Способ определения иммунодефицитного состояния при воспалительных заболеваниях

СООЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 33/53 04 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТ ВИДЕТЕЛЬСТ Д ВТОРЯК(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕ ДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ ТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ фагоцитарной активнос о тли чающий с с целью повышения точ определяют фагоцитарн Е-розеткообразующих при снижении зтого по чем на 507. в сравнени деляют иммунодефицитн Бюл. Ф 46 следовательй инстчин и И.И.Дз8.8)оГ веспИС 1 хп 1 шш79, 13,3, 2 жинск 1 с дгацрцпо 1 - апй 97-359. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(56) УНО герог1 шшцпойе Г схпс1 шшцпораСИо, 1 ЛЕНИЯ ИММУНОПРИ ВОСПАЛИутем выявленияи нейтрофилив,я тем, что,ости способа,ю активностьнейтрофилов иазателя болеес нормой опрее состояние.Изобретение относится к медицинеи может быть использовано в клинической иммунологии для диагностики дефицита функции Е-розеткообразующихнейтрофилов (Е-РОН) при определениииммунодефицитных состояний.Целью изобретения является повышение точности определения иммунодефицитных состояний при воспалительных заболеваниях эа счет исследования фагоцитарной активности Е-РОН.Способ осуществляют следующим образом,У пациента берут кровь и выделяютсубнопуляцию фагоцитирующих Е-РОН засчет того что разделение клеток крови производят наслаиванием 3 мл цельной крови ча двухступенчатый градиент фиколл-уротраста с плотностью1,077-1,083 г/мл и 1,095-1,005 г/млс последующим центрифугированиемпри 0 С со скоростью 1000-1500 об.//мин в течение 20-30 мин. Получаютдве чистые популяции клеток: лимфоцитарную и нейтрофильную. СоединяютО, мл нейтрофилов (3 10 в 1 мл)с 0,1 мл 1 млрд. взвеси золотистогостафилококка (штамп ер.п). Первуюпробирку с этой смесью инкубируютопри 4 С 30 мин, вторую в течение120 мин. Дополнительно перемешиваяпокачиванием каждые 10 мин, Делаютмазки, сушат, фиксируют метанолом3-5 мин, красят аэур-эоэином 35 мин,Подсчет, Определяют содержаниелейкоцитов в 1 мкл (Ь), а также подсчитывают процентное содержание нейтрофилов (1) среди всех лейкоцитовв мазке крови. Зная процентное содержание нейтрофилов, высчитывают ихабсолютное содержание 1 з 1И =е100В препарате просчитывают процент Е-роэеткообразующих нейтрофилов (Е-РОН) (а), а зная относительное содержание Е-РОН вычисляют их абсолютное количествоИаМ100В препаратах 2 и 3 просчитывают процент фагоцитируюнчх клеток (б и в,. Вычисляют абсолютное их количество (Р, Р)М б М вР У ---- а 100100Фагоцитарный индекс (ФИ) - среднее число фагоцитирующих бактерий на 1 нейтрофил.Абсолютный фагоцитарный показатель (АФП) = ФИ х Р,Индекс завершенности фагоцитоза6850 61Б =- . -- = 4178 5 в 1 мкл 100 4178,535,5М : ф ф = 1483,4 в 1 мкл; 1483,4 48200Р - в в ф - 712 в 1 мклЭ1483,4 г 27У ---- - ----- 400 5 в 1100У мкл. Фагоцитарный индекс (ФИ), Количество фагоцитированных бактерий нейт рофилами: через 30 мин - 207; через120 мин - 105,ФИ (через 30 мин) = 8 = 4,3;10527ФИ (через 120 мин) = в - = 3,8.АФП (череэ 30 мин) = 4,3712 == 3061,6 в 1 мкл; АФП (через120 мин) = 3,8 400,5 = 1521,9 в1 мкл; Смесь А; фиколл 11,2 г; уротраст60 Е 20 мл; дистиллированная вода15 100 мл. Плотность раствора 1,0951,005 г/мл.Смесь В: фиколл 7,2 г; уротраст607 20 мл; дистиллированная вода100 мл, Плотность раствора 1,077 -20 1,085 г/мл.Аналоги: Урографин, верографин.П р и м е р 1. Расчет показателейфагоцитарной активности у практически здорового человека,25 В иммерсионной системе микроскопа в 6-7 разных полях в препарате1 получено 35,5 Х Е-РОН, в препарате2 (инкубация 30 мин) - 483 фагоцитирующих нейтрофилов, в препарате30 3 (инкубация 120 мин) - 277. фагоцитирующих клеток, Содержание лейкоцитов в 1 мкл крови 6850, процентноесодержание нейтрофилов в формулекрови 61,Подставив в формулы цифровые значения поЛучаем1359745 48 4, 3Ф27 38.12 1,45. Анализ мочи: удельный вес 020;белок отсутствует; лейкоциты 12.-155 в поле зрения,Секрет простаты: во всех поляхзрения клетки переходного эпителияв состоянии выраженного атипизмаВ цитологическом отделении из0 уретры секрета простаты встречаютсяклетки переходного эпителия в состоянии выраженного атипизма, Атипизмклеток в мазке из уретры скорее всего связан с деструктивными процесса5 ми эпителия уретры, тела простаты исеменных пузырьков, Больному проводились многократные курсы аи;ибактериальной терапии и можно предположить иммунодефицитное состояние,0 Иммунологическпе исследования;лейкоциты 4650 в 1 мкл; сегментоядерные нейтрофилы 1906,5 вмкл (43,;1,5. мин - 419,3 в 1 мкл320,3 в 1 мкл.2,22 8- 2 АФП через 30через 120 мин -Г 2012ИЗФ =2 Пример 2. Больной Н, 72 года, Поступил с диагнозом Аденомапредстательной железы, хроническийпростатит в фазе ремиссии, ХПН латентная стадия, На экскреторных урограммах функция почек сохранена, пас 1 Осаж контрастного вещества не нарушен, на нисходящей цистограмме дефект наполнения, характерный для аденомы простаты,Ректально железа увеличена в 1,5раза туго эластической консистенции.Лабораторные данные без отклоненийот нормы, Иммунологические исследования (17.07.84 г): Ь 4750 в 1 мкл;(67.); Е-РОН 1317,1 в 1 мкл (477 о)еПроцент фагоцитирующих клеток через 30 мин 76; через 120 мин - 50,Абсолютное число фагоцитирующихнейтрофилов: через 30 мин - 1000,9в 1 мкл; через 120 мин - 658,5 в1 мкл.ФИ через 30 мин - 4,6; через120 мин - 3,9; через 30 мин4604,1 в 1 мкл; через 120 мин2041,3 в 1 мкл. Иммунологические показатели в пределах нормы. 01.08,84, произведе на аденомэктомия. В послеоперационном периоде осложнений не было. Рана зажила первичным натяжением. Больной в удовлетворительном состоянии выписан домой. 45П р и м е р 3, Больной К. 25 лет, Поступил 13.07,84 г. с диагнозом: хронический простатовезикулит, хронический уретрит неясной этиологии. В течение последних двух месяцевпоявились явления уретрита, Болезненность в области промежности, появление отделимого из уретры после ночного сна,Анализ крови (05,07,84 г.): лейкоциты 6,5 10 ; эозинофилы 4 Х; палочкоядерные нейтрофилы 137; сегментоядерные нейтрофилы 49; лимфоциты 207",моноциты 5750Жалобы на боли в области промежности, появление мутного отделения из уретры после ночного сна, ослабление эрекций, раннюю эякуляцию, гоно. рею, явления уретрита, В посевах обнаружен гонококк, Прошел полный курс лечения гонореи с применением гоно- вакцины, Отмечено клиническое и лабораторное выздоровление. По иммунологическим показателям у больного относительная степень иммунодефицита количества ЕГОН звена нейтрофилов, однако имеется глубокий дефицит относительного и абсолютного числа фагоцитирующих Е-РОН, ФИ и АФП, т,е показатели более на 507 ниже контрольных величин, Больно" . му назначена антибактериальная терапия в сочетании со стимулирующей(2%); лимфоциты 2096 в 1 мкл (32%);моноциты 193,2 в 1 мкл (5%); Е-РОН1185,ф в 1 мкл (48%).Процент фагоцитирующих нейтрофилов: через 30 мин - 46; через120 мин - 26.15Абсолютное количество фагоцитирующих Е-РОН через 30 минут - 580,8 в1 мкл; через 120 мин - 330,8 в1 мкл,ФИ через 30 мин - 4,6; через20120 мин - 3,6,АФП через 30 мин - 2671,7 в1 мкл; через 120 мин - 1190,8 в1 мкл,46 4,6126 3,6ИЗФ2 25 1,4. По иммунологическим показателям количество Е-РОН а также показатеьД ли, характеризующие функцию Е-РОН . звена после проведенного курса стимулирующей терапии, повысились до контрольных величин. 10.07,84 г,Состояние больного удовлетворительное. Явления баланопастита и уретрита 35 стихают, 1707.84 г, Больной в удовлетворительном состоянии выписан домой.Таким образом, у больного хронический воспалительный процесс, по поводу которого неоднократно получал курсы антибактериальной терапии,однако эффект в лечении был относительный. В результате проведенных иммунологических исследований выяв лен относительный дефицит количества Е"розеткообразующих нейтрофилов, а также глубокий (более 50%) дефицит функции Е-РОН звена, Это потребовало назначения стимулирующей терапии. После проведенного курса стимулирующей терапии в сочетании с антибактериальной нормализовались клинические, лабораторные и иммунологические данные, Больной в удовлетворительномсостоянии выписан домой.П р и м е р 4, Больная М 32 года. Поступила в клинику в связи с обострением хронического пиелонефрита, Температура тела 38 С, озноб,болезненность в области правой поч-,ки. Симптом Пастернацкого положительный, Уменьшение суточного диуреза до300 мл. На экскреторных урограммахфункция правой почки сохранена, пассаж не нарушен.Анализ крови: лейкоциты 25 хх 10в 1 мкл; эозинофилы 2%; палочкоядерные нейтрофилы 10%; сегментоядерные нейтрофилы 54%; лимфоциты29%; моноциты 7%.Анализ мочи: удельный вес 1020;белок 0,099%; лейкоциты сгусткамидо 100 в поле зрения микроскопа;эритроциты 10-15 незначительные. Впосеве мочи роста микрофлоры не обнаружено, Заключение: У больной обострение хронического пиелонефрита.Иммунологические исследования:лейкоциты 7000 в 1 мкл; сегментоядерные нейтрофилы 3220 в 1 мкл(44%); эозинофилы 140 в 1 мкл (2%);лимфоциты 3290 в 1 мкл (47%); моноциты 490 в 1 мкл (7%); содержаниеЕ-РОН 1127 в 1 мкл (35%),Процент фагоцитирующих нейтрофилов." через 30 мин - 30; через20 мин - 27.1Абсолютное число фагоцитирующихЕ-РОН: через 30 мин - 338,1 в 1 мкл;через 120 мин - 304,3 в 1 мкл,ФИ через 30 мин - 1,4; через120 мин - 2,6,АФП через 30 мин - 473,3 в 1 мкл;через 120 мин - 791,1 в 1 мкл,30 1,4 1 Ъ 27 2,6 ИЗФ0,8.2Таким образом, несмотря на то,что у больной количественное содережание Е-РОН в пределах нормы, темне менее выявлен глубокий дефицитфункции данного звена относительного и абсолютного количества фагоцитирующих Е-РОН, ФИ, АФП, а также фагоцитоз имеет незавершенный характер,Больной показана стимуляция Е-РОНзвена продигизаном на фоне антибактериальной терапии в связи с вялотекущим воспалительным процессом впочке,Иммунологические исследования:содержание Е-РОН 1188 в 1 мкл (36%).Процент фагоцитирующих нейтрофилов:через 30 мин - 38; через 120 мин -21,4,5 1 3,5 3 1,4. Таким образом, перед поступлением в клинику у больной в течение Составитель Н.Хрусталева Техред Л.Сердюкова Корректор С. Черни Редактор Т,Парфенова Заказ 6151/48 Тираж 776ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Подписное Производственно-полиграФическое предприятие, г.ужгород, ул,Проектная 4 7 13Абсолютное количество фагоцитирующих Е-РОН через 30 мин 451,4 в 1 мкл; через 120 мин 249,5 в 1 мкл.ФИ через 30 мин - 4,8; через 120 мин - 5,5.АФП через 30 мин - 2166,7 в 1 мкл; через 120 мин - 1372,2 в 1 мкл,8.06.84 г. у больной нормализовался диурез, увеличился до 1000 мл, уменьшилась интенсивность болей.Однако в связи с тем, что дефицит фагоцитирующих Е-РОН и АФП сохраняется, рекомендован повторный курс стимулирующей терапии. Проведен курс продигнозана.Иммунологические показатели: содержание Е-РОН 1823,3 в 1 мкл (377.).Процент фагоцитирующих нейтрофилов через 30 мин - 48; через 120 мин 29.Абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов через 30 мин - 875,1 в 1 мкл; через 120 мин528,7 в 1 мкл.ФИ через 30 мин - 4,5; через 20 мин - 3,5.АФП через 30 мин - 3937,9 вмкл; через 120 мин - 1850,4 в мкл. трех месяцев отмечался субфиорилиотет (до 38 С), периодические приступы болей в правой. поясничной области, снижение суточного диуреза до300 мл, При поступлении анализ мочи:лейкоциты до 100 в поле зрения; анализ крови: лейкоциты 25,000, палочкоядерные нейтрофилы 10 К; сегменто 10 ядерные нейтрофилы 54 Х; лимфоциты293; моноциты 7/Мочевина крови 5,2 мм/л, креатинин 0,12 мм/л. На обзорных рентгенограммах теней конкриментов в проек 15 ции почки и мочевыводящих путей нет,На серии урограмм функция почки своевременная.Ренография: секреторная и эвакуатарная. функция правой почки умеренно20 снижена, дефицит очищения ЗОБ,Иммунологические исследования выявили у больной вялотекущий воспалительный процесс, обусловленный дефи=цитом функции Е-РОН звена, В резуль 25 тате первого курса стимулирующей терапии продигиозаном в сочетании с антибактериальной терапией у больнойулучшились клинические и лабораторные данные, однако, по иммунологиЗО ческим показателям сохранился дефицит фагоцитирующих Е-РОН.и АФП, чтопотребовапо повторного курса стимулирующей терапии продигиозаном,В результате второго курса стиму=лирующей терапии в сочетании с антк 35бактериальной терапией у больнойнормализовались клинические, лабораторные и иммунологические показатели. Больная в удовлетворительном сос 40 тоянии выписана домой.