Способ определения 1, 5-диаминоантрахинона в крови лабораторных животных

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУ БЛИН 4 С 01 К 33/48 НИЯ Бюл. Иф 35 литехнический и(57 А. В. Михайл 88.8)ие указания полекарственногя. Пермь, ПГФИ хими- рас 1979,волн лоя 1 чувстви 2 табл. г/л,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЭОБР К АВТОРСКОМУ СВИДТЕЛЬСТВ(56) Методическческому анализутительного сырь О 1425545) Изобретение относится к меднц Из сыворотки крови удаляют бел и экстрагируют смесью бензолроформ (4:1). Экстракт отстаива и спектрофотометрируют при длин ы 410 нм и толщине поглощаемогсм. Изобретение повышает тельность способа до 0,1 мИзобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, н частности санитарной токсикологии и может быть использовано для коли" чественного определения 1,5-диаминоантрахинана н биологических жидкостях, например в крови.Цель изобретения - повышение чувствительности способа.Поставлеьная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения 1,5-диаминаантрахинона в биологических жидкостях путем добавления к исследуемой пробе экстра" гента с .последующим фотометрированием полученного при взаимодействии 1,5"диаминоантрахинона. с зкстраген- том окрашенного продукта, отличителнной особенностью является точто в качестве экстрагента используют смесь бензала с хлороформомсоотношении 4:1, что позволяет повысить чувствительность способа до 0,1 мг/л. О количестве определяемого вещества судят по величине оптической плотности.".:.ри экстрагировании анализируемого вещества образуется красно-коричневый раствор. который затем фотометрируют при длине волны 410 нм и толщине поглощаю. щего слоя 1 см.Способ осуществляют спгующим образом.У лабораторного животного (белая крыса весом 150-180 г) отбирают 3 мл крови. Пробу крови пентрифуги-1руют в течение 15 мин на лабораторной центрифуге ОП, -3 са скоростью 3000 об/мин, Из пробы отбирают 2 мп сыворотки крави, к которой прибавляют 0,5 мл 10%-ного раствора хлористого кальция. Для свертывания и осаждения белков раствор центри-фугируют в течение 5 мин со скоростью 3000 обггмин. К 2 мл надосадочной жидкости прибавляют 4 мп бензола и 1 мл хлороформа, Смесь перемешивают и содержнггое интенсин" но встряхивают н течение 10 мин, Смеси дают отстояться до полного расслоения реагентов и исследуемой пробы. Затем бензольно-хлороформенный слой сливают в пробирку ичерез 15-20 мин после экстрагиронания,измеряют оптическую плотность окраогеннога раствора на спектрафотометре при длине волны 410 нм и толщине поглощающего алая 1 см, По аналогичной прописи определяют 1,5-диаминоантрахинон в других биологических жидкостях.П р и м е р. Анализируют пробы крови (3 мл) с содержанием 15"диаминоантрахинона 0,0; 0,1; 0,5; 1,0;3,0; 5,0 мгггл. Пробы крови центрифугируют в течение 15 мин на лабораторной центрифуге ОП - 3 со скоростью 3000 об/мин. Из каждой пробы отбирают по 2 мл сыворотки крови, к которой прибавляют 0,5 мл 10%-ного раствора хлористого кальция. Для свертывания и осаждения белков раствор центрифугируют в течение 5 мин са скоростью 3000 об/мин. К 2 мл насадачной жидкости прибавляют 4 мл бензола и 1 мл хлороформа. Смесь перемешивают и содержимое интенсивно встряхивают в течение 10 мин.Смеси дают отстояться до полного расслоения реагентов и исследуемой пробы. Затем бензольно-хлороформен" ный слой сливают в пробирку и через 15-20 мин после экстрагирования измеряют оптическую платность окрашен" ного раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм и толщине поглощающего слоя 1 см.Результаты определения 1,5-диаминоантрахинона при граничных запредельных и оптимальных значениях параметран приведены в табл,1. Получен" ные данные сгзидетельствуют о там, что оптимальный эффект наблюдается при использовании в качестве реагентов смеси бензола и хлороформа в соотношении 4:1.Сравнительные данные определения 1,5"диаминоантрахинона по известному и предлагаемому способам представлены в табл.2.Как видна из табл.2, предлагаемьй способ определения 1,5-диаминоантрахинона является более чувствительным чем известный способ.Формула изобретенияСпособ определения 1,5-диаминаантрахинона в крови лабораторных животных, включающий получение сыворотки кровя, удаление белков, экстракцию органическим растворителем с последующей спектрофотометрией полученного раствора, о т л и - ч а ю ш н й с я тем, чта, с целью повьпдеиия чувствительности способа,з 14255454экстракцию проводят смесью бензол- отстаивают не менее 15 мнн, послехлороформ, взятьпс в объемном соот- чего спектрофотометрир.ют нри длиненошении 4: 1, полученный экстракт волны 410 нм. Т а б л и ц а 1 Не определено 0,0,21 3 2 5,0 Т а б л и ц а 2 способ Изве Предлагаемый способ грешностьпределения иная кон цеитрация,мг/л% Не 0 Не определен еделе н 0,11 о,5". 16,6 1,0 40 0 25 Ф12,5,5 ВНИИПИ Заказ 4761/40 Тираж 847 Подпис роизв.-полигр. пр-гие, г. Ужгород, ул. Проектная 1,0 3,0 пр ед еля емаяонцентрациясредняя пятипределений),мг/л аданная онцентрация, мг/л 0,1 0,5 Определяемаяконцентрация,