Способ количественного определения фторафура

СОКа СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХСГ 1 УБЛИН 32243 А 1 1 И 21/ ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ ИПРИ ГКНТ СССР МИТЕТ ОТКРЫТИЯМ(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФТОРАФУРА(57) Изобретение относится к аналити- ческой химии, а именно к анализу ле" карственных препаратов .гетероциклического ряда - фторафура, и может быть использовано в фармации. Цель изобретения - повышение чувствительности, точности и специфицности определения. Для этого раствор анализируемой пробы обрабатывают резорцином, выпаривают, к остатку добавляютконцентрированную серную кислоту, нагревают, после охлаждения обрабатывают . гидроксидом калия и измеряют оптицескую плотность полученного растворапри 275 нм. Чувствительность 0,5 мкг/мл относительная ошибка 1,54. 1 табл. гетероЦель твител ости о го лек(71) Алма-Атинский государственныймедицинский институт, Институт органического синтеза АН ЛатвССР и 1 Московский медицинский институт(56) Раствор фторафура 44 для инъеций. ФС 42-1239-86.Смолярская А.З Романенко Н.В.Особенности фармакокинетики Фторафура. Экспресс-информация ВНИИМИ, Новые лекарственные препараты, 1979,йф 1, с. 11-17,фторафур в капсулах по 0,4 г.ФС 42-2014-83,Изобретение относится к фармацевтической химии, преимущественно к анализу лекарственных веществ циклического ряда.Фторафур-И-(2-Фуранидил-фтор- . урацил) - цитостатический препарат, относящийся к группе антиметаболитов.Известны броматометрический метод, микробиологический метод, основанный на способности фторафура подавлять рост Яйтерйососсцв Гаеса 1 хв штамм 543.Недостатком этих способов явля- ется неспецифичность и невысокая чувствительность, а при микробиологическом определении - трудоемкость, громоздкость и необходимость в создании специальных условий. Наиболее близким по технической сущности к достигаемому результату является способ определения фторафу" ра по поглощению света в Уф-области спектра.Недостаток способа - невысокая чувствительность и отсутствие специфичности вследствие того, что раст" вор фторафура бесцветен, а поглощение Уф-света в области 270 нм не отличает его от других. веществ, способных поглощадь свет в этой областиспектра,изобретения - повышение цуности, точности и специфичределения фторафура; а такрственных форм.По Сстб в гв Ев а таа а ааПс., а Пока эатели Способыватаевв Еееаеее Извест" Предланый гаемый 10 в 3 173Поставленная цель достигается созданием условий для полного взаимодействия минимальных количеств фторафура с резорцином и получение окрашенного соединения, избирательно поглощающего свет в Уф"области спектра.Сущность способа заключается. в том, цто под воздействием концентрированной серной кислоты при нагрева" нии происходит разложение фторафура до тетрагидрофурана и 5 фторурацила, Тетрагидрофуран окисляется до янтарного ангидрида, который конденсируясь, с резорцином образует промежу" точное соединение. Избыток раствора гидроксида калия разрушает его, при этом образуется вещество желтого цве" та, имеющее хиноидное строение, способное при облучении Уфасветом проявлять зеленую Флуоресценцию.По сравнейию с известными.предлав гаемый способ позволяет быстро и на" дежно определять препарат в концентрациях от 0,5 мкг в.1 мл и выше в субстанции, лекарственных формах, а также в иэвлецениях их внутренних органов и в биологических жидкостях.,Преимущества спектрофотометрицеского метода количественного определения фторафура видны из таблицы. тататюте тета вта аеев еаееееееева Нижний предел определяемого содер"жания, мкгlмл 20 0,5 . Время определения,мин 10Относительнаяошибка, 3 2 0 1 5аввааааеаеааваеаатевееаввеававеаеаввеВСпособ осуществляют следующим об-разом.В термостойкие плоскодонные колбы, вместимостью 50 мл вносят от 0,1:;до 2 мл 0,01 Ф-ного водного раствора фторафура, прибавляют по 0,4 мл 2,53-ного раствора резорцина и .выпаривают смесь на водяной бане. К сув: хим остаткам прибавляют по. 0,5 мл концентрированной серной кислоты марки х.ч. и нагревают колбы на элекв троплитке, накрытой асбестовой сеткой при температуре 130 С в течение 2243 460 с. После охлаждения в колбы вносятпо 20 мл 103-ного раствора гидроксида калия марки х.ц., хорошо перемешивают и определяют оптическуюплотность окрашенных в желтый цветрастворов на спектрофотометре в кювете 10 мм при длине волны 275 нм.Окрашиванию полученного раствораустойчиво в .течение 1 сутПараллельно с определением исследуемых растворов фторафура проводятопределение стандартного растворапрепарата, с которым проделывают те 1 же манипуляции. Раствором сравненияслужат реактивы, используемые при. определении препарата, в тех же количествах и подвергшиеся такой же обработке, что и исследуемое вещество.20 Оптическая плотность окрашенныхрастворов подчиняется закону Бугера"Ламберта-Бера в пределах концентраций 05100 мкг в 1 мл.Расчет концентраций проводят по 25 формуле где Рд - оптицеская плотность раст 30 вора, полученного при обра" ботке исследуемого препарата; оптическая плотность раст"вора, полученного при обра"ботке стандартного растворапрепарата;" количество препарата, со" держащегося в анализируемой лекарственной Форме. Примечание: для приготовления стаН,дартного 0,01-ного раствора Фторафура в мерную колбу вместимостью 1 л.вносят навеску 0,1000 г препарата,прибавляют 2,6 мл 13-ного растворагидроксида калия, перемешивают смесьдо растворения Фторафура и доводятводой раствор в колбе до метки, повторив перемешивание раствора. Раствор сохраняют в холодильнике,5 173224Для определения фторафура во внутренних .органах животных, леченныхэтим препаратом, часть органов гомогенизируют, берут точные навески,обрабатывают 2-3 мл 954-ного этанолао 5и, оставляют на 1 ч при перемешивании,Суспензию центрифугируют, спиртовоеизвлечение отделяют, а осадок вновьобрабатывают этанолом. Процесс извлечения фторафура и отделение белковповторяют, объединенные спиртовыеизвлечения доводят до определенногообъема, отбирают аликвоту и определяют в ней содержание фторафура.Пр и м е р 1. Определение фторафура в 4 Ф-ном растворе для инъекций,1 мл раствора из ампулы переносят в мерную колбу, вместимостью100 мл, доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки, хорошо перемешивают, отбирают из колбы1 мл раствора в термостойкую колбу на50 мл, прибавляют 0,4 мл 2,5-ногораствора Резорцина и выпаривают смесь 25досуха. К остатку прибавляют 0,5 млконцентрированной серной кислоты инагревают колбу на электроплитке,накрытой асбестовой сеткой при температуре 130 С в течение 60 с. После ЗОохлаждения в колбу вносят 20 мл104-ного раствора гидроксида калия,хорошо перемешивают. и измеряют оптическую плотность окрашенного в желтый цвет раствора на спектрофотометрев кювете 10 мм при длине волны275 нм.Параллельно проводят определениесо стандартным раствором фторафура,для чего навеску препарата 0,1000 гвносят в мерную колбу вместимостью.1 л, прибавляют 2,6 мл 14-ного раст-вора гидроксида калия, доводят,дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и для анализа отбирают 1 мл полученного раствора. П р и м е р 3, Определение Фторафура в печени животных,Навески гомогенизированной печени массой 2 г обрабатывают 5 мл 95"ь-ного этанола, оставляют на 1 ц при периодическом перемешивании, белки отделяют центрифугированием при 5000 об/мин в течение 10 мин, спиртовые извлечения отделяют, а осадки вновь обрабатывают 5 мл этанола, и эта процедура повторяется рновь Слитые вместе спиртовые извлечения вносят в термостойкие колбы на 50 мл и проводят определение фторафура спектрофотометрицеским методом по приведенной методике С целью снижения ошибки из-за экстрактивных веществ из печени параллельно проводят те же операции с 2 г печени животных, которым фторафур не вводят. Велици 50 55.Раствором сравнения служат реактивы, используемые при определении препарата, в количествах, используемых при определении фторафура, под" вергшиеся такой же обработке.Оптицеская плотность окрашенного раствора, полученного при анализе инъекционного раствора фторафура по:описанной методике, равна 0,79, оптическая плотность раствора, полученного при анализе стандартного раствора препарата, равна 0,20. 3 6Концентрацию фторафура в растворе для инъекций рассчитывают по фор- муле 0 79 0 01 1100 охы -" =3,9540,20 1 П р и м е р 2. Определение фтораФура в капсулах по 0,4 г.Около 0,25 г (точная навеска) препарата вносят в мерную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 5 мл0,01 н, раствора гидроксида калия,перемешивают в течение 5 мин и дово"дят дистиллированной водой содержимое колбы до метки. Колбу с раствором энергетицно встряхивают и дляотделения от стеарата кальция раствор фильтруют через бумажный фильтр,Первые 30-50 мл Фильтрата отбрасывают, отбирают последующие 10 мл,вносят в термостойкую колбу на 50 мли далее поступают как описано в методике спектрофотометрицеского определения препарата,Одновременно проводят определение с 1 мл 0,013-ного стандартногораствора фторафура.Оптическая плотность раствораполученного из капсул фторафура, равна 0,196, окрашенного раствора. из .стандартного 0,01-ного раствора0,200. Навеска препарата 0,2492 г,Содержание фторафура в капсуле рассцитано по Формуле0 -196 0 01250 0,4Х= д-=0,393 г.0,200 0,2492 10 1173223 8Предлагаемая методика высокочувствительна, специфична, занимает несколько минут, относительная ошибка составляет + 1,5 Ф. ф о р м у л а изобретения 0 050 0110 1Х= -- =0,00125 г 0,20 ф 10 2Заказ 1578 Тираж . ПодписноеРЧИИПИ Государственного комитета ио изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, 3-35, Раушская иаб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 7ны оптической плотности растворов, полученных иэ спиртовых извлечений печени, не содержавшей фторафура, вычитаются из оптической плотности, полученной в результате определения печени, содержавшей фторафур.Проведено определение фторафура с 1 мл 0,013-ного стандартного раствора фторафура. Оптическая плотность раствора, полученного в результате анализа гомогената печени с фторафуром, за вычетом значения оптической плотности из гомогената, не содержавшего фторафура, равна 0,06; 0,06; и О, ОЙ, Р с - .О, 05. Оптическая плотность раствора, полученного при анализе 0,01-ного стандартного раствора фторафура равна 0,20. Содержание фторафура в печени рассчитывают по формуле Способ количественного определе ния фторафура, включающий измерениеоптической плотности раствора, о .тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности, точ"ности и специфичности определения, 15 анализируемую пробу обрабатывают резорцином, выпаривают, к остатку прибавляют концентрированную серную кислоту, нагревают, после охлаждениядЬбавляют раствор гидроксида калия и 20 измеряют оптическую плотность полученного раствора.