Способ получения водорастворимых олигосахаридов

СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСК БЛИК О С 08 В 37/08 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ПЛАНТ СССР,ИЗОБРЕТЕНИЯ ПИ ТЕЛЬСТВУОРСНОМУ(71) Всесоюзный научно-исследовательский институт биотехнологии и Московский технологический институт мясо-.молочной промышленности(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМЫХОЛИГОСАХАРИДОВ(57) Изобретение относится к получению низкомолекулярных олигосахаридов со степенью полимеризации 4-8,которые могут быть использованы са 1 табл., 3 ил,о а им но низкомолекулярных олигосахаридовсо степенью полимеризации 4-8, ко- .торые могут быть использованы. самостоятельно или в качестве промежуточных продуктов при получении разнообразных биологически активных веществпод действием ферментов типа хитиназ, лизоцимов, И-ацетил-Д-глюкозаминидаз, трансгликоэилаз и другихподобных ферментов. ход 1 хорош козил цимомНа реакц ние протения - упр ель изо цесса.Изоб ирования,(фиг. 1). фиг. 1 пок онных смес ение иллюстрируют примеры е р 1, 2 г хитина крабов с 20 мл 657-ного раствораПриешивают аны хроматограмьвполученных дейИзобретение относится полисахаридов из хит 801571 О 4 мостоятельно или в качестве промежуточных продуктов при получении разнообразных биологически активных веществ под действием ферментов типа хитиназ, лизоцимов, Н-ацетил-Д-глюкозиминидаз, трансгликоэилээ и других подобных ферментов. Изобретение позволяет упростить процесс за счет исключения из процесса ультразвукового воздействия при сохранении высокого выхода водорастворимьп: олигосахаридов хитина эа счет того, что обработку хитина проводят 65 ь-ным раствором серной кислоты в количестве 2,7-10 мл на 1 г хитина при 40-50 Со в течение 20-120 мин с последующей обработкой реакционной смеси ацетоном при объемном соотношении ацетона и раствора серной кислоты (5-7):1. 1Н 804 в воде, выдерживают 20 мин прил50 ь, к образовавшейся однородной массе добавляют 100 мл ацетона, осадок слипается в комок, жидкость отделяют декантацией, осадок растворяют в 100 мл воды, нерастворившуюся часть отделяют центрифугированием, супернатант пропускают через колонку (2,1 У 18 см) с анионитом 1 1 Ав ОН -форме, колонку промывают водой, Элюат лиофилизируют, получают водорастворимые хитиновые олигосахариды, вьг,1 г, т.е, 55 т. Препарат служит им донором в реакциях трансглиаталиэируемых дизо 1571047ствием куриного лизоцима на смесьрастворимого хитодекстрина и ПНФГА.Пик Т принадлежит лизоциму, пик 7 -ПНФГА. Пики ТТУ 111 и 17 - продуктам 5трансгликозилирования, Кривые 1"5 получены соответственно при увеличивающемся времени реакции с лизоци.".мом.П р и м е р 2. 3,74 г хитина креветок смешивают с 10 мл 65%-ной Н"БОовыдерживают 2 ч прк 40 С, добавляют70 мл ацетона. Осадок отделяют декантированием жидкости и обрабатывают80 мл воды при перемешивании, Нерастворившуюся часть отделяют центрифугкрованкем, .высушивают (масса 1,5 г,т,е, 407.), а раствор пропускают черезколонку с анионитом ТВА, высушивают лкофкльно и получают 2 г т.е. 2053% растворимого хитодекстрина, олигосахаридный состав которого приведенв таблице и на фиг. 2 и 3,На фкг. 2 показана высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)смеси растворимых хктодекстринов, полученньгх в примере 2. Сорбент: склосорб-Н . Концентрация хктодекстринов,10 мг/мл, нанесено 0,01 мл. Пунктир:ВЗЖХ И-ацйткл-Д-глюкозамкна в тех жеусловиях, концентрация 10 мг/мл, нанесено 0,001 мл Римскими циФрамиобозначеньг места выхода олигосахаридов с соответствующей степенью поли 35керизации:, на фкг Э - гель-хроматография растворимых хитодекстринов,полученных в примере 2. Гель: тоеперлН(Файн), колонка 1 х 39 см. Пределы молекулярньгх масс разделяемыхю 0веществ для данного геля от 100 до7000. Нулевой объем колонки 1 мл,объемы алюкрованкя глюхозы, мальтозыи хктодекстркнов 35, 29 и 15 мл соответственно, Средняя степень полиме 45ризации хитодекстринов равна 7-8,Обозначения",.абсцисса "- объем элюированкя, ордината - оптическая плотность для УФ-поглощения при 190 нм(сплошная линия) и для колориметри"ческих измерений восстанавливающейспособности по Шомодк (пунктир),Данные ВЭЖХ о составе олкгосахаркдных фракций в растворимом хитодек 55 стринеСодержание фракции в хиНомерфракциигидролизата Время удерживанияосновного пика тодекстрине, 7 фракциихитодекстрина свидетеля л 7 10) 420" 550 3 15 430" 600 1 Т 1. 111 0,17 0,67 Не рассчитано 1 О 8 30 8 00 Анализ показывает, что препарат,полученный в примере 2, содержит мо-.но- и дисахарида в сумме меньше 1%тетрасахарида около 10%, трисахаридапримерно половину от тетрасахарида.Данные гель-хроматографии (фиг, 3)вместе с данными ВЭЖХ (фиг. 2 и таблица) свидетельствуют о том, что полученный препарат представляет смесьводорастворкмых хктодекстринов состепенью полимеризации больше четырех,П р и м е р 3. Опыт проводят какв примере 1, температура .40 С, времяо2 ч, расход кислоты 3 мл на 1 г хитина, расход ацетона б объемов на 1объем кислоты. Выход продукта 30%,Предлагаемый способ является болеепростым, чем известньгй, за счет исключения из процесса воздействия ультразвука и использования простыхприемов для выделения целевого продукта при сохранении его качества ивыхода,Формула изобретения Способ получения водорастворимых олигосахаридов, включающий обработку хитина концентрированным раствором минеральной кислоты при нагревании и выделение целевого продукта, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью укрощения процесса, обработку проводят 65%-ным раствором серной. кислоты в количестве 2,7-10 мл на 1 г хитина при 40-50 С в течение 20- 120 мин с последующей обработкой реакционной смеси ацетоном при объемном соотношении ацетона и раствора серной кислоты 5-7:1.1571047 Составитель Т.МартинскаКиштулинец Техред М,Ходанич Редактор орректор О.Ципле,1486 Зак ираж 43 ниям и открытия ая наб., д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгоро Гагарина, 10 Государственного комите113035, Москва,о изобр 35, Рау одписноем пРи ГКНТ СССР