Микроколоночный радиохроматограф

Союз Советскии Социалистических Республик(11) 525881 АВТОРСКОМУ СВИДЕПДЬСТВ олнительное к авт, свид-ву(22) Заявлено 27.05.75 (21) 2142940/2 заявкис присоединени (23) Приоритет (43) Опубликов сударственнай комитетавета Министроа СССРоо делам иэооретеиийи открытий 25.08.76.Бюллетень3 53) УДМ ,543,544.0 (088,8).Виноградом, А, М.Ф. И. Романов, О. А 2) Авторы изобретени прозрачную тр сцинтиллятора,Очнако для ствител ьность но при работе олненную гранулами,умно жителрактерны низкая чувразрешение, особено. количеством вешестований с исчастности ультрамикро ния активхроматогра том, а именений, , мече- при меняемьЫ еряемый ции можно О узфото лохое малым ледо вани й. Известен микроколоночный хроматограф, содержащий микронаносы, градиентное устройство объемом до 1500 мкл, микроколонку объемом30-100 мкл, фотометричес кий детектор-.и" микроколлектор фракций объе мом 2 - 6 мкл, В случае анализа радиоак- ,тинных соединений фракции элюата переводт ,;"в кюветы большого объема, содержащие спиньиллчтор и измеряют активность в стати, ."ческих условиях.Известен также хроматограф с раздели,тельной системой и проточны1 ционным детектором, представ 25 м сцинтилляляюшим собойо Изобретение касается исследпользованием меченых атомов,особой области биохимическогойанализа", устройств для измерености в элюате,микроколоночныхфов с преформированным грацие1но измерений активности соединдьтх Зн и 1 Ао, наиболее частов биологии при условии, что изэлюаг не перемешивается и фраиспользовать для дальнейших ис4 Известен и хроматограф, предназнбченньйщи работы с радиоактивными веществамисодержащий градиентное устройство, разделительную колонку, наполненную сорбентом,и детекторы, одним из которых являетсярадиометрический. бн представляет со-бой блок сцинтиллируюйей пластмассы спроточкой для протекания элюата. Проточ 1 ка имеет спиральную форму для увеличенияповерхности взаимодей",твия жидкости со)сцинтиллятором,1Однако при помощи такого хроматогра-фа невозможно измерять радиоактивностьзлюата в случае применения хроматограри-ческих микроколонок, поскольку пропорциотнальноеуменьшение объема, проточного детектора приводит к тому, что в его объеме,который для устранения размытия пика должен быть доведен до 1 мкл, в единицу вре 258814 ени находится ко 1 ш чество радиоактивногос 1 цествнедостаточное ши набора статистически достоверного числа распадов,особенно в случае измерения нйзких удельных активностей,5Регистрация активности в отобранныхфракциях путем смешивания вручную фракп,ий элюата с жидким сцинтиллятором приводит к потере разделенных веществ и чевозможности их дальнейшего использования 16 (проба 2 - 6 мкл растворяется в 10 мм жидкого сцинтиллятора), кроме того происходят необратимые реакпии. Целью изобретения является обсспечение ф возможности статистически достоверного измерения активности элюата и сохранение аьализируемого вещества для дальнейшей работы.Это достигается тем, что объем спираль- ного канала детектора равен объему градиентного устройства, причем этот спиральный канал имеет сечение не превышающее сечения микроколонки. Хроматограф снабжен управляющим вычислительным устройством.На фиг, 1 показана схема предложенного хроматографа.Предметное устройство представляет собой капилляр 1, заполненный растворам сЗО преформировацным градиентом конпснтрацци элюата, и капилляр 2, заполненный промывочным раствором. Капилляры соедицецы с микронасосом 3 и колонкой 4. На выходе микроколоцки в хроматографс установленыЗб спектрофотометричсский детектор 5, проточный спиральный капал 6 из сицтиллцруощего материала, целиком находящийся в по- ле эреция двух фотоумножителей 7, вклсченных в схему совпадений 8, которая под 40 ключена к управляющему устройству 9, соедииеццому со схемой совпадеций 8, регист- втором 10, коллектором фракций 11 и микюнасосом 3.Злюат иэ капилляра 1 микронасосом 3 45 подают цл микроколойку 4. клюат, выходящий из колонки, подают на проточный спектрофотомстрический детектор 5 а затем в спиральный канал из сцццтиллируюшего мате- риала 6, сечение которого равно сечению БО капилляра 1. Нарастание активности в процессе цакоцлсция элюата в капиллярной кювете измеряют с ломоцью двух фотоэлек- гоццых умножителей 7, включенных в схел 1 у сов 1 йпеций 8, реэультйты измерений Я обрабатывают ц эацолцяют с полюшью вычислитсльцого уцрацляюцего устройства 9 и фиксируют с помоиью регистратора 10. Пс окоцч 1 ции процесс хроматографцрования, лсгпл в с; элнмт1 брац ц сцра 1 цлгол 1 кацаО ле измерительной сццнтилляционной кл ы, к колонке 4 подключают капилляр 2 в канал которого помещены промывающие растворы для очистки колонки и кюветы. Работу насоса 3 регулируют в процессе хроматографировация с помощью вычислительного управляюшего устройства 9 с целью получения более достоверньи данных об уровне1активности в каждом пике. Принцип регулирования работы насоса в процессе хроматографирования показан на фиг. 2, где по оси абсцисс отложена скорость счета, а по оси ординат - время.После того как интегратор зафиксирует изменение знака кривой, подается сигнал для прекращения работы насоса на определенный заранее заданный отрезок времени .М для того, чтобы произвести надежное измерение уровня активности в каждом отдельном цике.Данные, полученные в процессе хроматографировация в период цакоцления элюата в измерительной кювете, записанные на ленте самописца и отложенные в память вычислителя-интегратораиспользуют и дальнейшем для разлива элюата в коллектор фракций таким образом, чтобы в одной кювете оказался весь раствор, содержащий определенное радиоактцвцое вецество (соответствующее отдельцол 1 у нику ца записи), Точки перегиба ца записи (чсрцый кружок на фиг, 2) находят с юмошью интегратора-вычислите 3 ля путем осрсдцецця цешц.х в окрестноститочки, В момснт прохождения точки переги ба ца записи уровня скорости счета подают сигнал на коллектор фракций, от которого производят смену сосудов, В итоге получают простое чередование активных и неактивных кювет, т.е, в одном сосуде содержится раствор, вмещающий всю радиоактивную зону, а в следующем содержится пустой элюат, соответствующий промежутку между пиками еВыдавливание элюата из спирального саиала 6 в коллектор фракций 11 произво. дят промывным раствором из капилляра 2. Процесс дозирования элюата в коллектор также контролируют с помощью радиометрического счетчика, т.е. производят запись уровня скорости счета. В итоге получают картину обратную той, что была получена в процессе хроматографщрования, Отличием . является только отсутствие временных задержек для набора статистики, Контрольнаяапись необходима для установления факта отсутствия сорбции ца стенках капилляров. формула изобретения 1. Микроколоцочцый радиохроматограф, л пнй Фкпа.о.:ь градиентное уст 1й тв, ,крк:онку, п 1 нолпенну сорбен, 1 ом, сиектрофотометрический детекторФ рА дф диметрический детектор в-виде проточного спирального канала, выполненного из сцинтилляционного материала и фотоэлектроннък умножителей, включенных в схему совпадений и коллектор фракций, регистратор, о т л и ч а ю ш и й с я тем, что, с 1 целью обеспечения возможности статистичес а ки достоверного измерения активностиэлкФЛа И СОХРАНЕНИЯ АПАЛИЗИ 1 У НО ПИИгтПА для дальнейпей работы, объем спирапп 1 г о кана-ла детектора равен объему градиентного устройства, причем ест спиральный канал имеет" сечение, не провышакциее сечения микр 4- колонки2, Радиохроматограф ло и. 1, о т:л и ч 8 ю щ и й с я тОФа) что выход детектора через вычислительное управляющееустройство подключен к микронасосам -иколлектору фракций.(. Заказ 5150/492 . Тираж 1028 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4