Способ деконсервирования клеточных суспензий

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(23) Приоритет й 01 Ы 1/02 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий.1(088.8) Опубликовано 150982. Бюллетень МР 34 Дата опубликования описания 15. 09,82(71) Заявитель Харьковский институт проблем криобиологии и криомедицины АН Украинской ССР(54) СПОСОБ ДЕКОНСЕРВИРОВАНИЯ КЛЕТОЧНЫХСУСПЕНЗИЯ10 15 20 30 Изобретение относится к криобиоло.гии, а именно к способам деконсервирования биологических материалов, вчастности ядросодержащих клеток костного мозга.Известен способ деконсервирования клеточных суспенэий, заключающийся в том, что клетки сначала .отогревают на водяной бане при 40 С,оа затем к ним добавляют для стимулирования процессов метаболизмапрепараты экэогенных нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) 11,Однако известный способ обеспечивает сохранность только 68-70 клеток и не исключает компактизации клеточной суспенэии, приводящей к неравномерному распределению размороженных клеток по объему. Кроме того, необходимость введения в организм реципиента вместе с переливаемым костным мозгом биостимуляторов, стерилизация которых затруднена, создает угрозу нарушения стерильности переливной суспенэии.Целью изобретения является повышение жизнеспособности размороженных клеток. Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа деконсервирования клеточных суспенэий путем отогрева на водяной банена суспенэию после отогрева воздействуют ультразвуковыми колебаниями интенсивностью 0,2-0,8 Вт/см с и частотой 880-2700 кГц в течение 30 с - 3 мин. Способ осуществляют следующимобразом. Клеточную взвесь, замороженную в ампулах или контейнерах, отогревают до положительных температур в бане при 40 оС. После этого биологический материал в стерильных условиях переносят в стеклянный флакон, в котором на суспенэии воздействуют УЗ-колебаниями интенсивностью 0,2-0,8 Вт/см- и частотой 880- 2700 кГц.П р и м е рКонтейнер с костным мозгом, замороженным с 15 ПЭОдо -1960 С, вынимают из жидкого азота и быстро в течение 5-10 с помещают в водяную баню с температурой 40 оС, используя аппарат для размораживания биологических суспензий, 957811Размораживание производят в течение 30 с до 5 С. Для равномерногоотогревания внутреннего содержимогоконтейнер, подвергают постоянному покачиванию со скоростью 2 качания в1 с в вертикальном направлении. 5После этого клеточную взвесь переносят в стеклянный флакон, который размещают на ультразвуковом излучателе,обеспечив акустический контакт междупреобразователем и донышком флакона,включают генератор ультразвука и обрабатывают размороженную суспензиюультразвуковыми колебаниями частотой880 кГц и интенсивностью 0,4 Вт/смПо истечении 3 мин генератор отключают. После этого определяют жизнеспособность клеток по эоэиновой пробе и количество их в 1 мкл суспензни,Результаты деконсервации приведены в таблице.Как видно, жизнеспособность клеток в озвученной суспенэии в среднем на 20% выше, чем в не озвученной. При этом количество ядросодержа-. щих клеток в 1 мкл суспенэии после обработки ее ультразвуком несколько выше, чем до обработки, Это свидетельствует о том, что ультразвуковые колебания способствуют декомпактиэации клеточных ассоциатов, эа счет чего наблюдается более равномерное распределение клеток по объему суспенэии. Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить процент сохранившихся в жизнеспособном состоянии клеток в среднем на 25.1 1 1 1 1 .1 ч1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 11 1 1 1 1 1 1 1 1 хц 11ооожр 1ц 1й ы1одннео цо ххбхфоо Ь Ф О о а И Ы 63 ф о х х о й х 9 ц ц о о Дл М ф о х ф о О Ф ФХ о Х 1 1Х 1 ОохФ 1 Хф 1 ФНа ЦОЛФ ООО 1 ОФХ 1 ИО 1О 1ц 1 аРа6 ОХЦ 1 ОхО НО 1 ООЦ 1 ЦЮ Х 1 1 11 Оюохф 1 ХО ФНЕ ЦОО 1О ООхоюО ИР,МФ 1 10 1ю1 йФ 1 ОХохО 1 ООЦ ЦО Х 1 1 1Х 1 О 1о хФ 1 Х 1ф 1 ФНЯ 1а ЦОФ 1 ООо оюх 1 ИОО 1це 11 а1 О1Ф 1 ОХ 1цохО НО 1 ООИ 1 ЦО 11 163 1о 1ох 1х х 1б хв Фф 1охС И сО 3 л миф Ь Ь с с ао м о о 10 10 1 О а а957811 Формула изобретения Составитель Л,СоловьевТехред М. Надь Корректор Б, Бутяга Редактор М.Недолуженко Заказ 6843/2 Тираж 699 БНИИПИ Государственного комитета СССР по Ледам изобретений и открытий 133035, Москва, Ж, Рауцская наб., д, 4/5Подписное Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Способ деконсервнрования клеточных суспензий путем отогрева на водяной бане о т л и ч а ю щ и йя тем, что, с целью повьпаения жизнеспособности размороженных клеток, на суспензию после отогрева воздействуют ультразвуковыми колебаниями интенсивностью 0 2-0,8 Вт/см и частотой 880-2700 кГц в течение 30 с - 3 мин. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Криобиология и криомедицина. Сборник. Киев, Наукова думка,1979, с. 57-б 9,