Способ определения сортовой чистоты семян тыквенных культур

3 1498410вое отношение акриламида к ЯИ-метиленбисакриламиду составляет 29, 2: 0,8.Для ириготовленйя гелей используютследующие растворы:30 -ный акриламид: акриламид29,2 г, И,И -метиленбисакриламид08 г, объем доводят водой до 100 мл;трис-НС 1-буфер (рН 8,8): трис18,2 г додецилсульфат натрия 0,4 г,объем доводят водой до 100 мл;трис-НС 1-буфер (рН 6,8): трис6,0 г, додецилсульфат натрия 0,4 г,объем, поводят водой до 100 мл;трис-глициновый буфер, рН 8,3:глицин 28,8 г, трис 6,06 г, додецилсульфат натрия 2,0 г, объем доводятводой до 2 л.Концентрирующий гель состоит из1,5 мл раствора акриламида, 2,5 мл 20трис-НС 1-буфера, 6 мл бидистиллированной воды, 0,06 мл 10%-ного персульфата аммония, О,И 1 мл М,ИЯ,И тетраметилендиамина,Разделяющий гель состоит из 11,8 мл 2.25раствора. акриламица, 8,75 мл трисНС 1-буфера, 14,2 мл бидистиллированной воцы, 0,18 мл 10 -ного персульфата аммония, 0,015 мл И,И,И,И -тетраметилендиамина. Размеры разделяющего геля составляют 180 х 140 хх 1,5 (мм). Одновременно анализируют32 образца. В качестве электродногораствора используют трис"-глициновыйбуфер (раствор г). Образцы наносятв объеме 0,005-0,015 мл в каждуюлунку. Электрофорез проводят при гра.диенте потенциала 13 В/см в течение4,5 ч. После окончания электрофорезагель помещают в 15%-ный раствор трихлоруксусной кислоты на 1 ч. В табл.1представлены результаты электрофоретического разделения кукурбитинапредлагаемым способом, а в табл.2результаты, полученные при различных 45граничных и промежуточных условиях."ак следует из табл. 2, при выходе за пределы граничных значенийинтервалов параметров, включенныхв формулу изобретения, эффект необхо Одимой разрешающей способности не достигается.П р и м е р 2, Определение сортовой чистоты тыквы сорта "Рекорд" проводилось методом электрофореза кукурбитина, выделенного из покоящихсясемян, по методике изложенной в примере 1. Для анализа было взято100 семян. Предварительная работа с чистосортным материалом сорта Рекордпозволила выделить два характерныхдля сорта электрофоретических спектракукурбитина, различающихся по аллепакомпонента с молекулярной массой25,4 кД,В табл, 3 представлены компонентыэлектрофоретического спектра кукурбитина биотипов сорта "Рекорд .Анализ проведен для установлениясортовой чистоты конкретной партиисемян сорта "Рекорд электрофоретическим спектром кукурбитина с молекулярной массой субъединиц 21,9,23,3, 23,9, 24,7 кД, Сортовая чистота, установленная таким способом,составляет 97 . (по данным грунт-контроля 982) .Анализ этой же партии семян по известной методике не позволяет выделить примеси, равно как и биотипы всорте "Рекорд" (табл. 4), Все исследованные образцы обладают единымспектром, что подтверждает более низкую разрешающую способность известнойметодики и невозможность ее использования в контроле сортовой чистотытыквенных,В табл, 4 представлены компонентыэлектрофоретического спектра кукурбитина сорта "Рекорд по методикеИ.Ко 11 ег,Предлагаемый способ позволяет проводить анализ по отдельно взятомусемени, что необходимо для определения сортовой чистоты, сократить процесс экстракции кукурбитина практическина сутки, что значительно ускоряет анализ сортов,Формула изобретенияСпособ определения сортовой чистоты семян тыквенных культур по электрофоретическому спектру белка, включающий выделение кукурбитина из образца покоящихся семян, его восстановление до субъединиц,. электрофоретическое разделение субъединиц в двухслойном полиакриламидном геле на основе акриламида и М,И -метиленбисакриламида, один из слоев которого является концентрирующим, а цругой - разделяющим, в присутствии додецилсульфата натрия и проявление разделенных субъециниц, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения разрешающей способ5 14984 ности, в качестве концентрирующего берут гель с содержанием акриламида 4,9-5,1 мас.Е, а в качестве разделяющего - гель с содержанием акриламида 11,9 - 12,1 мас.7 а соотношение ак 5 Мол,м,П р и м е ч а н и е. 1-5 СцсцгЬ 1 га реро Грибовская Украинская Грибовская Сотэ,Белая 13 6-7 СцсцгЬ 1 га Грибовская тпах 1.тпа Мраморная 8-9 СцсцгЬгга Мускатная тпояс 1 сага Перехваткакустовая,многоплодная,37,зимняя Таблица 2 данные компонентов при мол.м. (кд)1 . 1" 1" Режим 25,7 4 21,5 д диф. комп,(разделяющего) 10 6риламида к И,И-метиленбисакриламидун геле устанавливают в интервалах29,0-29,2:0,8-1,0 соответственно,причем разделение ведут при градиенте потенциапа 13-14 В/см,Та блицаРежим 23)0 22,8 21,5 Диффузные компоненты + + Диффузные компоненты Таблица 3 Биотип Данные при мол.м. Таблица 4 Мол.м Данные при содержании комкД понентов 23,3 23,9 ,25,1 Составитель А.ПроказинРедактор В,Бугренкова Техред М.Дидцк Корректор М.Самборская аказ 447 б/1 Тираж 621 НИИПИ Государственного комитета по изо 113035, Москва, Ж; РГКНТ СССР одписно ретениям и открытиям и ушская наб., д. 4/5