Способ отбора опылителей о-типа у сахарной свеклы

СОЮЗ СОВЕТСКСОЦИАЛИСТИЧЕРЕСПУБЛИК И 4 А 01 Н 1/02, 1/О ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ТЕЛЬСТВ ВТОРСКОМУ С Бюл. Р 34отаники им. Н.Г. ХоМ. Самойлов,ько я по созда- основе само- свеклы, Митва СССР.сахарной85, с. 15 ого хозяис Ленина НИИ векла", 19 а ыть использова свеклы. Цельимические особенно 1 зобрете и геновфертильример,ито ие относится к эяйства и може бласт ых ра плазмы в корнепл стений с помощью ельскогоольэован т быть ис харной све 1 е тодают сре - поелек анали рестриктно ди них мут клы,ы по цитоплазь аль е испол нии с рас опылителества мута этого скр сокращен средств, в качест Кроме того, с цел сроков, затрат трудаскрещивании использу ючается в том, чт ическим путем би ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ПНТ СССР(56) Методические укаэантнию опыпителей О-типа настерильных форм сахарнойнистерство сельскВсесоюзный орденасвеклы. НПО "Сахс16.(54) СПОСОБ ОТБОРА ОПЬЛИТЕЛЕЙ О-ТУ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ(57) Изобретение относится к сельму хозяйству и может бно в селекции сахарной Целью изобретения является сдкращение длительности и упрощение техно логического процесса, обеспечение возможности массового лабораторнопромышпенного выявления потенциальных опылителей О-типа для различных ЦМС форм, повьппение качества отбора и воэможности корректировки его программы,Способ закло оп" ределяют аналит о.80150726 изобретения - сокращение длительности упрощение технологического процесса, обеспечение возможности массового лабораторно-промышленного выявления потенциальных опылителей О-типадля различных ЦМС-форм, повышениекачества отбора и возможность корректировки его программ. Определяютаналитическим путем биохимическиеособенности генов цитоплаэмы в корнеплодах фертильных растений с помощью метода растриктного анализа,выделяют среди них мутанты по цитоплазме - потенциальные опыпители Отипа. Их используют в попарном анализирующем скрещивании с растениями ЦМС-формы. Отбор опылителей О-типпо результатам анализа проводят какиз исходных мутантов, так и из ихпотомства после скрещивания с ЦМСформами1 з.п. ф-лы. е опыпители О-типа, котоьэуют в попарном скрещиватениями ЦМС-формы, а отбор й 0-типа проводят из потомнтов по цитоплазмг после ещивания.1507263второго компонента набор из растений различных ЦМС-форм свеклы.Предлагаемый способ включаетследующие приемы. По результатамоценок хозяйственно важных призна 5ков подбирают фертильные и ЦМСФормы свеклы.В любые сроки осенне-зимне-весеннего периода, в том числе предыдущего года, аналитическим путем,например методом рестриктного анализа, выявляют мутанты по цитоплазме среди корнеплодов фертильной формы (форм) - потенциальные опылители О-типа.Затем потенциальные опылителиО-типа скрещивают с растениямиЦМС-формы (форм). По результатамэтого скрещивания отбирают опылители О-типа к той или иной ЦМС-форме,при этом отбор проводят как иэ исходных мутантов, так и из их лотомства после скрещивания с ЦМС-формами. 25Пример конкретного выполненияспособа.В корнеплодах отобранных фертильных номеров определяют биохимические особенности гецрв цитоплазмы спомощью метода рестриктного анализа.Ткани корнеплодов (по 50 г) гомогуниэируют в буфере (А), содержащем50 мМ трис; 3 мМ ЭДТА; 330 мМ сорбит;0,1% ВБА; 0,01 мМ меркаптоэтанола;рН 8,0.35Затем выделяют из гомогенизированных тканей корнеплодов митохондрии, Массу отжимают через фильтр.Фильтрат центрифугируют при 3200 об/мин 40и температуре ОфС в течение 10 мин,Супернатант повторно центрифугируютпри 10000 об/мин и температуре 0 Св течение 15 мин,Осадок митохондрий суспендируютв 10 мл буфера (А). Митохондрии об 45работали ДНКазой для удаления примесей ядерной и хлоролластной ДНК.К суспендированному осадку добавили10 мМ М 8 С 1 и 750 мкг ДНКазы. Гидролиз проводят при температуре О Св течение 30 мин.Действие фермента прекращают путем добавления трехкратного объемабуфера (Б), содержащего 25 мМ ЭДТА;О,б мМ сахароэы; 50 мМ трис - НС;55рН 8,0.После этого митохондрии осаждаютпутем центрифугирования лри 10000 об/ 2 4/мин н течение 15 миц, Осадок митохондрии суслецлируют в 10 мл буфера (Б),Затем суспецдировацный осадок наслаивают ца ступенчатый градиент сахарозы; 45%, 36% и 30%-ная сахарозасоответственно по 5, 10 ц 10 мл.Градиент сахарозы с наслоеннымосадком митохондрий центрифугируютпри 20000 об/мин и температуре 4 Си течение одного часа.Очищенные митохондрии собираютв слое между 45 и 36%-ной сахарозой.Затем выделяют ДНК из очищенныхмитохондрий.Слой ДНК митохондрий отбираютв ультрафиолетовом свете, разводятв три раза водой и центрифугируютпри 35000 об/миц в течение 3 часов.Фрагменты ДНК подвергают электрофорезу в 0,8%-ном агарозном геле в течение 16 часов.Гель - электрофорез ДНК митохондрий фотографируют в ультрафиолетовом свете.Таким образом, получают рестриктныеспектры митохондриальной ДНК отобранныхдля исследования корнеплодов. Эти рестриктные спектры сравнивают со стандартными спектрами исходных популяций.На основании такого сравнения отбирают мутанты по цитоплазме,Отобранные мутанты - потенциальныеопылители О-типа высаживают на изолированных участках, К каждому из них подсаживают корнеплод ЦМС-формы (форм) .В период цветения семенников проводят анализирующее скрещивание каждой лары в изоляторе.Семена потенциальных опылителейО-типа от свободного цветения убирают индивидуально по растениям и высевают все или часть (в зависимостиот селекционной программы) в летнемпосеве для получения штеклицгов.Семена потомства растений ЦМСформы также высевают в летнем посеве.Молодые растения потомства ЦМСформы высаживают в теплицу,В период цветения семенников проводят анализ стерильности растенийпотомства ЦМС-формы от анализирующего скрещивания.В соответствии с результатамианализа выделяют опылители О-типа изпотомства мутантов по цитоплазме -потенциальных опылителей О-типа.В дальнейшем с опылителями О-типаведут работы по направленным парнымскрещиваниям, насыщению ЦМС-потомст1507262 Составитель Е. ШкрадюкРедактор М. Недолуженко Техред М.Ходанич Корректор С. Черни Заказ 5472/3 Тираж 621 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГЕНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 ва, выделению материалов для формирования пробных гибридов на стерильной данной ЦМС-формы (форм), используют для повторного отбора среди них опылителей О-типа других ЦМС-форм5 сахарной свеклы.Положительный эффект предлагаемого способа заключается в том, что он,позволяет сократить длительность процесса подбора опыпителей О-типа к ЦМС-формам сахарной свеклы с более чем 3 лет до 1 года. Появляется возможность ускорить соответственно на такой срок создание и внедрение в производство возможных эффективных гибридов сахарной свеклы на ЦМС-основе,гПри этом упрощается технология подбора опылителей О-типа к ЦМС формам свеклы путем уменьшения числа операций, что обусловливает сокращение затрат труда и средств.Кроме того, способ позволяет совместить во времени и пространстве 25 процессы подбора опыпителей О-типа к различным ЦМС-формам, что ведет также к сокращению сроков, затрат труда и средств.формула изобретения1. Способ отбора опылителей О-типа у сахарной свеклы, включающий скрещивание фертильных и ЦМС-форм растений, анализ стерильности гибридного потомства, выделение опылителей О-типа по результатам анализа, о т - л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения длительности и упрощения технологического процесса, обеспечения возможности массового лабораторно-промышленного выявления потенциальных опыпителей О-типа для различных ЦМС-форм, повышения качества отбора и воэможности корректировки его программы, перед скрещиванием у фертильных растений определяют аналитическим путем биохимические особенности генов цитоплазмы в корнеплодах, вьщеляют среди них мутанты по цитоплазме - потенциальные опылители О-типа, которые используют в скрещивании с растениями ЦМС-формы, причем отбор опылителей О-типа по результатам анализа проводят как иэ исходных мунантов, так и из их потомства после скрещивания с ЦМС-формами.2. Способ по п. 1, о т л и ч а - ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения сроков, затрат труда и средств; в скрещивании используют в качестве второго компонента набор иэ растений различных ЦМС-форм сахарной свеклы.