Адъювант

Сооз Советскин Социалистических Республик)М, Кл. А 61 К 35/78 с присоединением заявки-оударотвеиный комитетоввтв Министров СССРпо делам нзооретеннйк открытий(45) Дата опубликования описания 00 равьев, Л, М, Коган, А, А, Гусев, Л. П. Вечерка, В. П. Онуфриев и А. И. Собко К(72) Авторы изобретени сесоюзныи научно-иссцедоВательскип яшурны НнсГи Гу тВсесоюзный научно-исследовательский институт покарсгвеннрастении Заявите 4) АДЪОВАИТ Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в биоцогиеской промыыценности и научно-исследовательской -работе при производстве и разработке инактивированных противояшурцых вакцин, а так же диагностических сывороток.Иммуногенность и эффективность ицактивированных цротивояшурпых вакцин в значи - тельной степени увеличивается с использованием в технологии их изготовцения неспепи - О фических стимуляторов иммунитета - ацъюВантов,Известно применение в качестве адъювацтов при изготовлении ящурных антигенов гидроокиси алюминия АК(ОИ), которая являет ся слабым адъювантом в коИцексе с урными антигенамп, Масляные адъюванты (типа ацъюванта фрейда и др.), которые, обладая выраженными иммуностимулирующими свойствами, имеют повышенную реактогенность 20 и требуют создания стойких сложных эмульсий. Известны отдельные вещества из группы сапонинов, широко применяемых в настоящее время в качестве адъювантов при производстве противояшурных вакцин 1.25 В СССР прц пзготов 1 В 1 Ии иротивоящурных Вакцин испГ)ьзу 10 т икпор Гцый с 11 понин 1 изготовленный Фирмой "лЛегсК (ФРГ) из растения мыцьцяшси цекарсгвенцой - бсроГстп с оН спсн Ь ь.Однако Все изестпъ 1 е с щоиицы с адъювацтным действием 1,оп 1 са 11 и.е в читературе, и импортируемые из ФРГ и Ангпии) изготавцш 1 аюгся из растений, не произрастающих на территории ц;пней стра 1. Высокая стоимость импоргчьх препаргггов и ежегоД- ное увецпчение потребцяемогобпопромышце 1 пости и научно-иссцедоватсцьской )аботе сапоцица, увеци Ивао затраты ца его закупку за границей.Целью изобретения является расщирецие ассортимента апъювацтов. о 5 цацпюпНх Высокими иммуност 11 куцтр,до 1 ци 1 п свойствами и способных заменить импортный препарат сапониц прп производстве яшурных атТигенов испоцьзуемьх цпя поцччетпт протнвояшурных вакцин и диагностических сыворогок. Поставценная иець достигается бццгоцаря применению изгестцого прецар 1 Тгипсофицина В к ачестве адъ 1 овп 1.та В троцзподстВе яшур( 1:10000)(1;20000) формации (5%-ныйраствор), % 1Глицерин, % 10Хинозоп (10%-ныйрас твор), % 1Гипсофилин (10%-пыйраствор), % 0,5-140Антибиотики (пенициппини стрептомицин), ЕЦ/мд 200Готовят 10%-ный раствор гипсофипикана дистиллированной воде, стерипизуют кг."- пячением в течение 30 мин или автокпави 4 эрованием при 1,5 атм, в течение одногочаса,По окончании,инактивации вируса ящурав реактор добавляют под давлением ке-с.- димое количество глицерина, хинопоза и гип 50софипина, Все компоненты перемешивают30 мин пН вакцины устанавливают и предепах 7,6-7,8 путем давпения 1 М или 5%-ко.- го раствора химически чистой соляной кислоты.иВакцину охпаждают до 4-6 С и подвергают контролю на стерильность, безвредностьи иммунэгенность, после его ее выпускают для практического применения,Препарат гипсофипин используют такжев качестве апъюванта для подучения яшур ных антигенов для попучения противояцурных вакцин и диагностических сывороток.Известно применение гипсофипина топькодпя гемолиза эритроцитов при автоматическом счете лейкоцитов 12(,Гипсофилин, понукаемый из корней копю чеписткика (мыпьного корня туркестанского) 1 СИпЬОЗ)п я)рьорц 41 ОМвьиспользуется дпя работы в автомдтическихсчетчиках кровив виде 2%-кого раствора в е0,9%-ном растворе хлористого натрия,Гипсофилин состоит из тритерпеновогогликозида и опигосахаридов Агпиконом тритерпенового гликозида является гипсогениъ, аугпеводородными остатками:,Ц - гпюкозаЦгапактоза, Ц-гпюкороновая киспота, й, -ара-.биноза, 1, -рамноза, Ц-фукоза и Д-ксипоза. Гипсофипинвыпускаемый медицинскойпромышпенностью, представляет собой аморфный порошок от желтоватого до кремовогоцвета, растворимый в воде,Порядок использования гипсофитина в противоящурной вакцине следующий.100 п вакцины содержат:25Бирусосодержащийматериал, кг 6-12Гидроокись алюминия(3%-ная), %1 пикокоповый буфзр, % .Хпорэформ, %Тиомерсад ното алтл.ена при изготовлении диагн .тических сывороток.,В етом случае гипсофипин(коъшентрация 05%) добавпжот в 10%-нуювируссодержацую афтозную суспензию,предназначенную дпя гиперлммунизации морских свинок,При испэдьзэв кки гипссфипина в качестве адъювакта дня получения диагкэсичеСких сывэрэтэк А,. 0 и С устакэвдекэ, чтэ их титр с гэмэпэгичкым вирусом равен 1;80, При получении диагкэстических сывэрэтэк с испэлъзэвакием импэрткэгэ сапонина их титр кн превышает 1:40+1:30, а без добавления адъ;эвактэв сэставдяат 1:20.В пабэратэркых опытах определяли ацъювакткые свэйства гипсэфилика ддя мышей весэм 20-22 г к морских свикэк весэм 450- 500 г, На мышах и морских свинках определяли 50%-кую вакцикалькую дозу (ДУ) папикизирэвакнэй ГОА-фэрмэдвакцикы из вируса А 2 без добавления адъювакта, а также при введении гкпсэфипика и кэктрэдькэгэ сапэкика. Через 21 день пэсде иммунизации мышей и мэрских свинок заражади патогенным дпя ких гэмэдэгичным штаммом вируса ящура и пэ количеству выживших животных рассчитывали ДУ-э, Уменьшение ДУ при дэбавпекин ааъювактэв в сравнении с ДУ препарата без ких свидетельствэвапэ эб усипекии илмукитйта, т,е. эб уведичекик имллукэгеккэй активности вакцины. Отношение ДУэ препарата с адъювактэм к ДУ препарата без стимулятора иммунитета пэказывапэ вэ сколько раз сравниваемые гипсофипин и сапэкик уведичивапи иммукэгеккэсть вдкцикы.В табл. 1 приведены результаты 10 опытов, поэведенкых ка мышах с испэльзэвакиеллгипсофипина в дозе 2 мг ка 100 г веса живэткэгэ и средние результаты 5 эпытэв сконтрольным сапэкикэм в дозе 2,5 мг ка100 г веса животного,Данные табл. 1 свидетельствуют э хорошем адъювакткэм действии гипсэфидика длямышей,В табл. 2 представлены результаты изпучекия адъювакткых свойств гкпсэфиликад,я морских .викэк весом 450-500 г,сэфилик и кэктрэдькый сапэник 1906179нримекяпи в дозах 1 и 0,5 мг ка 100 г;кивэгэ веса животного.1 аким образом, гипсэфкпкк дпя морскихсвинок является таким же хэрэшим ацъювантэм, как и сапэкик фирмы "МеРсЦВ табл. 3 представлены резудьтаты опыта, проведенного ка крупкэм рогатом скоте.Гипсэфидик ц кэктрэпькый сапэкик применялись в количестве 2,5 и 10 мг ка приеивкую дэзу. О напряженности иммунитета судили пэ титрам вирускейтрадизующих антител596241 Та бл ица 1Результаты сравнительного изучения адъювантных свойств гппсофилинаи сапонина на мышах Доза адъюУвеличение пммунэгенности вакцин по сравнению с контрольной безсапонша Количество опытов ванта на100 г веса Адъювант животного, м 1,83 +0,21 0,001 10 2,0 Гипсэфилин Сапонин фирмы"Мегер" ФРГ 0,001 1,57 +0,09 2,5 Табл ица 2 Сравнительное изучение адъювантных свойствгипсофилина и сапонина на морских свинках Увеличение иммунэгенности вакцин по сравнении сконтролем Дозана 100 г ДУ, мл Адъюванты в мг 95 0,77 Гипсофилин То же Сап онин То же(вакцина без сапонина ) 1,50 в сыворотке крэви животных с гомологичным вирусом ящура А (1000 ЛД,), Средние титры вируснейтрапизующих антител пэ группам выражали в логарифмах с основанием 2 (лог.). При этэм считали, что чем выше титры вируснейтрализующих антител, тем сильнее адъювантное действие, обусловлен-. ное гипсофилинэм или сзпэнином.Из табл. 3 видно, что введение в вирусный препарат гипсэфилина спосэбствует бо лее раннему образованию вируснейтрализующих антител. Так, вакцина с гипсофилинэм в прививной дозе в количестве 2,5 и 10 мг обуславливает образование вируснейтрализующих антител на 7 день в титрах 2,9 и 15 3,24 лог,2 соответственно. Контрольный са. понин в этот же срок и в таких же дэзах вызывает образование антител в титрах 1,36 и 2,08 дэг У животных, привитых: вакцинэй без сапэнина, к этэму времени антитела еще на образовались, а на 21 деньони не превышали .2,65+ 0,57 лэг У животных, привитых препаратом, содержащимгипсофилин, титр антител был 4,851 0,52 лог,при дозе 2,5 мг и 4,47+ 0,52 лог, придозе 10 мг, В эти же сроки тирантител у живэтных, привитых препаратом, содержащим контрольный сапонин 1906179в дэзах 2,5 и 10 мг, был равен 4,32ф 0,54 и 4,66 0,46 лог Таким образомрезультаты табл. 3 свидетельствуют э хороших адъювантныхсвэйствах гипсэфилина приоценке на крупном рогатэм скоте, при этомего иммунэстимулирующая активность в отдельных опытах даже выше, чем у импортного сапонина фирмы ЯесМ596241 7 8 Табл ица 3 Адъювантные свойства гипсофилина и сапонина в опытах на крупном рогатом скотес 1 2,9 3,99 4,85 +0,52 О,025 с 1 3,24 4,42 4,47 +0,52 с 0,005 10,0 с 1 2,36 с 1 2,081 с 1 4,04 4,32 +0,54 с 0,025 1,5 10,0 4,66 + 0,46 сО, 100 4,07 без са- понина Вакцина А(серия 21) 181 2)65 +Оф 57 МОф 050 г 5Формула изобретения Применение гипсофилина в качестве адъюванта, при изготовлении ящурных антигенов. 30Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: Составитель Л, МураяРедактор Е. Меньшова Техред М, Кепемеш . Корректор, П. Макаревич Заказ 930/6 Тираж 702 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская набд. 45филиал ППП "Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Гипс офил ин То же Сап онин То же1. Воробьев А. А и Васильев Н. Н. Адъюванты (Неспецифические стимуляторы иммуногенеза), М., "Медицина", 1969 гс. 18.2. ТУ-4-6-75 на Гипсофилин, ут вержденные Техническим управлением Министерства медицинской промышленности 17.01.75, с. 14.