Способ определения иммунодефицитного состояния у больных с воспалительными заболеваниями

/ 5 (13) А к ВВт 0) скОму.сВи ЛЬСТ 2) 11.06,8 Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам(56) Авторское свидетельство СССР Х1359745, кл. 6 015 33/35, 1987.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ У БОЛЬНЫХ С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИЗАБОЛЕВАНИЯМИ(57) Изобретение относится к медицине нможет быть использовано в клиническойиммунологии для определения иммунодсфи(19) 3 3 (11) 1 83 (51) б б 01 Х 33/5 цита, Целью изобретения являстся повыщсние точности способа. Цель достигается тем, что опрсделяют количество двойных розеткообразующих псйтрофилов, несущих рецепторы к эритроцитам барана и С- фрагменту комплекта, и фагоцитарную ак- Об тивность двойных нейтрофилов при температуре 12 С и ниже, и при снижении количества и фагоцитарной активности двойных нейтрофилов на 50% и ниже при КР нсзавсршснном характере фагоцитоза определяют иммунодефицитное состояние при воспалительном процессе по выявлению блокады фагоцитоза двойных нейтрофилов,1835925 Изобретение относится к медицине иможет быть использовано в клиническойиммунологии для определения иммунодед ицита по оценке функционального состояния популяции двойных нейтрофилов 5периферически крови человека при воспалительных заболеваниях.Целью изобретения ярряется повышение точюос 1 й,.сйрсоба,.,Способ овуФествляется следующим образом:. В, силикойизираеайную пробирку на6 мл смеси фиколцауротраса плотностью1,070-1,073 г/мл и 1,080-,1,083 г/мл наслаивают 3 мл цельной крови и центрифугируют15-30 мин при 0-4 и 1000-1500 об/мин. Образуются две границы раздела: первая -между плазмой и смесью плотностью 1,073,вторая - между смесями в разными плотностями. В результате получают две чистыевзвеси клеток: лимфоцитарную и нейтрофильную, Взвесь нейтрофилов переносят вдве пробирки, в каждой из которых соединяют Зх 10 клеток в 0,1 мл с 0,1 мл 1-2 млрдвзвеси золотистого стафилококка (штаммЛепин). Первую пробирку с этой смесью инкубируют при температуре ниже 12 С в течение 30 мин, вторую - в течение 120 мин.Дополнительно перемешивают покачиванием каждые 10 мин, Затем взвесь переносят на предметные стекла, сушат, 30фиксируют метанолом 3-5 мин.Определяют содержание лейкоцитов (1.)в 1 мкл, подсчитывают содержаниенейтрофилов среди всех:лейкоцитов в мазке крови. Зная процентное содержание 35нейтрофилов, высчитывают их абсолютноеСодержание й 1.х 1И100 40ЧИ (чеРеэ 30 мин) = = 4,7275 45 Абсолютный фагоцитарный покаазатель (АФП):АФП (через 30 мин) = 4,7 х 88,2 = 414,5 в1 мкл;АФП (через 120 мин) = 4,3 х 63,8 = 274,3 в 50 1 мкл 58 4,7ИЗф =- 1,25255 П р и м е р 2. Определение фагоцитарной активности двойных нейтрофилов(О=РОН),Разделение клеток крови производятнаслаиванием на градиент фиколла-уротраста плотностью 1,070-73 и 1,080-83 г/мл. В аппарате подсчитывают процент Ороэеткообраэующих нейтрофилов (О=РОНа), зная относительное содержание О=РОН вычисляет их абсолютное содержание М,Йха 100В препаратах 2 и 3 просчитывают процент фагоцитирующих клеток (бмин, в - 120 мин инкубации), Вычисляют абсолютное их количество (РУ)Мхб Мхв100 100 Фагоцитарный индекс (ФИ) - среднее число фагоцитированных бактерий одним двойным нейтрофилом в препарате 2 и 3 для каждого в отдельности.Абсолютный фагоцитарный показатель (АФП)" ФИхР или Г,Индекс завершенности фагоцитоза ИЗФб(30 мин) 7 И(30 мин)в(120 минТ 7 И(120 минТ2 П р и м е р 1, Определение фагоцитарной активности двойных нейтрофилов у практически здорового человека.В иммерсионной системе микросокпа в 6-7 разных полях зрения в препарате 1 получено 47. О=РОН, в препарате 2 (инкубация 30 мин) 58 ь фагоцитирующих клеток, содержание лейкоцитов в 1 мкл крови (1) - 6550, процентное содержание нейтрофилов в формуле крови (1) 58. В препарате 3 (инкубация 120 мин) 42 фагоцитирующих клеток. Подставив в формулы цифровые значения, получают 6550 х 57И = "= 3799 в 1 мкл 3799 х 4М = - -151,9 в 1 мкл 100 151, 9 х 58Р -в в :88,2 в 1 мкл (30 мин) 100 151, 9 х 42Г -:63,8 в 1 мкл (120 мин) Фагоцитарный индекс (ФИ),Количество фацитированных О-нейтрофилами бактерий,через 30 мин (б) 275через 120 мин (в) 182 7 И (через 120 мин) = = 4,3182Центрифугируют смесь при 0-4 С со скоростью 1000-1500 об/мин. Получают две чистые популяции клеток; лимфоцитарную и нейтрофильную, Соединяют 0,1 мл (Зх 10 клеток в 1 мл) с 0,1 мл 1-2 млрд. взвеси стафилококка (штамм Лепин) в двух пробирках, в каждой иэ них, Инкубируют смесь в первой пробирке в течение 30 мин, во второй в течение 120 мин при температуре ниже 12 С,Определяют наличие рецепторов двойных нейтрофилов по способу,Для определения фагоцитарной активности субпопуляции двойных нейтрофилов по определению наличия на нейтрофилах рецепторовдополнительно проводятсоединение взвеси двойных нейтрофилов с микроорганизмом, инкубэцию субпопуляции двойных нейтрофилов с микроорганизмом о течение 30 мин, инкубацию двойных нейтрофилов с микроорганизмом в течение 120 мин, инкубацию при температре ниже +120 С.П р и м е р 3. Больной Кпоступил в клинику с диагнозом: стриктура уретры, двусторонняя гидронефротическая трансформация почек, осложнившаяся хроническим пиелонефритом, нефункционирующая левая почка, гнойный цистит, гнойный уретрит. 2,07.84 больной оперирован по поводу апостематозного пиенилонефрита. Произведена нефростомия, декапсуляция левой почки. В послеоперационном периоде состояние крайне тяжелое с явлениями уремической и гнойной интоксикации, что потребовало проведения сеансов гемодиализа (ОЗ, 05 и 09,07,84), 05,07.84 дополнительно с дезинтоксикационной целью проведен сеанс гемосорбции. Состояние оставалось тяжелым. Больной предъявлял жалобы на резкую слабость, сухость во рту. Печень выступала из-под края реберной дуГи нд 3 см,12.07.84 Состояние больного тяжелое. Температура тела 38,3 С. Лабораторные показатели, Анализ крови: лейкоциты 12,7 х 10 /л, п, п, л, м, Анализ ма 9чи: удельный вес 1017, реакция щелочная, белок 0,33%, эритроциты покрывают все поля зрения. В посеве мочи - смешанная микрофлора (кишечная палочка + коккобациллы). Креатинин крови 0,5, моче- вина 21,5 ммоль/л, Иммунологические исследования. Содержание О=РОН 3320,1 в 1 мкл (42%), процент фагоцитирующих клеток: через 30 мин 92; через 120 мин 92, Абсолютное число фагоцитирующих нейтрофилов через ЗО мин 3054,5 в 1 мкл, через 120 мин 3054,5 в 1 мкл, Фагоцитарный индекс: через 30 мин 11,3; через 120 мин 9,6,10 15 20 25 30 35 40 45 50 Абсолютный фагоцитарный показатель через ЗО мин 34515,7 в 1 мкл; через 120 мин 25966,7 в 1 мкл,Индекс завершенности фагоцитоза92 11,3Ю 9 ВИЗф ="= 1,2 Таким образом, наличие апостематознога пиелонефрита, сопровождающегося гнойной и уремической интоксикацией, вызывает увеличение в периферической крови в 20 раз содержания двойных нейтрофилов, в 2 раза фагоцитарного индекса, в 34 раза абсолютного числа фагоцитирующих клеток и 83 раза абсолютного фагоцитарнога показателя для двойных нейтрофилов, При сравнении с показателями практически здоровых лиц фагоцитоэ также имеет завершенный характер,После проведения курса антибактериальной терапии, сеансов гемосорбции и гемодиализа нормализовались клинические, лабораторные и иммунологические данные.П р и м е р 4. Б-й Р. 56 лет, Поступил в отделение с диагнозом: аденома предстательной железы, камень мочевого пузыря, Впервые острая задержка мочи год назад, Представительная железа при ректальном обследовании увеличена в 1,5 раза, плотно- эластической консистенции, безболезненная, срединная бороздка не выражена,На нисходящей цистогорэмме определяется дефект наполнения по нижнему контуру мочевого пузыря.13.03.86 произведена трансуретральная резекция аденомы предстательной железы, цистолитотрипсия. В послеоперационном периоде подъем температуры обусловлен воспалением в шейке мочевого пузыря.24,03,86 Иммунологическое иссоледование, Содержание О=РОН 166,3 в 1 мкл (11%), процент фагоцитирующих клеток: через 30 мин 46; через 120 мин 52, Абсолютное число фагоцитирующих нейтрофилов: через 30 мин 76,5 в 1 мкл; через 120 мин 86,5 в 1 мкл. Фагоцитарный индекс: через 30 мин 2,8; через 120 мин 2,4. Абсолютный фагоцитарный показатель: через 30 мин 214,2 в 1 мкл; через 120 мин 207,5 в 1 мкл,Индекс завершенности фагоцитоза 46 2,8 ИЗф -= 1,0 2 Таким образом, у больного наблюдается снижение ФИ, абсолютного числа фагоци тирующих клеток, АФП в среднем в 3 раза О-РОН звена нейтрофилов. Следовательно,Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента 113035, Москва,Ж, Раушская наб 4/5Заказ 137 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 антигенный стимул при хроническом пиелонефрите недостаточен для того, чтобы активизировать двойные нейтрофилы.Таким образом, способ позволяет более точно определить иммунодефицитное соФормула изобретенияСПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ У БОЛЬНЫХ С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ путем исследования количества роэеткообраМующих нейтрофилов крови и их фагоцитарной активности, оттиающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определястояние при воспалительном процессе, поскольку блокада фагоцитозэ двойных нейтрофилов является обязательным условием иммунодефицитного состояния и перехода 5 острого воспаления в острый сепсис,ют количество двойных розеткообразующих нейтрофилов, несущих рецепторы к эритроцитам барана и С-фрагменту ком племента, и фагоцитарную активностьдвойных нейтрофилов при температуре 12 С и ниже и при снижении количества и фагоцитарной активности двойных нейтрофилов на 50 и ниже прю неза вершенном характере фагоцитоза определяют иммунодефицитное состояние,