Способ прогнозирования течения пневмофиброза

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9) ( 5 0 01 М 33/50 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ ИЯ ИДЕТЕЛ ЬСТВ ВТОРСКОМ енныи сследо фтизи уренич Г.Н.Там медицин ательскии атрии А,К.Абра аша кина НИЯ ТЕЧЕа именн прогнози 00 с) С)еюай ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(46) 07,12.92, Бюл, М 45 71) Минский государст ский институт и Научно-и институт пульмонологии и (72) А,Д.Таганович, Г.Л.Г мовская, Е.М,Скрягина и(56) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПНЕВМОФИБРОЗА(57) Использование; медицинапульмонология и фтизиатрия, дл Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии и фтизиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития пневмофиброэа у больных с воспалительными и грануломатозными заболеваниями органов дыхания,Известен способ прогнозирования развития фиброэных изменений в легких, основанный на определении в крови больных содержания гистамина и гистаминопектического индекса при увеличении содержания первого показателя и снижении гистаминопектического индекса, где прогнозируют развитие пнезмофиброза в исходе заболевания легких,Однако способ является мало информативным, поскольку содержание гистамина в кровотоке изменяется при целом ряде физиологических и патологических состояний, не связанных с легочной патологией, и кроме того, имеет диагностическое значение только в детском возрасте,Наиболее близким к заявленному способу по технической сущности и достигаерования развития пневмофиброза у больных с воспалительными и гранулематоэными заболеваниями органов дыхания, Цель; повышение точности и специфичности способа. Сущность изобретения; из пробы бронхоальвеолярного смыва получают сурфактат, в котором определяют уровень фосфатидилхолина и при значении этого показателя 1,20 - 16 - 49 мкмоль Р/л прогнозируют благоприятное течение, а при значении 16 - 53 - 22,65 мкмоль Р/л неблагоприятное. Положительный эффект: точность прогноза составляет 93,20/, 1 табл. мому результату является способ прогнозирования развития пневмофиброэа путем подсчета количества оэзинофилов в бронхоальвеолярном смыве (БАС). На основании длительных динамических наблюдений авторами установлено, что увеличение числа зозинофилов в БАС свыше 70000 в милли- литре или 30 от общего количества выделенных. клеток является критерием, указывающим на последующее прогрессирование склеротических и фиброзн ых изменений в легких и, наоборот, содержание данных клеточных элементов в БАС ниже указанного уровня свидетельствуют о стабильном течении пневмофиброза,Однако данный способ имеет ряд недо стдтков.Во-первых, способ обладает недостаточной чувствительностью 75,0%, а в группе больных со стабильными фиброэными проявлениями 58,3, что прежде всего связано с относительно малым содержанием эозинофиловв БАС по отношению ко всем клеточным элементам и, следовдтельно,1780002 центрифужный пробив:и и е рифГГ у в течение 10 - 15 мин со скоростью 503 оборотовв 1 мин.Всю надосадочнуо жидкость используют для получения сурфактанта, Сурфактант получают методом Абрамс. Для этого надосадочную жидкость центрифугируют при 1000 9 в течение 1 ч. Белки крови и другие растворимые примеси удаляют. Осадок, содержащий фракцию сурфактанта, суспендивозможной вариабельностью результата при подсчете клеток под микроскопом.Во-вторых, на полученные результаты часто может влиять примесь эозинофилов внеальвеолярного происхождения, которые гопэцают в БАС из крови в результате кровоточивости или случайного повреждения слизистой бронха при бронхоскопии, либо из бронхиального секрета у больных с ост. рыми и хроническими воспаллтельными заболеваниями бронхиального дерева,В- ретьих, способ недостаточно специичен для прогнозирования фиброза легких, поскольку количество эозинофилов в БАС увеличено у длительно курящих лиц, при различных аллергических состояниях, в частности бронхиальной астме до 20 О,Все вышеуказанные факторы нс позволяот широко использовать данный способ прогнозирования развития пневмофиброза в клинической практике, как не обладающий необходимыми точностью и специфичностьо,Цель изобретения - повышение точности и специфичности способа,Поставленная цель достигается тем, что иэ бронхоальвеолчрнаго смыва больньх вь- деляот суфрактант, исследуют в нем содержание фосфолипидных компонентов и при содержании фосфатидилхолина (ФХ) от 1,20 до 16,49 мкУоль фосфора (Р)/л лаважной кидкасти прогнозируют уменьшекие или стабиллзацию фиброэных изменений в легких, а при зкачениях ФХ сурфактанта от 16,53 до 22,65 мкМоль (Р)/л прогнозируют прогрессирование пневмофиброза у боль.х,Способ осуществляется следующим образом,Бронхоальвеолярный смыв получаот во время проведения планового фибротрахообронхологического исследования при поступлении больных в стационар, Забор БАС производят по методлке, разработанной Центральным НИЛ туберкулеза 1 ЛЗ СССР. В соответствии с данной методикой после введения фибробронхоскопа производят осмотр слизистой бронхов и бронхоскоп устанавливают в устье среднедолевого бронха, затем подвигаот микроирригатор до устья бронхов 5 - 6 порядка, С помощью шприца через микроирригатор дробно вводят до 20 мл (всего 100 - 150 мл) стерильного флзиологического раствора с рН 7,2 - 7,4, прогретого до температуры 38-40 С. После каждого введения жидкости с помощью вакуум-аспирата через введенный микроир 5 10 руют в 20 Д-ном растворе ИаС 1, имеющем плотность 1,15 г/мл, и центоифугируют третий раз при 1500 9 25 - ЗО мин. Фракция сурфактанта флотирует на пове; хность ра:- твора в виде пленки белого или бледно-желтого цвета, Пленку снимают, диспергируот в 5 мл 0,9%-ного раствора МаС 1, диалиэуют против 0,9 о,-ного раствора ЫаС 1 при 4 С в течение 12 ч,К сурфактанту, полученному из БАС, приливают смесь хлороформметанола (2, 1) из расчета 20 мл на 1 мл суспензии сурфактанта, Экстра кцио ве цут и ри комнатной температуре в течение ЗО мин, а затем экс 20 25 тракт фильтруют через обезжлренный бумажный фильтр. Смесь оставляют на несколько часов в холодильнике для расслоения фаз. Затем верхнюю водно-метаноловуо фазу отсасывают, а нижноо, содержащую липиды, упаривают с помоцью водоструйного насоса, Полученкьй осадок, растворенный в хлороформе, наносят на стеклянные пластинки, покрытые тонким слоем силикагеля, в виде пятна, Разделение фосфолипидов проводят методом восходящей хроматографии в системе растворителей хлороформ- метанол - уксусная кислота - вода (50 , ЗО: 8: 4), Пластлнки высушивают при комнатной температуре до исчезновения запаха компонентов разделяющей смеси. Фосфолипидные фракции проявляот в парах йода. Р сурфактанте БАС регистрируют на основании индентификации 4 фракции; лизофосфатидилхолин, сфингомиеллн, фосфатидилхолин(самая большая фракция) и фосфатидилэтаноламин, (оличественный учет содержания фракции фосфатидилхолина осуществляют по фосфору общепринятым методом,Для этого данную фракцио вместесиликагегем соскребают в пробирку и минерализуют в концентрированной серной кислоте при 225 ОС в течение 60 мин, Сжигание фосфора происходит при добавлении ЗО-кого раствора перекиси водорода, Избыток перекиси удаляют добавлением нескольких капель 33-ного раствора сульфита натрия, В каждую пробу добавляригатор отсасывают ее в стерильную охлажденную емкость. Полученный БАС ют 1,0 мл 2,5-ного молибдата аммония и фильгруо через 4 слоя стерильной марли в 0,5 мл 2;-ого раствора аскорбиновой кис 1780002лоты. Пробирки помещают в кипящую баню на 10 мин. Пробы колориметрируют на спектрофотометре СФА при длине волны 822 ям. Для построения калибровочного графика использовали растворы одноэамещенного фосфорнокислого калия,Полученные результаты пересчитывают и выражают содержание фосфора в мкМоль Р/л лаважной жидкости,П р и м е р 1. Больной К. 41 года (ист, болезни М 2845) поступил в стационар с жалобами на кашель с мокротой, слабость. Считает себя больным около месяца, к врачам не обращался. При рентгенологическом исследовании у больного в верхней доле правого легкого обнаружен участок инфильтрации легочной ткани без четких контуров, неоднородной структуры, единичные очаговоподобные тени средней интенсивности. Легочный рисунок в этой зоне избыточен, деформирован. Корни структурны, На остальных участках легочнье поля без видимой патологии, Больному бы установлен клинический диагноз: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого в фазе распада.В дальнейшем диагноз был подвержден обнаружением при посеве мокроты мико- бактерий губеркулеза.При поступлении в стационар больному проведена поднаркоэная трахеобронхоскопия с взятием для исследования БАС, 3 ндоскопическое исследование не выявило у больного патологии со ст. роны бронхиального дерева, Из БАС по вышеописанной методике выделен сурфактант. Содержание в нем фракции фосфгтидилхолина составило 1,20 мкУоль Р/л, Больному проводилось лечение 3 противотуберкулеэными препаратами: иэониазидом, стрептомицином и рифампицином. С 3-го месяца вместо стрептомицина больному назначен этамбутол. Помимо противотуберкулезных преператов больной получал ингаляцию с солютизоном, витаминотерапию, курс ультразвуковой терапии на правую половину грудной клетки.Через 6,5 месяцев лечения больного выписывают из стационара с диагнозом; очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, БК - , На рентгенограмме при выписке в верхней доле правого легкого определяются плотные очаги на фоне избыточности и деформации легочного рисунка. При динамическом исследовании больного через год после поступления в стационар на рентгенограммах картина в легких остается прежней, При сопоставлении с предыдущей рентгенодокументацией не отмечено про 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 грессирования фиброзньх из енений в лег ких,Таким образом в данном случае в соответствии с формулой предполагаемого изобретения низкое содержание ОХ с сурфактанте больного позволило правильно прогнозировать стабилизацию фиброзных изменений в легких,П р и м е р 2. Больная С.А., 40 лет поступила в стационар с диагнозом: очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе распада. Заболела остро за 2 недели до поступления, На рентгенограммах и томограммах в Я 1, 52 правого легкого на фоне избыточности легочного рисунка определяется крупный очаг средней интенсивности с просветлением, группа мелких очагов 0,2 - 0,3 см, На остальном протяжении легкие без видимых изменений, При бронхологическом исследовании у больной патологии со стороны слизистой бронхов не обнаружено. По вышеуказанной методике определено содержание фосфатдилхолина в сурфактанте, которое составило 16,53 мкМоль Р/л.Больная получала стандартное противотуберкулезное лечение 3 противотуберкулезными препаратами: изониазидом, стрептомицином, рифампицином ча фоне патогенетической терапии, Диагноз у больной был подтвержден обнаружением мико- бактерий туберкулеза в промывных водах бронхов бактериологическим методом,Через 4 месяца при выписке больной иэ стационара рентгенологически в верхней доле правого легкого определялась густая тяжистость, мелкие интенсивные очаговые тени. Усилен легочный рисунок в прикорневых отделах обоих легких. Больная выписана из стационара с диагнозом: очаговый туберкулез в доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, БК в , При рентгенологическом исследовании спустя 8 месяцев, в верхней доле правого легкого выраженные фиброзные изменения, интенсивные очаги, Легочный рисунок в обоих легких усилен, в прикорневых отделах деформирован. При сопоставлении с предыдущими рентгенограммами отмечается прогрессирование и невмосклероэа.Таким образом у данной больной содержание ОХ в сурфактанте составило 16,53 мкУоль Р/л, что в соответствии с формулой изобретения указывает на прогрессирование пневмофиброза. Такое прогрессирование и имело место у данной больной на фоне благоприятной динамики туберкулезного процесса в верхней доле правого легкого.В таблице приведены данные содержания фосфатидилхолина в сурфактанте, вы1780002 деленного из БАС у больных с различной динамикой фиброзных изменений в легких,Способ апробирован в ЦНИИ туберкулеза МЗ СССР. Составитель А,ТагановичТехред М,Моргентал Корректор М.Максимишинец Редактор В,Кузнецова Заказ 4432 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 Благодаря высокой точности, специфичности, воспроизводимости данный способ может быть использован в любом крупном пульмонологическом стационаре. Следовательно, новая совокупность признаков позволила получить новый и значительный положительный эффект,Формула изобретенияСпособ прогнозирования течения дневмофиброза, включающий взятие пробыбронхоальвеолярного смыва и ее лабора 5 торный анализ, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения точности и специфичности способа, из смыва получают сурфактант, в нем определяют уровеньфосфатидилхолина и при значении этого по 10 казателя 1,20 - 16.49 мкМоль Р/л прогнозируют благоприятное течение, а призначениях 16,53 - 22,65 мк Моль Р/л - неблагоприятное,