Способ определения абсолютно сухой биомассы дуналиеллы

)ту А 14 СУкробио )о для олы,иомассы ли дунал ние точухой о био- отдельт даля омасмол ь/л ,4 вынн массы и взвешиваю(по 10 мп сусультуральной жидссь ссу дуналиелотделяют от 1 о ни пенз ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР 43219 78/31-1318.09.8715.09.89. Бюп. ): 34Кишиневский государственныйтет им.В,И. Ленина и Кишиневсарственный медицинский инстВ.ф, Рудик и В.С. Гудумак639.664 (088,8)Авторское свидетельство ССС9431, кл. А 01 С 33/00, 198торское свидетельство СССР2940, кл. А 01 С 33/00, 198(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АБСОЛ 0 ТНХОИ БИОИАССЪ ДУНАЛИЕЛЛЫ Изобретение относи ся к ми ии и может быть использова о еделения выхода б г ф ьной микроводорос и а также для ее обессоливанил.Цель изобретения - повыше ности определения абсолютно с биомассы дуналиеллы,Способ заключается в том, массу микроводоросли дуналиел ляют от культуральной среды Ф ванием или центрифугированием ют остаток солей промывкой б сы раствором, содержащим 3, 2-4, уксусно-кислого аммония и 8,8 моль/л гидроксида аммония сушивают при 105+2 С до посто процессе высушивания би 052 С уксусно-кислый амо(57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использованодля определения выкбда биомассы галофильной микроводоросли дуналиеллы,а также для ее обессоливания. Цельюизобретения является повышение точности определения. Способ заключается втом, что биомассу микроводоросли дуналиеллы отделяют от культуральнойсреды, удаляют остаток солей промывкой биомассы раствором, содержащим3,2-4,5 моль/л уксусно-кислого аммония и 4,4-8,8 моль/л гидрооксидааммония, высушивают при 105+2 С допостоянной массы и взвешивают, 4 табл. гидроксид аммония полностью разлагаются с образованием летучих продуктов, что дает возможность получить биомассу микроводорослей без примеси солей. В предлагаемом способе кроме известного свойства уксусно-кислого аммония и гидроксида аммония - разлагаться при нагревании с образованием летучих веществ, использовано их свойство при совместном присутствии в указанных концентрациях, создавать условия.,при которых в процессе промь 1 вки практически исключаются потери биомассы в результате диффузии низко" молекулярных веществ (глицерина и др. из клеток микроводорослей,Способ осуществляют следующим образом.Биомаль150726кости на предварительно отмытых высушенных и взвешенных мембранных фильтрах У 10 в аппарате Зейтцд. Затем биомассу промывают раствором, содержащим 3,9 моль/л уксусно-кислого аммония и 5,9 моль/л гидроксида аммония. Контроль полноты удаления хлористого натрия осуществляют качественной реакцией на ион хлора азотно- кислым серебром. Фильтры с биомассой помещают в сушильный шкаф при 105+2 С, высушивают в течение 1 ч до постоянной массы, охлаждают до комнатной температуры, взвешивают на аналитических весах. Содержание биомассы составило 0,0174 г. Затем определяют абсолютно сухую биомассу, делая соответствующий пересчет на 1 л суспенэии микроводорослей. 20Результаты определения АСБ культуры дуналиеллы при промывке раствором с различными концентрациями уксусно-кислого аммония и гидроксида аммония представлены в табл. 1 и 2. 5Данные табл. 1 и 2 свидетельствуют о том, что промывка биомассы дуналиеллы раствором, содержащим уксуснокислый аммоний и гидроксид аммония в концентрациях, выходящих за преде лы 3,2-4,5 моль/л и 4,4-8,8 моль/л, дает более низкие величины определения АСБ. Различия статистически достоверны (Р ( 0,05).Таким образом, для достижения цели 35 необходимо использовать раствор, содержащий 3,2-4,5 моль/л уксусно-кислого аммония и 4,4-8,8 моль/л гидроксида аммония.В табл. 3 приведены результаты оп ределения абсолютно сухой биомассы дуналиеллы известным и предлагаемым способами. Сравнение этих результатов свидетельствует о том, что известный способ дает заниженные результаты определения АСБ дуналиеллы и менее воспроизводим по сравнению с предлагаемым способом.С целью изучения причин потери биомассы по известному способу были поставлены эксперименты, позволяющие выявить факт диффузии глицерина и фракции средних молекул" - веществв основном олигопептидной природы смолекулярной массой ниже 30 кД изклеток микроводорослей в промывочный раствор.Результаты определения содержанияглицерина и фракции "средних молекул" в промывочных растворах при определении АСБ дуналиеллы известными предлагаемым способами приведены втабл. 4.Как видно из данных табл. 4, минимальная диффузия глицерина и фракции "средних молекул" в промывочныйраствор имеет место при использованиираствора, содержащего 3,9 моль/л уксусно-кислого аммония и 5,9 моль/лгидроксида аммония,Ирп использовании известного способа с промывкой биомассы растворомуксусно-кислого аммония диффузиянизкомолекулярных веществ (глицерина и фракции "средних молекул")иэ клеток дуналиеллы в промывочныйраствор резко увеличивается, чтоприводит к потере биомассы и получению заниженных результатов определения ЛСБ микроводорослей.Таким образом, прецлагаемый способ обеспечивает более точное определение веса сухой биомассы микроводоросли дуналиеллы за счет полного удаления примесей солей и предотвращения потери биомассы в результате диффузии низкомолекулярных веществиз клеток в промывочный раствор,Формула изобретенияСпособ определения абсолютно сухой биомассы дуналиеллы, включающий отделение биомассы от культуральной жидкости, удаление остатка солей промывкой биомассы раствором уксусно- кислого аммония, высушивание до абсолютно сухого веса и взвешивание, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности определения перед промывкой биомассы в раствор уксусно-кислого аммония вводят 4,4-8,8 моль/л гидроксида аммония, а содержание уксусно-кислого аммония в растворе составляет 3,2-4,5 моль/л.+ 2,9 М Номер 0,74 0,83 0,86 0;74 0,77 0,80 0,79 0,70 0,85 0,83 0,79 +0,053 6,7 (0,05 а н и е. Х - средняя арифметическая, Я - среднее квадратическое отклонение, Ч, Х - коэффициент вариации; Рц - достоверность различий по сравнению с результатами, полученными при примене-, нии раствора, содержащего 3,9 М СН СООМН 4 и 5,9 М МН 4 ОН (Критерий Вилкоксона-Манна-Уитни). При меч Таблица 2 4,5 ИСН 3 СООМН 4++ 10,3 М Номер а н и е. Х - средняя арифметическая; Б - среднееквадратическое отклонением Ч, Х - коэффициент вариации; Рц - достоверность различий по сравнению с результатами, полученными при применении раствора, содержащего 3,9 М СНСООМН 4 и 5,9 М МН 4 ОН (Критерий Вилкоксона-Манна-Уитни) . П Р имеч 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10Х Б Ч, 7 Рц 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Х ЯХ Рц 1,621,751,631,601,781,801,611,631,791,661,69ф 0,0835,00,05 0,87 0,89 081 0,85 0,86 0,88 0,83 0,82 0,89 0,88 0,85 +0,035 4,1 )0,05 1 в 711,801,751,741,681,841,791,661,731,851,761507261 Табли ца 3 Биомасса, г/л Коэффициентвариации, 7 Количество Способ Среднее Среднее повторностей квадратичное отклонение 0,78 0,072 9,2 1,25 0,046 3,7 г Таблица 4 Содержание глиСпособ церинав промывочном растворе,моль/л растворе ед.,опт. плотнос ти 1,28 0,99 0,035 0,025 Составитель Р, АндрееваТехред М. Ходанич Корректор Т. Колб Редактор М. Недолуженко Заказ 5472/3 Тираж 621 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раущская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,01 Известный - с промывкой биомассы1,0 моль растворомуксусно-кислогоаммония 1 ОПредлагаемый - спромывкой биомассыраствором, содержащим 3,9 моль/луксусно-кислогоаммония и 5,9 моль/лгидроксида аммония 10 Известный - с промывкой биомассы 1,0 М раствором уксусно-кислого аммонияПредлагаемый - с промывкой биомассыраствором, содержащим 3,9 моль/л уксусно-кислого аммония и 5,9 моль/л гидроксида аммония Содержание фракции "средних молекул" в промы- вочном