Способ прогнозирования течения туберкулеза легких при проведении лекарственной терапии

(5)5 6 01 Й 33 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН К АВТОРСКОМУ СВ ЕЛЬС итут,ТаЧЕ- ВЕИэобрете асается спос екарственнои Целью из ие точности Способ осние отн обов о сится к медицине и енки эффективности и туберкулеза легких.я является повышерования,яется следующим обтерапи бретени рогноэи ществл 00 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) Авторское свидетельство СССРМ 1197638, кл. А 61 В 10/00, 1983,(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ ПРИ ПРОДЕНИИ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ разом.Получение альвеолярных макрофагов осуществляют при проведении фибробронхоскопии, которую проводят под местной анестезией. Носовые ходы задней стенки глотки, надгортанник и голосовые складки смазывают 57 ь-ным раствором лидокаина, либо 10-ным раствором новокаина, после чего вводят фибробронхоскоп до бифуркации трахеи. Через микроирригатор по мере продвижения аппарата и появления кашлевого рефлекса вводят дополнительно анестезирующее вещество, После введения фибробронхоскопа проводят осмотр слизистой бронхов и устанавливают бронхоскоп в устье срвднедолевого сегментарного бронха, затем продвигают микроирригатор до устья бронхов 5 - 6 порядка. С помощью(57) Изобретение относится к медицине и касается способов оценки эффективности лекарственной терапии туберкулеза легких. Целью изобретения является повышение точности прогнозирования, Для этого определяют содержание фосфатидилэтаноламина в альвеолярных макрофагах и при содержании этой фракции 0-0,58 мкг Р/106 клеток прогнозируют течение заболевания с малыми остаточными изменениями в легких, а при содержании 0,6 мкг Р/10 клеток6 и более - течение заболевания с большими остаточными изменениями в ле ких шприца через микроирригатор веодят дробно по 20 мл (всего 100-150 мл) стерильного физиологического раствора с рН 7,2-7,4, подогретого до 38 - 40 С. После каждого введения жидкости с помощью вакуум-аспирата через введенный микроииригатор отсасывают ее в стерильную емкость, Полученный бронхоальвеолярный смыв (БАС) фильтруют через 4 слоя стерильной марли в центрифужную силиконизированную пробирку. В БАС определяют жизнеспособность альвеолярных макрофагов (АМ) путем добавления семи капель отфильтрованного смыва с одной каплей 1 ф-ного раствора трипанового синего на часовом стекле. Через 3 - 5 мин этой смесью заполняют счетную камеру Горяева. Жизнеспособные макрофаги не воспринимают окраску и остаются, бесцветными, а нежизнеспособные клетки диффуэно прокрашиваются трипановым синим. Подсчитывают 100 альвеолярных макрофагов. Макрофаги, не воспринявшие окраску, составляют процент жизнеспособности. Для подсчета общего количества кле 1684687ток в 1 мл БАС берут 1 О капель профильтрованного смыва, смешивают его на часовом стекле с 1 каплей жидкости Симсона и заполняют счетную камеру, Подсчет клеток проводят по всей камере и определяют их число в 1 мл смыва, Оставшийся профильтрованный БАС центрифугируют при комнатной температуре в течение не менее 10 мин со скоростью 1500 об/мин, Иэ осадка приготавливают мазки, которые высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом или смесью Никифорова и окрашивают краской Романовского в течение 4 мин, Эндопульмональную цитограмму определяют при подсчете не менее чем 500 клеток с использованием иммерсионного обьектива, при этом учитывают АМ, лимфоциты, нейтрофилы, эозинофилы и другие клетки. Для выделения АМ из общей смеси клеточных элементов используют метод центрифугирования в феколверографиновом градиенте плотности, Клеточный осадок ресуспендируют в 6 мл среды Хенкса или й. 199 и наслаивают на 3 мл фекола с градиентом плотности 1075; после центрифугирования 20 мин при 3000 об/мин клетки, проходя через градиент плотности, распределяются в различных слоях фекола; фракция АМ располагается в виде кольца несколько ниже границы, разделяющей среду Хенкса или М 199 и фекол. Пэстеровской пипеткой отсасывают кольцо АМ, переносят в пробирку, подсчитывают общее количестом АМ и жизнеспособность АМ указанным выше способом, Затем клетки 2 раза промывают, приливая по 7-8 мл среды Хенкса или М 199, перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин, Супернатат сливают, отмывают, АМ ресуспендируют в дистиллированной воде в соотношении 0,5 х 10 леток в 1 мл и6замораживают при 1 - 20"С на 5 мин, затем помещают в водяную баню (т =- 45 С) на 5 мин повторяют трижды с целью разрушения клеточных мембран) Для получения липидного экстракта используют спиртозфирную смесь Блюра, Тонкослойную хромато рафию фосфолипидов осуществляют на стеклянных обезжиренных пластинках размером 90 х 120 мм, покрытых слоем сорбента, сосгоящих иэ взвеси силикагеля (Л 5/40 мк, ЧССР) и медицинского гипса в воде, Фосфолипидные фракции разделяют с помощью одномерной хроматографии в системе растворителей хлороформ-метанол вода 6525:4 (Юацпег ста 11, 1961). Пластинки высушивают при комнатной температуре до исчезновения запахов компонентов разделяющей смеси. Проявляют в парах йода и осуществляют количественный учег фракций по фосФору.Общее количество липидного фосфора определяют следующим образом: к сухому остатку добавляют 0,25 мл раствора хлорной5 кислоты и помещают пробу на песчаной бане, где ее выдерживают до обесцвечиваниясмеси. В пробирку добавляют по 1,25 млдистиллированной воды, Готовят контрольную и три стандартные пробы, Контрольная10 проба состоит из 0,2 мл раствора хлорнойкислоты и 1,3 мл воды, стандартные пробыиз 0,5 мл раствора фосфата калия, 0,2 млхлорной кислоты и 0,8 мл воды. В каждуюпробирку прибавляют по 0,25 мл раствора15 молибдата аммония, Содержимое пробироктщательно перемешивают и приливают 0,25мл раствора аскорбиновой кислоты, В контрольную и стандартные пробы добавляютпо 0,5 мл воды, а объем опытных проб дово 20 дят водой до 2,5 мл. Содержимое проб геремешивают и через 20 мин после доливанияреактива аскорбиновой кислоты все пробыспектрофотометрируют, Полученные показатели перерассчитывают и выражают со 25 держание фосфора в мкг /10 клеток,Прогнозирование характера течения туберкулеза легких при проведении лекарственной терапии определяют посодержанию фосфатидилэтаноламиновой30 фракции фосфолипидов в АМ, При содержании фосфатидилэтаноламиновой фракциифосфолипидов в АМ 0,6 мкг Р/10 клеток иболее прогнозируют исход заболевания сформированием в легких больших остаточных35 изменений, а при содержании фосфатидилэтаноламиновой фракции фосфлипидов в АМ от0-0,58 мкг Р/10 клеток - исход заболеванияс малыми остаточными изменениями в легких,40 Способ иллюстрируется следующимипримерами.П р и м е р 1, Больной С 48 лет, находился на лечении в клинике института фтизиопульмонологии с декабря по июль с45 диагнозом; очаговый туберкулез верхнейдоли правого легкого в фазе распада, МБТКлинические признаки заболевания отсутствовали, Гемограмма в норме, Рентгенологически в верхней доле правого легкого на50 фоне усиленного бронхососудистого рисунка с "дорожкой" к корню легкого определялигусто расположенные полиморфные очагимелких и средних размеров, в некоторых иэних имелись участки просветления округлой55 формы деструкции). В альвеолярных макрофагах БАС определили содержание фосфатидилэтаноламиновой (кефалин) фракциифосфолипидов 0,63 мкг Р/10 клеток. Пробгнозировали гечение заболевания с боль.шими остаточными изменениями в легких.40 45 50 55 Проводилось лечение изонидзид, зтдмбу тол, сгрептомицин, который заем здменен на тиздмид, ингдляции сдлютизонэ, фонофорез гендрина М. 20 на проекцию верхей доли прдного легкого. Через 8 мес лечения наступилд стабилизация легочного процесса, Основной курс лечения закончен, В легких определялись большие остаточные изменения Рентгенологически определяли в верхней доле правого легкого сохранение множественных разновеликих очаов нд фоне фиброзных изменений, в некоторых очагах по-прежнему сохранились учагтки просветления. В нижней доле правого легкого определялся умеренно выраженный пневмофиброз. Диагноз очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, МБТ -. Прогноз подтвердился, лечение закончилось с формированием в легких больших остаточных изменений.П р и м е р 2. Больной Б., 32 лет, находился на лечении с января по апрель, затем антибактериальное лечение (изониазид, зтамбутол, рифампицин) продолжал в санаторных и амбулаторных условиях до декабря по поводу клинического диагноза: инфильтративный туберкулез нижней доли левого легкого, МБТ-, Клинические признаки туберкулезной интоксикации определялись только на первом месяце лечения. Рентгенологически в шестом сегменте нижней доли левого легкого определяли инфильтративное затемнение неопородной структуры с нечеткими контурами, . реднеи интенсивности, В корне легкого и во втором сегменте справа - единичные мелкие каль. цинаты, В альвеолярных лакрофдгд БАС определяли содержание фосфдтидилэтаноламиновой (кефалин) фракции фосфолипи. дов. - 0,72 мкг фосфора /10 клеток. Прогнозировали течение заболевания с большими остаточными изменениями в легких. В процессе лечения рентгенологическим методом выявлено значительное рассасывание инфильтративных изменений в нижней доле левого легкого. Через 6 мес лечения наступила стабилизация процесса, В декабре 1988 г. в легких сохраняется фокус размером до 1,5 см на фоне выраженного пневмофиброза и кальцинатов во втором сегменте и корне правого легкого, Диагноз: туберкулез на нижней доле левого легкого. Прогноз течения заболевания с большими остаточными изменениями в легких подтвердился.П р и м е р 3, Больная 3, находилась на лечении с декабря по ноябрь следующего года с диагнозом: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рдгпадд. МБ 1 - Рентгенологически определяли в верхнеи доле правоо легког инфильтрдтивную тень размером 2 х 3 см без четких контуров с полостью распада в цент ре, вокруг единичные мелких размеров очаговые тени с бронхососудистои "дорожкой" к корню легкого. Клинические признаки туберкулезной интоксикации сохранялигь в течение первых двух месяцев лечения, затем общее состояние больной было удовлетворительное. В альвеолярных макрофдгах БАС определяли содержание фосфатидилзтанолалиновой (кефалина) фракции фосфолипидов 1,54 мкг фосфора/10 клеток.6Прогнозировали исход заболевания в конце лечения с большими остаточными изменениями в ле ких В течение 12 мес проводилось лечение антибактериальными препаратами; изониазид, рифампицин, стрептомицин в течение 3 мес, затем последний заменен нд этамбутол, В ингаляциях использовали изониазид и салютизон Проводилось и патогенетическое лечение пирогенэл и ультразвук. В течение первых б мес ндблюддлэсь положительная динамика тубеокулезного процесса в легких частичное рдссасывание вогпдлительных изменений, уменьшение размеров инфильтрата в первом сегменте рдвогг легкого полость распада сохрднялдсь От гокдзднного хирургического меч ния больная отказалась В последующие "., мог пгсдолжалось консервативное лечение днтибдкпрепдрэтами до .олной стабилизации легочного процесса.-1 ерез 12 мос лоцсни; в легк х сформировали .ь большие остдточныс изменения (в врехней дгле правого легко о определяли туберкулему с краевым участком просветления, фиброзные изменения и единичные очаги вокруг с четкими очертаниями). Диагноз: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, МБТ - . Прогноз течения заболевания с большими остаточными изменениями подтвердился.П р и м е р 4, Больная С, 28 лет находилась на лечении с марта по июль. затем лечение антибактериальными препаратами (стрептомицин, изониазид, рифадин, этамбутол) продолжала в санаторных и амбулаторных условиях до ноября с диагнозом: очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе инфильтрации, МБТ+, Клинические признаки интокискации отсутствовали, В начале лечения рентгенологически в верхней доле правого легкого на фоне усиленного бронхососудистого рисунка определял 1 л полиморфные очаговые тени с умеренно выраженной "дорожкой" к корню, В альвеолярных макрофагах БАС определя 168468745 50 55 ли содержание Фосфатидилэтаноламиновой (кефалин) фракции фосфолипидов в виде следов (количественному учету не подлежало О). Прогнозировали исход заболевания с малыми остаточными изменениями, После окончания (ноябрь 1988 г) основного курса лечения в первом и втором сегментах правого легкого сохранялись деформация легочного рисунка и единичные мелкие очаги. Диагноз: очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, МБТ-. Прогноз течения заболевания с малыми остаточными изменениями в легких подтвердился,П р и м е р 5. Больная Я 28 лет, находилась на лечении с апреля по октябрь с диагнозом: инфильтративный туберкулез верхней доли левого легкого в фазе распада, МБТ . В начале лечения рентгенологически в верхней доле левого легкого определяли усиление бронхососудистого рисунка с широкой "дорожкой" к корню и множественные густо расположенные разновеликие очаги воспаления, местами сливающиеся в инфильтраты с участками деструкций. При поступлении в клинику определялись умеренно выраженные клинические признаки интоксикации, которые исчезли через месяц лечения. Получала антибактериальные средства: стрептомицин иэониазид, рифадин, зтамбутол. В альвеолярных макрофагах БАС определяли содержание фосфатидилзтаноламиновой (кефалин) фракции Фосфолипидов 0,22 мкг Фосфора/10 клеток, Прогнозировали течение забол.вания с малыми остаточными изменениями, В конце основного курса лечения (через 7 мес) в легких полости распада рентгенологически не определялись, сохранялись единичные мелкие, интенсивные очаги в первом и втором сегментах левого легкого Диагноз. очаговый туберкулез верхней доли левого легкого в Фазе рассасывания и уплотнения, МБТ - , Прогноз течения заболевания подтвердился, в легких определялись мелкие остаточные изменения.П р и м е р 6, Больной Л 55 лет., находился на лечении (получая стрептомицин, иэониазид, тизамид) с января по май, затем антибактериальное лечение (изониазид, зтэмбутол) продолжал в санаторных и амбулаторных условиях до декабря по поводу установленного клинического диагноза; очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе инфильтрации, МБТ - . Клинические симптомы туберкулезной интоксикации отсутствовали. Рентгенологически в верхней доле правого легкого определяли множес 1 венные полиморфные очаги, неко 5 10 15 20 25 30 35 40 торые очаги - осумкованные и неструктурные в центре на фоне деформации легочного рисунка и пневмосклероэа. 09.02.88 в альвеолярных макрофагах БАС определяли содержание фосфатидилэтаноламиновой (кефалин) фракции фосфолипидов - 0,58 мкг фосфора/10 клеток. Прогнозировали тече 6ние заболевания с малыми остаточными изменениями в легких. В процессе лечения отмечалось значительное рассасывание перифокальной инфильтрации вокруг очагов и полное рассасывание большинства очагов в верхней доле правого легкого. После окончания лечения в верхней доле правого легкого сохранились только деформация легочного рисунка и единичные мелкие фиброэные очаги. Диагноз: очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе рассасывания и уплотнения, МБТ - . Прогноз течения заболевания подтвердился, после окончания лечения в легких сохранялись малые остаточные изменения,Таким образом, определение у больных активным туберкулезом легких в начале лечения в альвеолярных макрофагах БАС фосфатидилэтаноламиновой (кефалин) фракции фосфолипидов дает воэможность в ранние сроки правильно определять прогноз течения заболевания, в частности формирование характера (величины) остаточных изменений в легких в 88,27 ь случаев. Своевременное прогнозирование развития больших остаточных изменений в легких у больных туберкулезом позволяет обосновать выбор адекватного этиотропного и патогенетического лечения, направленного на более совершенное рассасывание туберкулезного процесса в легких и формирование малых остаточных изменений, что в последующем может значительно сократить частоту обострений и рецидивов заболевания,Формула изобретения Способ прогнозирования течения туберкулеза легких при проведении лекарственной терапии путем клинико-лабораторного обследования, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности, определяют содержание фосфатидилэтаноламиновой фракции в альвеолярных макрофагах и при содержании этой фракции менее 0,58 мкг Р/10 клеток прогнозируют течение заболевания с малыми остаточными изменениями в легких, а при содержании этой фракции 0,6 мкг Р/10 клеток и более прогнозируют те 6чение заболевания с большими остаточными изменениями в легких,