Способ хранения проб желчи для микроскопических исследований

ЕТЕН мия им.И.М,СечЖЕЛЧИ ДЛЯОВАНИЙ в частности Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам ОПИСАНИЕ ПАТЕНТУ 1(71) Московская медицинская акадченова(73) Галкин Всеволод Александрови(54) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ ПРОБМИКРОСКОПИЧЕСКИХ ИССЛЕД(51) 5 Аб 1 Х 1 28 гастроэнтерологиа Сущность изобретения, в нативную пробу желчи последовательно вводят 1%-ный раствор метиленовой сини в соотношении 1: 4 - 2: 8 с последующим добавлением через 10 - 20 мин безводного глицерина в соотношении 1: 4 - 2: 8, после чего полученную смесь содержат при 4-8 С. Способ позволяет проводить микроскопическое исследование желчи в течение 5 - У сут после дуоденального зондирования. 3 таблИзобретение относится к гастроэнтерологии, а именно к лабораторным (микроскопическим) методам исследования дуоденального содержимого,Микроскопическое исследование желчи представляет определенные трудности в связи с тем, что процедура дуоденального зондирования весьма продолжительна по времени и клеточные элементы, простейшие, присутствующие в патологической желчи 1 и арго под действием ферментов, желчных кислот быстро разрушаются. Поэтому непременным условием микроскопического анализа дуоденального содержимого служит незамедлительное его исследование по мере получения каждой очередной порцииИзвестен метод Зрлиха в модификации Ромейса суправитального окрашивания метиленовым синим или изучения периферических нервных окончаний, Мелкие кусочки или тонкие срезы помещают при 37 в 0,1- 0,25% раствор метиленового синего на 1 - 2 ч. с последующей фиксацией в течение 30- 60 мин свежеприготовленным раствором молибденовокислого аммония, затем промывают водой в течение 1 - 6 ч, обезвоживают 95 и 100% этиловым спиртами до 2 ч. Просветляют в 2 сменах терпинеола, промывают ксилолом и заключают в бальзам.Известен также способ приготовления препаратов периферической нервной ткани по Догелю, при котором окрашенные срезы метиленовым синим фиксируют в течение 24 ч насыщенным раствором пикрата аммония с последующим заключением в смесь равных объемов глицерина и раствора пикрата аммония.Известен способ приготовления препаратов периферической нервной ткани по Шабадашу(1;2). Окрашенные срезы метиленовым синим фиксируют в течение 3 - 6 ч при 35 смесью пикрата аммония с раствором йодита аммония (или с раствором тиоцината аммония), выдерживают при определенных условиях в течение нескольких дней с последующим заключением в смесь равных объемов химически чистого глицерина, насыщенного раствора пикрата аммония и 10% раствора желатина.Однако известные способы не используются для хранения проб желчи с целью последующего микроскопического исследования и не позволяют сохранить пробы желчи из-за разрушения форменных элементов, простейших,Известен способ хранения проб желчи для микроскопического исследования, при котором с целью сохранения клеточных элементов добавляют 5 - 8 капель формалина на50 1:4 - 2:8 с последующим добавлением через10 - 20 мин безводного глицерина в соотношении 1:4 - 2:8 и далее содержат при 4 - 8 С. Обработанные таким образом пробы желчи в течение 5 - 7 сут можно использовать для микроскопического исследования,П р и м е р 1. Больная Л, 43 года, Клинический диагноз: обострение хронического холецистита, При дуоденальном зондировании забор желчи производили из пузырной фракции в три пробирки по 4 мл в каждую с каждые 10 мл полученной при зондировании желчи,Известен способ хранения желчи длямикроскопического исследования, которыйзаключается в следующем, Добавляют 1 млтрасилола или тцалола на каждые 10 мл желчи,Известен также способ хранения пробжелчи для микроскопического исследова 10 ния, который заключается в том, что с цельюсохранения форменных элементов желчидобавляют ЗДТА (2 мл 10% раствора на 1020 мл желчи).Недостатком всех этих способов являет 15 ся то, что длительность хранения проб желчи не превышает 1 - 1,5 ч, а затемприсутствующие в желчи клеточные элементы, простейшие, разрушаются,Известен способ хранения проб желчи20 с целью последующего микроскопическогоанализа, состоящий в том, что желчь обрабатывают 10%-ным раствором нейтрального формалина, добавляемого в соотношении1:3.25 Недостатком данного способа являетсято, что при его использовании удается сохранить патологические элементы желчи(клеточные элементы, простейшие) только втечение 2 ч, что требует проведения микро 30 скопического .исследования дуоденальногосодеркимого в данном отрезке времени,Данный способ принят за прототип -базовый объект;Цель изобретения - удлинить сроки хра 35 нения проб желчи для микроскопическогоисследования.Цель достигается тем, что в исследуемую пробу нативной желчи последовательно вводят при перемешивании 1%-ный40 раствор метиленовой сини в соотношении(1;4 - 2:8) с последующим добавлением через 10-20 мин безводного глицерина в соотношении 1:4 - 1:8 и далее содержат при4 - 8 С,45 Отличие предложенного способа отпрототипа заключается в том, что в исследуемую пробу нативной желчи последовательно вводят при перемешивании 1%-ныйраствор метиленовой сини в соотношении2002469 40 таблицаРезультаты микроскопического исследования пробы пузырной желчи больной П. Количество клеточных злементов в поле зрения че ез в емя,ч3.5 З5.10 0.15 г-з 1-2 3.5 23 1.2 1.2 35 1.2 3-5 3-5 5-10 10.15 10-15 П р и м е ч а н и е номера проб желчи 11-наивнев; 2-обработанная по прототипу; 3 желчь, консервированная по предлагаемому способу) наибольшим количеством хлопьев, В первой пробирке желчь не обрабатывали, Во второй пробирке желчь обрабатывали по прототипу с добавлением 10 о, нейтрального формалина в соотношении 1;3. В третьей пробирке желчь обрабатывали по предлагаемому способу, а именно к содержимому пробирки при перемешивании добавляли 1 о -ный водный раствор метиленовой сини в соотношении 1:4, Для перемешивания пробирку вращали вокруг вертикальной оси, избегая вэбалтывания с целью предотвращения образования пузырьков воздуха, затрудняющих микроскопический анализ. Все три пробирки хранили в холодильнике при 4 С, Микроскопическое исследование проводили сразу после забора, после обработки по прототипу и предлагаемому способу, через 2 ч и через каждые 24 ч. Результаты исследования представлены в табл,1.Как видно из табл.1 в нативной желчи (первая пробирка) и пробе желчи, обработанной по прототипу (вторая пробирка) клеточные элементы, простейшие количественно уменьшались к концу 2 ч, исчезали к концу 1 суток, Проба желчи, обработанная по предлагаемому образцу(третья пробирка), содержала клеточные элементы, простейшие в течение 7 сут. Исследование помогло диагностировать лямблиоз и назначить адекватную терапию.П р и м е р 2, Больная К. 36 лет, Клинический диагноз: обострение хронического холецистита. Забор и обработка пузырной желчи, полученной при дуоденальном зондировании, проводилась также как описано в примере 1, Результаты исследования представлены в табл.2, Как видно из таблицы, сохранение лейкоцитов в третьей пробирке, обработанной по предлагаемому способу, в течение 7 сут дало воэможность. подтвердить наличие воспалительного про 5 10 15 20 25 30 35 цесса в желчном пузыре, и кроме гого, сделать процедуру микроскопического исследования независимой от времени проведения дуоденального зондирования, Пробы желчи в 1- и 2-й пробирках дают низкую диагностическую информативность на содержание лейкоцитов,П о и м е р 3. Больная Т 54 года, Клинический диагноз: обострение хронического холецистита. Забор и обработку проб пузырной желчи, полученной при дуоденальном зондировании проводили как описано в примере 1. Результаты представлены в табл.З, Как видно из табл,З, в нэтиьной желчи (1 пробирка) и в желчи, обработа,ной по прототипу(2 пробирка), сохранность клеточных элементов была низкой, Диагностическая ценность пробы желчи, обработанной по предлагаемому способу, не изменилась о течение 5 - 7 сут.Микроскопические исследования проб желчи, обработанной по заявленному способу, проведены у 31 больного и у 10 здоровых людей, У всех больных перед зондированием был поставлен диагноз: обострение хронического холецистита, По результатам микроскопического анализа у 17 пациентов подтвержден диагноз воспаления желчного пузыря (на основании наличия лейкоцитов в пуэьрной порции желчи), у 6 пациентов поставлен диагноз лямблиоза (по наличию лямблий в пробе желчи), что дало воэможность своевременно назначить адекватную терапию,Таким образом, предлагаемый способ хранения проб желчи для микроскопического исследования позволяет повысить диагностическую ценность микроскопического анализа, проведенного более чем через 2 чпосле дуоденального зондирования,(56) Скуя Н.А. Хронические заболеванияжелчных путей, М.; Медицина. 1972, с.122,2002469 Таблица 2 Результаты микроскопическогоисследования пробы пузырной желчи больной К.предлагаемому снос лица 3 зультвты микроскопического исследования про пузырной желчи больной Т, оличество клеточных элементов в пале эрен че ез,чоба лчи 168 раз посл получ ния 15-20 15.20 20.25 10 15 5.20 0.15 15-20 15.20 15.2 15.2 10-1 10.1 15.2 15 3 ЛейкоцитыЛейкоцитоидыШирокий элите. 5-6 6.8 3-4 5-Т 5.6 34 57 34 6.8 6-8 5-6 2-3 10.15.8 .Б -3 4.5 1.2 Узкий эпигелий Мелкий зпител Э ит иты-3 0 0 р и м е ч а н и е. - номера проб желчи(1-нативнвя желчь; 2.желчь, обработанная по предлагаемому нами способу) рототипу: З-желчь, консервированная 3 желч раств ии 1 соотношсодержС,Составитель Н,Зен Техред М.Моргента вКорре Патруш дактор А.Зробок каз 3200 Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Формула изобретен и яСПОСОБ ХРАНЕНИЯ ПРОБ ЖЕЛЧИ ДЛЯ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ИССЛЕДО-. , ВАНИЙ, включающий обработку ее натив ного раствора консервантом, отличающийся тем, что, с целью удлинения сроков хранения, в нативную тельно вводят 1%-ный вой.сини в соотноше безводный глицерин в 2: 8 с последующим ученной смеси при 4-8 последова- метилено:8 и:, нии 1: 4- нием пол