с 37 С Буфернасыщали смесью газов (карбогеном)й 957 0+ 57 СО . Скорость перфузии составляла 12 мл/мин.Использовали 3 изолированных сердца. 1) контроль ("исходное состоя-. ние");2) сердце в состоянии ишемии 3) сердце в состоянии ишемии с коррекцией рибозо-фосфатом.1, Первые 20 мин сердце (контроль - "исходное состояние") перфузировали буфером указанного состава для стабилизации функционального состояния и обменных процессов.Раствор для перфузии поступал из термостатированной колонки, где былнасыщен карбогеном, через перистальтический насос, подающий 12 мл/мин перфузата в термостатированный резервуар. Оттуда через канюлю, введенную в аорту, попадал в сердце. Регистрацию частоты и амплитуды сердечных сокращений проводили с использованием латексного баллончика и электроманометра на мингографе 10 "Мпяоагай 34". На 20-ой минуте перфуэии после снятия физиологических параметров отсекали левый желудочек и замораживали. Замороженную ткань оставляли в жидком азоте для дальнейшей обработки и определения в ней энзиматическими методами содержания АТФ, АДФ, АИФ.2. Сердце в состоянии ишемии перфуэировали, как и в контрольное сердце, в течение 20 мин для стабилизации функционального состояния и обменных процессов. Следующие 20 мин сердце перфуэировали буфером с инсулином, не содержащим глюкозу и 25 без сатурации карбогеном. После снятия физиологических параметров левый желудочек отсекали и замораживали в жидком азоте для последующего определения АТФ, АДФ, АИФ. 30Наблюдалось ухудшение динамических показателей сердечной деятельности по сравнению с контролем - "исходное состояние". Показано паде" ние содержания АТФ в состоянии ишемии по сравнению с контролем на 602.353. Сердце первые 20 мин перфузировали, как и контрольное сердце (" исходное состояние"). Через 20 мин буфер меняли на аналогичныи по соле 40 вому составу, но при этом полностью исключали глюкозу, сатурацию карбогеном и вводили рибозо-фосфат в конечной концентрации 1,7 шИ. При использовании выбранной концентрации показано проникновение .рибоэо-фосфата в изолированное, ишемиэированное сердце крысы,После снятия физиологических показателей с ишемизированного сердца. при коррекции рибоэо-фосфатом ле 50 вый желудочек отсекали и замораживали для определения содержания адениновых нуклеотидов. Установлено, что включение в перфузионный буфер рибозо-фосфата предупреждало падение уровня АТФ. Содержание АТФ в условиях метаболической коррекции состояния ишемии рибозо-фосфата возвращалось к исходному уровню на 897 и на 553 превышало содержание АТФ на стадии ишемии.Показано улучшение динамических показателей сердца по сравнению с состоянием ишемии. Полученные данные представлены в табл. 1 и 2,В табл. 3 и 4 представлены данные,полученные в другой серии экспериментов,Статистическая обработка полученных данных была проведена. согласно критерию Стъюдента.Таким образом, введение рибозо- -фосфата в неоксигенированный не содержащий глюкозу солевой раствор приводило к повышению уровня макроэргических соединений и улучшению сократительной способности миокарда в период острой ишемии по сравнению с контролем, где данный метаболит в перфузат не добавляется, а также по сравнению с известным способом, в котором в раствор вводили аденозин,Этот положительный эффект наблюдается в диапазоне концентраций 1 10 мМ рибозо-фосфата.Формула изобретенияСпособ моделирования острой ишемии сердца путем выделения сердца крысы, помещения его в систему для перфузии солевым раствором с последующим добавлением в среду перфузии химического соединения, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью увеличения срока поддержания сократительной способности сердца за счет предупреждения падения уровня макроэргических соединений, в качестве химического соединения используют рибо-. зо-фосфат.1381397 ТаблицаДинамика показателей функционального состоянияизолированного сердца ЧСС СД ДЦ ИСФ Условия опыта 25 14,3 220 90 Состояниеишемии 140 85 70: 2,1 75 46 4,0 140 П р и м е ч а н и е: ЧСССД ДД ИСФ- частота сердечных сокращенийв 1 мин;- систолическое давление,мм рт.ст.;- диастолическое давление,мм рт.ст,;- индекс сердечной функции ИСФ-"д- ЧСС.(СД-Я)1000 Та блица 2 Содержание АТФ, АДФ, АМФ в левом желудочке крысы(мкИ/г сырой ткани) АТФ АДФ АИФ Условия опыта Контроль - "исходноесостояние" 2,35 Состояние ишемии Состояние ишемиии коррекции рибозо-фосфатом 2, 1 1,3 0,3 Таблица 3 Динамика показателей функционального состояния изолированного сердца( Х+ ш )е вв ив4ееееааФ ШВЮЮВИЮЮВ ЧСС СД ДД ИСФ Условия опыта Контроль - "исходноесостояние" 211110 95+8 30+5 13, 8+2 139+27 93+5 72+7 2,5+О, 1. Состояние ишемии Контроль -1381397 8Продолжение табл.З ЧСО Щ ДД. ИСФь дым ФВ В ВВ 0,5 0,5 0,5)0,1 Состояние ишемии икоррекция рибозо-фосфатом 3,5+0,5 123+23 76+4 4 б+3 Р к состояниюишемии с 0,05 0,1 с 0,05 с 0,01 Таблица 4 Содержание АТФ, АДФ, АМФ и креатинфосфата в левом желудочке сердца крысы (мкМ/г сырой ткани, Х + в) Креатинфосфат Условия опыта АТФ 1 эО+Оэ 25 1 эО+Ов 2 Оф 40 э 1 2,3+0,08 Состояние ишемии и = 7 Р к исходному состоянию с 0,05 с 0,05 0,5 с 0,5 2,38+0, 19 2,20+0,26 1,4+0,2 0,4+0,1 Р к состояниюишемии с 0,05 .с 0,05 0,5с 0,05.е Различия по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни. Составитель Н.Гуляева Редактор Н.Щвыдкая Техред Л,ОлийныкКорректор Н.Король Заказ 1180/39 Тирах 847 , Подписное ВНИИПИ Государственного комитета. СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г,Ужгород, ул.Проектная, 4 Условия опытаарфеР к исходномусостоянию Контроль - "исходноесостояниеи = 11 Состояние ишемии икоррекция рибозо"5-фосфатоми = 7 2 4+О 2 1 ь 4+Оэ 2 Оэ 410 э 1 Зэ 5+Оэ 1