Способ получения дрожжей в капсулированной форме

3 94517Дрожжи культивируют при рН 5 - 6 на средеследующего состава, г/л дистиллированной водыМанноза 20,0 - 40,0Пелтон1,0-4,01,0-4,0МцЗО 4 0,005.-0,03Дрожжевом экстракт 05 - 2,0Среду стерилизуют автоклавированиемпри 0,5 атм 15 - 20 мин, Среда может бытьиспользована в жидком виде, агаризованная о(2% агар-агара) с накладыванием на поверхность стерильного целлофана, а также дпявычащивания на гипсовых блоках. В качествеинокулята используют 2-3 суточные культурыдрожжей, выращенные на сусле-агаре.35Культивирование ведут при температуре нао5 - 10 С ниже, чем оптимальная для роста исследуемых дрожжей, т. ев большинстве случаевв диапазоне 15 - 25 С,Максимальных размеров капсулы при росте 2 Одрожжей в жидкой среде в периодическойкультуре достигают в фазе замедления роста -начале стационарной фазы, при росте на плотныхсредах - у 3 - б суточных культур.Для выявления капсул используют препараты 25живых клеток в туши, приготовленной поЛиттману и светлбпольную микроскопию.П р и м е р 1, Готовят среду следующегосостава, г/л дистиллированной воды:Манноза 30,0 зеПелтон 0КН Р 04 2,0МОЗГ 0,01Дрожжевойэкстракт 10АгаР-агар 20,0Стерилнзуют при 0,5 атм 15-20 мин рНустанавливают 6,0. Расплавленную среду разливают по чашкам Петри или в пробирки и заквашивают Засевают суспензией клеток дрожжей 4 она 3 суточных культур дрожжей, выращенныхна сусло.агаре. Инкубируют при 20 С.Средние размеры капсул у клеток дрожжей,выращенных на предлагаемой среде и, длясравнения, иа среде Литтмана, приведены в 45табл. 1. (М - средняя арифметическая из 200 -300 измерений; й - доверительныеграницыпри- 0,95) .Из табл. 1 видно, что во всех случаях у,капсулообразуюших организмов, в том числе и 5 оу Сг. пео 1 оггпапа на предлагаемой среде кап 2 4супы образуются больших размеров, чем на среде Литтмана, а у ряда культур образование капсул имеет место только на предлагаемой среде. При этом следует учесть, что при выращивании на среде Литтмана используют пониженную темпе ратуру инкубации, поскольку при рекомендуемой Литтманом температуре (37) подавляющее большинство капсулообразующих дрожжей вообще не. растет.П р и м е р 2, Используют жидкую среду, состав которой приведен в примере 1. Ее разливают в стерильные чашки Петри, с установленными в них гиисовыми блоками, слоем около 5 мм, Гипсовые блоки готовят смешивая Х ч. гипса с 3 ч воды. Из полученной пасты изготовляют блоки цилинд. рической формы или в виде усеченного конуса высотой 1 см, После затвердения блоки помещают в чашки Петри и стерилизуют сухим жаром 2 ч при 110 - 1 ЮС. На верхнюю поверхность блоков наносят суспензню клеток дрожжей из 2 - 3 суточных культур, выращенных на сусле-агаре. Инкубируют в течение недели при 20 С.В табл.,а представлены данные о численности капсулированных клеток и толщине у них капсул у ппзммов. дроясжей, у которых не удается добиться капсулообразования при использовании других способов выращивания, В . отличие от. хорошо образующих капсулу культур дрожжей, у которых все клетки капсули- рованы, штаммы, указанные в табл. 2, имеют невысокое содержание капсулированных клеток.Независимо от типа уплотиителя больших размеров капсулы у дрожжей формируются на плотной среде, чем при росте в жидкой то же состава. При этом обнаружено, что максимальной толщины капсулы образуются при использовании метода выращивания дрожжей на гипсовых блоках. Этот метод рекомендуется прн работе со штаммами, характеризующимися очень слабой способностью к капсулообразованию. С помощью его удалось добиться образо. вания капсул у некоторых штаммов, не образующих их при росте в жидкой среде или на агаризоваинои среде.Таким образом, преимущество предлагаемого способа по сравнению с известным заключается в том, что он пригоден для выращивания всех кансулообразующих дрожжей и позволяет получить культуры в более капсулированной 1форме, чем при использовании способа Липмана(Сг. ее 1 Ьовце) а СВЗ 2102 ф Сгуртососсцв а 1 Ьдцв чаг.аегюв (=Сг. тегбсо 1 цв) СВЗ 4517 Сг.а 1 ЬнЬв чаг. а 1 ЬЫцв МГУ 525 Сг.а 1 Ьдцв МГУ 1555Сг.а 1 Ьдцз чаг. а 1 Ьдцз ИГУ 2030 Сг, а 1 Ьдцв чаг. ФН 1 цепв МГУ 176 Сг. а 1 ЬЫцз чаг. дЖ 1 цепз ВКМ У - 1592 ф Сг.а 1 Ьдцз чаг, дЖ 1 цепв (Сг.ЬЬйапепве)ССУ 17 - 15 - 1Сг. е 1 щочй СВЗ 705 Р Сг. Лачцв АТСС 10656 ф Сг. давтпсцв СВЗ 1927 ф Сг. Ьппа 1 ауепва ССУ 17 - 14 - 1Сг. Ьмтюпд ССУ 17 - 11 - 1 ф Сг. 1 ацгеп 1 и МГУ 1805Сг. 1 ацгепб чаг. Лачевсепв ВКМ У -1595+ Сг. вадпцз чаг. вадпцз МГУ 637 Сг. тадпцз чаг,атег ВКМ У - 1534 ф Сг. пео 1 оппапв (=Т.пео 1 огаапв чаг.вЬерре)ГИДУВ 350/753. Сг. пео 1 огтапв серотип А ГИДУВ 228/151СгЛеггецз СВЗ 1895 ф Б 1 Ьазнища сарзц 1 щепце тип спариванияс(ВКМ У - 1439 фР. ИогЮогве диплоидСВЗ 6240Р. ИогИогве тип спаривания АСВЗ 6241 Средняя топтпина капсул, мкм Предлагаемая среда Среда Липмана МТ Ь МЙАПредлагаемая среда М д Среда Литтмаиа МРЛ 1 огИоппе тип спаривания сС 83 6242З,у.г 00,1 Р, опщоттц 1 атоа тип спаривания 1730а С 88 Ч 730 0,0 0,0 0,0 Напвепц 1 а сарзо 1 ата ИБФМ У 1.Ьрогпусез 1 ро 1 ег МГУ 133 1,7+0,1 0,7+0,1 0,0 0,0 1,9 т 0,1 0,9+0,1 О,О 2,010,1 УУ Типовые штаммы видов,Таблица 2 Толщина капсул,мкм, М ЬОтносительное Виды и разновидности пггаммов содержание капсулированных клеТОКУ % Сг. аЬдцз чаг. бгН 1 цепв ( Сг. ЬЬцтапепвз ) ССУ 17 - 15 - 1 0,9+0,1 СгЛ 1 амоз АТСС 10656 ф0,9+0,1 0,1 Р. цЫдцттц 1 атца СВЗ 1730 УУ 2,2+0,5 Формула изобретения и пелтон в количествах 20 - 40 и 1 - 4 г/л, приэтом выращивание ведут при рН 5 - 6, а1. Способ получения дрожжей в капсулирована инкубирование проводят при 15 - 25 С.ной форме, предусматривающий выращивание2, Способ по п, 1, о т л и ч а ю щ и й с яих в жидкой илн на плотной питательной сре. 1 тем, что выращивание дрожжей проводят наде, содержащей источник углерода, источник гипсовых блоках, помещенных в жидкуюазота, минеральные соли и витамины с после- питательную среду.дующей инкубацией, о т л и ч а ю щ и й с я Источники информации,тем, что, с целью стимулирования капсулооб- принятые во внимание экспертизеразования, в качестве источника углерода и 1. Патент США йф 3010879, кл, 195 - 83,азота используют, соответственно, маннозу опублик. 1961,ВНЗИПИ Заказ 5260/34 Тираж 505 Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4Г тетгаврогов МГУ 116тетгазрогов МГУ 40ВЬодотогц 1 а ягавез МГУ АЯЬ. гцЬга МГУ 691 0,8+0,1 3,310,2 1 У 710,1 0,3 Ю,1 0,4+0,1