Способ получения растительного материала для размножения растений

-30, 138 Си 1- а 3 а 1.39,ПОЛУЧЕН РАЗИНО апательн езаю ую ср пусибрил ажиегетаений в оме ду. Че кать к т на ерным ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ10 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ(54) СПОСОБ ИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО11 АТГРИАЛА ДЛЯ БЕИИ 1 РАСТЕНИЙ(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к вегетативному микроразмещению растений встерильных культурах тканей. Цельюизобретения является повышение эффективности способа. Получение растительного материала для размножения растений осуществляется путем высадки стерильных черенков побегов растений в Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к втивному микроразмножению растстерильных культурах тканей.Целью изобретения является повышение эффективности способа.По способу-прототипу (вариант 1черенок растения Ашяопда аЬегпаеаа сосуд с агаризованной питательной средой, содержащей в своем составе в качестве регулятора роста цитокинин. После этого сосуд заливают жидкой питательной средой того же состава до полного погружения черенков, культивируют при 16-часовом фотопериоде до появления боковых побегов, микрочеренкуют их и помещают черенки, полученные иэ верхушек побегов, на среду для укоренения, а черенки из среднсй и нижней частей побега возвращают на стадию культивирования с полным погружением в жидкую питательную среду. Укорененные черенки пересаживают в теплицу, а затем - в открытый грунт. Культивирование черенков на агаризованной питательной среде с дополнительным погружением их в жидкую питательную среду того же состава поэволярг увеличить число боковых побегов, усилить их .рост, побеги в 2-3 раза становятся толще. Путем систематического повторения способа в течение года можно получить до 100000 верхушечных побе"гов иэ одногоисходного черенка. ет в течение 1 мес. приблиз5 боковых ростков. Их срдают в твердую питательнез 1 мес, они начинаютрни. т.е. только одну фолученных растений пересконец в землю.предлагаемого способа харакявляется то, что стерильныечеренки побегов растении помещают в соответствующий сосуд с твердой питательной средой, затем сосуд заполняют питательным раствором, содержащим, при желании вещества, регулирующие рост, и оставляют побеги в этой погруженной системе для прорастания, Возникшие разветвленные культуры, имеющие пазушные почки ц боковые побеги, нарезают ца части, появившиеся при этом верхушечные побеги образуют корни по известному способу и по истечении переходного периода в теплице высаживают на открытом воздухе, черенки, полученные иэ нижцей и средней части культуры побега, снова культивирукт.Для подкрепления твердой г:итательной среды представляется целесообразным применение агар-агара. Твердая питательная среда обеспечивает растение основными питательными веществами Питательные вещества проводятся через сосудистый пучок. Твердая питательная среда необходима для того, чтобы побеги могпи принять положение, соответствующее естественным усло- виям, т.евертикальное.Жидкий питательный раствор обеспечивает культуру побега дополнительными питательными веществами Культуры, залитые негормональным питательным раствором содержащим мицераль ные соли сахар и витамины, образуют побегикоторые на 30 - 100 Х толще и длиннее, чем побеги, не погруженные в питательцьсй раствор. Однако к жидкому питательному раствору могут быть добавлены также растительные гормоны. Из цих сл"дуетупомянуть ауксин, цитокинин с гиббереллин, Из цитокинццов особенноудачным оказался 6-бецзиламинопурин(6-бензиладенин). Под воздей:твиемрегуляторов роста растений происходит массовое развитие побегов погруженной культуры. Это разв:лтиепроиСходит интенсивнее примерно на100-500 чем в культурах, которымрегулятор роста подавался в основнуюпитательную среду. В культуре, залитой жидким питательным раствором,содержащим цитокинин, происходитобразование листовых почек и верхушек55побегов на всей поверхности погружен ной части растецияцаке вновь образованные почки продолжают разветвляться дальше.К 10.зСаС 1, 2 Н ОИМБО, 7 Н,ОКН,РО,11 агЕ) ТАЕеБО 7 Н ОНзозИпБО7 Н гОЕпБО 7 НОКЗИаМоОд 2 НОСпБО 5 НдОСоС 1 6 НО,СахарозаАгар"агарНикотиноваякислотаПиродоксин 1650190044037017037,227,86,222,38,60,830,250,025Оь 0253000010000 Вариант 1, Из исследованных 10- 15 летних растений Атвоп 1 а аЬегпаешопапа ца содержание биологически активных веществ был отобран один экземпляр с содержанием таберзонина 12,26 Х, В апреле от этого растения были срезаны побеги длицой 25-30 см примерно с 20 листочками. Затем побеги для лучшего пользования нареза-, лись на части длиной примерно 10 см и в течение 1 ч промывались под водопроводной водой. Затем листья снова срезались примерно на четверть своей величины, Подрезанные таким образом части побегов стерилизовались в ЗЕ- ном растворе гипохлорита натрия в течение 15 мин при постоянном встряхивании. Из раствора гипохлорита части растений помещались в дистиллированную воду, стерилизованную в автоклаве, и промывались при встряхц.- ванпл в течение 10 мин, Это действие также как и последующие осуществлялось в асептических условиях в стерильном прививочном шкау. Побеги, взятые из стерильной воды, нарезались скальпелем в стерилизованной теплом чашке Петри на части, имеющие по 2-3 листочка, причем под самым нижним листком оставлялась часть побега длиной примерно 1 см. Подготовленные таким образом черенки помещались в стеклянные колбы объемом 200 мл, каждая из которых содержала 100 мл улучшенной питательной среды Иурашиге-Скуга. Питательная среда имела слудующий состав, мг/л:1590029 5 НС 1 0,5 Тиамин ПС 1 0,1 50 ти с 2-4 листочками, подходящие как 55 При использовании учитывалось то, чтобы черенки полностью до первого листочка находились в питательной среде. Колбы содержались при температуре 20-25 С в то время как ежеднев-оное 16-ти часовое искусственное освещение достигла силы освещения 10000 лк Через неделю в пазухах листа появились листовые почки. царез следующие две недели из них выросли побеги длиной примерно 5-7 см, имеющие 10- 12 листков.Эти стерильные боковые побеги разделялись и нарезались на части, имеющие по 2-4 листочка. Эта рассада высаживалась в питательную среду указанного состава на глубину по мень шей мере 1 см (поэтому необходимо при нарезке под последним листком оставлять место соответствующей длины).Затем еще раз подготавливалась подобная питательная среда, но без агар-агара, вместо которого использовали 1 мг/л 6-бензиламинопурин.50 мл этого жидкого питательного раствора наливали в каждую колбу объемом 200 мл. Черенки, находящиеся под питательным раствором, при температуре 20-25 С постоянно подвергались освещению силой 8000 лк,На всех пазухах листа образовались листовые почки, из которых в течение 3 - 4 недель выросли побеги длиной 5-10 см. Характерным для цих явилось то, что они также со своей стороны снова образовали почки и побеги. Самые сильные побеги выросли из жидкой питательнойсреды, часть, находившаяся на воздухе, образовала мало листовых почек в пазухах листа или больше их не образовывала. Теперь культура делилась. Срезались верхушки побегов, имеющие 5 - 7 листков, ставились в твердую питательную среду и через 2 недели, когда образовывалось достаточно корней, высаживались в землю.Оставшаяся нижняя и средняя часть культуры нарезалась на куски с 2-4 листочками или 5-10 почками на каждом. Затем они также ставились в твердую питательную среду указанного состава. и по предлагаемому способу заливались жидким питательным раствором, содержащим 1 мг/л 6-бензиламинопури 10 15 20 25 30 35 40 на. Культуры культивировали при 20 о25 С и постоянном освещении с силой .: освещения, равной 8000 лк в течение 2-4 недель. За это время вырастают уже имеющиеся боковые побеги, разветвляются дальше .и образуют новые почки. Соответственно образованные верхушечные побеги срезаются и образуют корни, остаток культуры снова нарезается на части с почками и побегами.Изучалось погруженное размножение эстрагона АгСеппэа Йгасцпсц 1 цэ беэ регулятора роста (вариант 111).От выросшего на открытом воздухе эстрагоццого растения АгСешхза Йгасцпсц 1 цз, сорт Сгцпе Ыцгге в июне бцли срезаны побеги длиной примерно 10 см Побеги промывали в течение 2 ч пад подопроводцо 11 водой, затем стерилизовали в ЗХ-цом растворе хлорита натрия в течение 10 миц, после чего промывали стерильной дистиллированной водой в течение 20 мин и нарезали в стерильных условиях ца части примерно 3 см длиной и имеющие по 2-4 листочка. Эти черенки ставили в питательную среду соответственно варианту 11. Однако питательный раствор це содержал регулятора роста растеций.Под действием жидкого питательного раствора культуры побегов начинали интенсивно расти. Рост культуры оказался сильнее в 2-5 раз по сравнению с культурой, це имеющей жщкой питательной среды. Культуры выдерживаются при температуре 20-25 С при постоянном искусственном освещении с силой освещения 8000 лк. Культуры побегов находящиеся в колбах объемом 200 мл ц содержащими 100 мл питательцой среды, за 4-5 недель полностью занимали воздушное пространство колбы. Гобеги длиной 8-15 см были толщиной 2-3 мм, набухшие и относительно мало разветвленные.Культуры побегов нарезали на часдля корцеобразования, так и для культивирования следующих побегов.Для корцеобразования черенки побегов ставили на 24-96 ч в питательную среду в соответствии с вариантом 11, которая дополнительно еще содержит 1 мг/л 2,4-дихлорйеноксиуксусную кислоту. Затем черенки переводятся в питательную среду без регулятора1590029 чием, что раствор не содержал агарагар, а вместо него - кинетин в концентрации 1 мг/л. В колбах, заполроста, где через две недели на каждом черенке образуются корни длиной 5-10 см по мере, надобности 2-5 см. Растения с образованными корнями, если нужно получить материал для посадки, содержится без жидкого питательного раствора.Однако растения с образсванными корнями можно также поместить в жидкий питательный раствор. В этом случае одновременно происходит массовое размножение побега. Путем систематического повторения предлагаемого способа в течение одного года Формула изобретения Способ получения растительногоматериала для размножения растении,включающий высаДку стерильных черенков побегов растений,в сосуд с агаризованной питательной средой, содержащеи в качестве регулятора ростацитокинин, культивирование на этойсреде до появления боковых побегов,микрочеренкования их, помещение черенков на питательную среду для укоренения, пересадку укорененных черен 30 35 40 45 Составитель С.КуваеваТехред Л.Сердюкова Корректор О.Ципле Редактор И. Середа Заказ 2549 Тираж 436 ПодписноеВНЖ 1 ПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул, Гагарина,101 из одного побега можно получить 100 000 растений с корнями.Изучалось погруженное размножение СагЬагапгцз гозецз (чпса гозса) с кинетином. С растений Сагйагапгпв, растущих в теплице, срезали боковые побеги длиной 10-15 см. В течение 4 ч побеги промывали под водопроводной водой, затем оставляли в 1 Е-ном растворе гипохлорита натрия в течение 25 мин и непосредственно после этого промывали в стерильной дистиллированной воде в течение 30 мин. Побеги нарезали на черенки с 2-4 листочками и по способу, описанному в варианте 11, ставили в твердую питательную среду, выдерживали при температуре 25-28 С и ежедневно в течение 16 ч освещали с силой освещения 10 000 лк. Верхушки черепков продолжали расти, однако в целом не разветвлялись, а из черенков, полученных из боковых побегов, появлялись большей частью два боковых побега.Через 3-4 недели возникшие боковые побеги и выросшие верхушечные побеги нарезали и черенки ставили в твердую питателнную среду согласно варианту 11. Колбы с черенками заполняли жидким питательным раствором по 50 мл. Состав питательного раствора соответствовал рецепту, указанному в варианте 11 с тем разлиненных раствором, боковые побеги стали в 2-3 раза толще, чем побеги, выросыие на твердой питательной средебез заливки питательным раствором.Чем чаще полученные побеги прививаются, тем интенсивнее становитсяразвитие побегов, а также корнеобразование верхушечных побегов становится лучше. Путем систематического повторения предлагаемого способа из одного единственного верхушечного побега в течение одного года можно получить примерно 100 000 верхушечныхпобеговков в теплицу, а затем в открытыйгрунт, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения эФфективностиспособа, после высадки стерильныхчеренков побегов растений в сосудс агаризованной питательной средой,сосуд заливают жидкой питательнойсредой того же состава до полногопогружения черенков, культивирование осуцествляют при 16-часовом йотопериоде, причем на питательную среду для укоренения помещают черенки,полученные из верхушек побегов, ачеренки из средней и нижней частейпобегов возвращают на стадию культивирования с полным погружением вжидкую питательную среду.