Способ дифференциальной диагностики хронического активного гепатита и хронического персистирующего гипатита

. п 1 ъ с.сэр ОПИСАК А П=НИЯ ВТОРСКОМ ния является повышение точности способа, Для этого у больных с хроническим гепатитом спределяют в плазме концентрацию фибропектина методом твердофазНога ИММУНОфЕРМЕНТНОГО аНаЛИЗа, ДЛЯ исследования достаточно 0,01 мл плазмы. При снижении уровня фибропектина в 1,25 раза и менее относительно нормы диагностируют хронический персистирующий гепатит. а при снижении в 1,65 раза и более - хронический активньй гепатит, Точность диагностики хрснического пер систирующего гепатита увеличивается на 33%. а хроническсго активногс - на 2 О- по сравнению с прототипом, Способ имеет такую же гачнасть, чта и и)нкцианняя биап;.:я 2 табл.(,Я, Баба к, С.Н. Паницин ормы л 11 агнп- дД П ООО их зменении относительностиру,от хронический гепатстре-;ия,После этого допуросе,;ь фибоопектиизвестной методикемен гн. м способом,едицине, в очноди в ляют лиру тазы щего овТ ние 000 юга яют иваГосудАРстВеНньй комитетпо изоБ етениям и откРытипРи гкнт сссР(54 С П О С О Е,Ц И гэЕ Р Е Н Ц И А.Б ЕО Й Д ИАГНОСТИКИ ХРОгИ-ЕСКОГО АКТИВНОГО ГЕПАТИТА И ХРОНИЧЕСКОГОПЕРСИСИРУОЩЕ О ГЕПАТИТА57) Изобретение Относится к мед е, вчастности к гепа. Ологии. Целно изобретеИзобретение Относится к мчастности к гепатологии,Цель изобретения - повышение тсти способа.Способ осув,ествляют следующиразом.3 бального с пгэедполагаемым хческим гепатитом в стадии Обострутром натощак в паложечии лежаществляют забор веназнай кроколичестве 10-20 мл, Затем опредепоказатели каагулаграммьь уровни бибина, трзнсаминаз, щелочной фасфагамма-глутамилтранспептидазы, оббелка и ега фракций, иммуноглобулини В-лимфоцитов крови, осадочные призучают клинический анализ крови и 0.01 млной кровилее трех месприпри комнатгр и,О мин. . араз, дляраствора0,01 мл пл плазмы, полученной из ци 1 -.вежей или хранившейся не яцев в замороженном состоя ратуре - 20" С), размаоажив ной температуре в тече тем плазму разводят в 1 го вначале к 0,99 мл 0,85%- лористого натрия добавл азмы, тщательна перемешют. После этого к 0,1 мл полученного раствора добавляют 0,9 мл ФСБР с твин.Затем готовят материал для калибровки "Отрицательный контроль". Кроме того, во время размораживания плазмы готовят растворы конъюгата, отмывающий, субстратную смесь согласно инструкции,Прилагаемые к тест-системе планшеты предварительно тщательно ополаскивают сильной струей водопроводной воды, после чего лунки заполняют на 1-2 мин отмывающим раствором, затем вновь промывают проточной водой, Процедуру повторяют три раза.Затем в лунке А 1 и А 2 вносят "Отрицательный контроль", а в лунки В 1, В 2, С 1, С 2 и т.д, - соответственно 6, 5-е и т,д. разведения материала для построения калибровочной кривой. Исследуемые образцы вносят в оставшиеся лунки - по 0,2 мл каждого образца в две лунки горизонтального ряда,После внесения исследуемых образцов в планшет его помещают в термостат на 1 ч при 36 +1,Затем проводят первую отмывку планшета согласно указанной выше схеме, также троекратно. После промывки, используя многоканальную автоматическую пипетку, вносят по 0,2 мл коньюгата во все лунки планшета и ставят его на повторное прогревание в термостат на 1 ч при той же температуре. Вторую промывку планшетов проводят аналогично первой.Субстратную смесь (по 0,2 мл в каждую лунку планшета) быстро вносят, используя многоканальную автоматическую пипетку,Затем планшет выдерживают при комнатной температуре в течение 10 - 15 мин, после чего быстро многоканальной автоматической пипеткой в каждую лунку планшета вносят по 50 мкл 50%-ной серной кислоты для остановки ферментативной реакции. После этого содержимое лунок перемешивают на автоматическом встряхивателе,Учет результатов проводят на многоканальном спектрофотометре "Тц 1 ег 1 е 1 МцЫзсап" из комплекта оборудования для иммуноферментного анализа фирмы "=оа" (Великобритания) при длине волны 492 нм. Построение калибровочной кривсй и определение концентрации ФН в исследуемых образцах плазмы проводят с использованием на "ВМРС АТ".При снижении концентрации фибропектина в 1,15 раза и менее относительно нормы диагностиру 1 от хронический перси 10 15 20 25 ЗО 35 50 55 стирующий гепатит, а в 1,65 раза и более -хронический активный гепатит,В табл, 1 представлены результаты определения уровня фибропектина плазмы крови у здоровых лиц, больных хроническими активным ХАГ) и персистирующим (ХПГ)гепатитами.Из табл, 1 видно, что при хроническом активном гепатите уровень фибропектина плазмы крови существенно понижается в сравнении с таковым характерным для хронического персистирующего гепатита, что в принятых в интервалах его изменений (менее чем в 1,25 раза при хроническом персистирующем гепатите, чем более в 1,65 раза при хроническом активном гепатите) обеспечивает дифференциальную диагностику хронических активного и персистирующего гепатитов.Гримеры осуществления способа, П р и м е р 1. Больной С., 30 лет, поступил в гастроэнтерологическое отделение с жалобой на чувство тяжести в правом подреберье, слабость, повышенную утомляемость. Считает себя больным в течение двух лет после перенесения острого вирусного гепатита В. При объективном осмотре отмечалась бледность кожных покровов. Со стороны органов грудной клетки - без патологии, Печень в пределах нормы с ровным плотноэластичным безболезненным краем. Селезенка не увеличена, Лабораторные анные - анализ крови; эритроциты 4,3 10 /л, Нв 133 г/л, цветной показатель ЦП) О,9; лейкоциты 4,5 10 /л зоз%, п.ад.2%, сегм, 67, лимф, 26, мон. 3; СОЭ б мм/г, тромбоциты 200 10 /л, АСТ 2,13 ммоль г/л, АЛТ 2,83 ммоль г/л; щелочная фосфатаза ЗО,З е/л, билирубин 14,8 мкмоль/л. прямой 3,6 мкмоль/л, непрямой 11,2 мкмоль/л, протромбиновый индекс 83, время рекальцификации 100, конц, фибропектина 2.44 г/л, фибриноген Б, тромботест И, ФАК 180; общий белок 72 г/л, альбумин 51,2%, глобулин а 5 7% а 2 9 8%, ф 15 4% у 17,9% А/ 1,5; 9 А 3,2 г/л, 9 М 1,8 г/л, 96 15 г/л, Дополнительно у больного был определен уровень плазменного фибропектина, который составил 264 мкг/мл, что в 1,25 раза ниже нормы. Данные инструментального обследования (эхосонография, гепатосцинтиграфия) допол н ител ьной информации не дали. Таким образом, в данном случае лабораторные данные не позволили дифференцировать ХПГ и ХАГ. Проведена пункционная биопсия печени. В результате морфологического исследования больному выставлен диагноз ХПГ,что соответствует сни;кению уровня фибропектина в плазме.П р и м е р 2, Больной Р 38 лет, поступил в гастроэнтерологическое отделение сжалобами на слабость, чувство тяжес-и вправом подреберье, повышенную утомляемость. периодическую ломоту в суставах,повышение температуры тела до 37,7 - 37,8градусов.8 анамнезе острый вирусный гепатит Воколо 10 лет назад,Обьективно; бледность кожных покровов; суставы не изменены; сердце и легкиебез особенностей; живот мягкий, при пальпации болезненный в правом подреберье;нижний край печени выступает на 4 см изпод края реберной дуги; поверхность печени гладкая, край закруглен, чувствителенпри пальггации, селезенка у края ребернойдуги чувстительна при пальпации.Лабораторные данные - клиническийанализ крови: зр 4,1 х 10 г/л, Нв 142 г/л, ЦП1,0; ггейк, 6,5 х 10 /л, э - 3%, п - 4%, с - 65%,л 22 , м, - 6%, СОЗ - 21 мм/ч, тромб. 210 хх 10 /л, АсАТ - 1,0 ммоль г/и. АлАТ 2,56ммоль г/лщелочная фосфатаза 87,5 е/л,билирубин общий 28,7 мкмоль/л,.прямой5,5 мкмоль/л протромбиновый индекс79%, время рекальцификации 100; фибриноген 3,5 г/л, фибриноген Б, тромботестВ, ФАК 220; общий белс, 76 гlл; альбумин48,7%, глобулин а 1 5 8% ар 6 б/ 612 7"31,4% А/Г коэв, С,96 19 А 2,4 г/л, 1992,1 г/л, 96 16.5 г/л. Дополнительно убольного бьгл определен уровень плазменного фибропектина, которьгй составил201 мкг/мл, что в 1,65 раза ниже показателянормы, что соответствует уровню ФЯ приХАГ, Инструментальньге методы обследования гепатосцинтиграфия, эхосоноскопия) не позволили провестидиффеоенциальнуго диагностику междудвумя морфологическими формами хронических гепатитов; ХПГ и ХАГ, Кроме того,была проведена пункциочная биопсия печени, Микроскопическое изучение полученного биоптата позволило подтвердлтьдиагноз ХАГ,П р и м е р 3, Больной Х., 21 лет, поступил в гастроэнтерологпческое отделение сжалобами на субфебрилитет, слабость, носовые кровотечения, артералгии.б лет назад перенес ОВГ В. Указанные жалобыбсспокоят около полугода, При обьективном осмотре: кожные покровы бледные,5 10 15 20 25 30 31 40 со стороны органов грудной клетки - без особенностей, печень 1-2 см, с плотным ровным безболезненным краем; селезенка не увеличена, Лабораторные данные - анализ крови: эритроциты 3,82 10 /л, Нв 131 г/л, ЦЛ 1,0, л 5,8 10 /л, баз.-1, з-З, п, с 45, л, м, СОЭ 20 мм/ч, тромбоциты 187 10/л, АСТ 1,2 ммоль г/л, АЛТ 1,3 ммоль г/л, щелочная фосфатаза 105,3 г/л, билирубин обгглй 18.5 мкмоль/л, прямой 5,4 ггкмоль/л. непрямой 13,1 мкмоугь/л, протромбиновый индекс 92%, время рекальцификации 330, конц. фибриногена 3,55 г/л, фибриноген Б 1, тромботест У ФАК 240; общий белок 66,2 г/л, альбумины 52,0%, глобулины а 1 4 ь, а 2 8%; р 10,0%,у 26,0%; А/Г 1,08. гсгА 2,8 г/л; 9 М 3,1 г/л, 196 24,5 г/л. Уровень фибропектина в плазме крови составил 183,3 мкг/мл, что в 1,8 раза ниже нормы. На эхосонографии выявлено незначительное увеличение размеров печения и повышение ее акустической плотности. Таким образом, при невысокой лабораторной активности процесса уровень фггбропегтина свидетельствует о наличии у больного ХАГ, Произведена пункционная биопсия печени, Морфологические изменения соответствуют данному диагнозу,Использование предложенного способа по сравнению с прототипом позволяет повысить точность диагност,:.ки. снижает необходимос.гь проведения пункционной биоггг.и печени.ь, абл. 2 приводятся данные сравнения и ототи.га и предлагаемого способа по точности у больных хроническим персистирующг;.м (ьГ) и хроническим активным (ХАГ) епатитаТочность ког тролировали по данным пункционной биопсии печени,Формула изобретения Способ дифференциальной диагностикирок. еского активного гепатита и хрог-:ическога персистирующего гепатита клинике-биохимическим г:утем, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения то гкости способа, дополнительно определяют онцентрацию фибропектина пазмы крсви и при ее снижении в 1,25 раза и менее относительно кормы диагностиру 1 ст,.ранг ческий персистирующий гепатит, а при снижении в 1,6 раза и более - хронический активный Гепатг 1 т,1702309 Таблица 1 Таблица 2 ректор Н евскав едактор А,Маков Заказ 4540 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретенивм и открытилм пр, ГКНТ С 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул, Гагарина, 1 Составитель С.ФедорТехред М,Моргентал 788