Способ определения прогрессирования хронического гепатита и цирроза печени

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК А 1 9) а) 4 А 61 В 10/00 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(71) Вильнюсский государственный университет им. В.Капсукаса(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОГРЕССИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА И ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ(57) Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии и предназначено для диагностики прогрессирования патологического процесса в печени. Цель изобретения - повышение точности способа. Дляэтого проводят многоступенчатую биопсию печени под общим внутривенным наркозом с применением миорелаксантов коротко го действия, что предотвращает трав-. мирование паренхимы печени, забирают 3-4 мл печеночной крови, параллельно забирают 3-4 мл периферической венозной крови. Из обеих проб центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина выделяют лимфоциты, отмывают их дважды фосфатным буфером, доводят конечную концентрацию до 10 млн. клеток в 1 мл. В пробирки бе-, рут 50 мкл клеточной взвеси, добавляют 10 мкл конъюгированных с флуоресцином моноклональных антител реагирующих со специфическими рецепторами натуральных киллеров (МК"клев ток). Взвесь инкубируют 1 ч при 4 С, сделанные нативные мазки исследуют с помощью флуоресцентного микроскопа. В каждом препарате считают не менее аФ 200 кл.: в ультрафиолетовом спектре считают светящиеся клетки (ИК-клетки), микроскоп ставят в режим освещения видимого спектра и определяют С, число лимфоцитов. Из общего числа лймфоцитов вычисляют относительное содержание ИК-клеток, при его превышении в печеночной крови по сравнению с периферической венозной кровью на 7,97 Е и более определяют прогрессирующий патологический процесс в печени, а при повышении на 1,447. и менее - непрогрессирующий патологический процесс.Изобретение относится к медицине,в частности к гепатологии, и можетбыть применено при диагностике прогрессирования патологического процесса в печени,Цель изобретения - повышение точности способа,Способ осуществляется следующимобразом. 1 ОУ больного во время: проведениямногоступенчатой пункционной биопсиипечени забирают 3-4 мл печеночнойкрови. Многоступенчатую биопсию печени проводят под общим внутривенным 15наркозом с применением миорелаксантовкороткого действия, что позволяет избежать возможного травмирования паренхимы печени, связанного с дыханием больного. Прокол печени делают на 2 Оуровне средней подмьппечной линии в9-10 межреберье двойной иглой, состоящей из наружной игль (канюли), которую оставляют в печени и внутреннейиглы для взятия биоптата печени, которая на 15 мм длиннее наружной илегко вталкивается в просвет наружной иглы.Внутреннюю иглу с биоптатом извлекают из печени, а канюлю оставляют в 30печени и через нее собирают в пробирку 3-4 мл печеночной крови. Есликровь не течет, канюлю медленно извлекают, пока в канюле. не появляетсякр ов ь. После з аб ор а, нео бходимого для 35исследований количества печеночнойкрови., в канюлю вставляют электроддиатермокоагулятора и производятэлектрокоагуляцию пункционного канала, Это исключает возникновение любых послеоперационных осложнений,Параллельно с печеночной кровьюзабирают 3-4 мл периферической венозной крови из локтевой вены.Из обеих проб крови стандартнымметодом центрифугирования.в градиенте плотности Фиколл-верографина выделяют лимфоциты, дважды отмывают ихФосфатным буфером и доводят окончательную концентрацию до 10 млн. клеток в 1 кп. В маленькие силиконированные пробирки микрошприцем берут50 мкл клеточной взвеси и добавляют10 мкл конъюгированных:с Флуоресцеином моноклональных антител, реагирующих со специфическими рецептораминатуральных киллеров (МК-клеток),Взвесь инкубируют в течение 1 ч притемпературе 4"С, после чего делают нативные мазки и исследуют их при помощи Флуоресцентного микроскопа, В каждом препарате считают не менее 200 кл.ф сначала в ультрафиолетовом спектре считают светящиеся клетки (ИК-клетки), после чего микроскоп переключают на режим освещения видимого спектра и в том же поле зрения определяют общее число лимфоцитов, Из общего чи:ла гимфоцитов вычисляют относительное содержание 11 К-клеток.При повышении относительного содержания МК-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической ве-, нозной кровью на 7,977 и более определяют прогрессирующий патологический процесс в печени, а при повышении относительного содержания МК-клеток в печеночной крови по сравнению с периФерической венозной кровью на 1,447. и менее равно как и при отсутствии повышения или даже уменьшении определяют непрогрессирующий патологический процесс.П р и м е р 1, Больной Ш.А,З, номер .истории болезни 17663,86, поступил в гастроэнтерологическое отделение с жалобами на боли в правом подреберье, чувство полноты в желудке после употребления жирной пищи, общую слабость, повышенную раздражимость, утомляемость, с диагнозом направления: цирроз печени. При осмотре больного отмечена увеличенная на 2 см ниже реберной дуги чувствительная при пальпации печень обычной консистенции. Из анамнеза известно, что больной злоупотребляет алкогольными напитками. После лабораторного обследования констатировано: общий анализ крови - гемоглобин 112 г/л, лейкоцитов 6,9 х 10 в литре, эоз. 5, п.яд.4, сегм.44, лимф,42, мон.б, СОЭ 16, время свертывания крови - начало 5 мин, конец 5 мин 30 с, Общий белок80,9 г/л, альбумины 51,27 глобулины альФа.1 5,77, альфа 2 9,8%, бетта 15,47, гамма 17,97 Бетта линопротеиды 4800 г/л. Холестерин 4, 1 ммольл. Аланиновая аминотрансфераза0,28 ммоль/л ч. Щелочная фосфатаза 0,24 ммоль)л ч, Анализ мочи - норма, Эхоскопическое исследование печени: печень и селезенка увеличены, увеличено отражейие эхо-сигнала по всей печени, расширен диаметр портальной вены. Для уточнения диагноза .проведена многоступенчатая биопсия печени,309 3 1421во время которой взят материал дляморфологических исследований, а такжепеченочная и периферическая венозная кровь для параллельного исследованиясодержания МК-клеток. Установленочто в периферической венозной кровисодержание ИК-клеток составляло35,863, что могло бы указывать на активное прогрессирование патологическо кого процесса, В параллельном исследовании печеночной крови найдено18,93% МК-клеток. На основании резкого (на 16,9 ) снижения содержанияВК-клеток в печеночной крови по срав нению с периферической венозной кровью бьло констатировано снижение активности патологического процесса впечени. Повторное комплексное клинико-лабораторное обследование больного, а также анализ морфологического исследования биоптата печени полностью подтвердили правильность поставленного диагноза,П р и м е р 2, Больная Б.В-Б,Т, 25номер истории болезни 2161,86, поступила в гастроэнтерологическое отделение с жалобами на боли в правомподреберье, общую слабость, повьппенную раздражимость, утомляемость, временами появляющийся зуд, желтизнуглаз, с диагнозом направления: хронический гепатит, При осмотре больного обнаружена легкая желтизнасклер, умеренно увеличенная (2 смниже реберной дуги), чувствительнаяпри пальпации печень плотной консистенции. Результаты некоторых лабораторных исследований: общий анализкрови - гемоглобин 117 г/л, лейкоци-тов 4,5 х 10 в литре, эоз.1, п.яд.2,сегм.67, лимф.26, мон.3, СОЭ 15, время свертывания крови - начало 4 мин30 с, конец 4 мин 50 с, Общий белок69 г/л, альбумины 48,27., глобулины 45альфа 1 6,67, альфа 2 6,6%, бетта16,07 гамма 22,67, Билирубин общий15,7 мкмольфл (связанный - 9,0, свободный - 6,7). Бетта липопротеиды5500 г/л. Холестерин 7,4 ммоль/л.Активность аланиновой аминотрансферазы 0,98 ммоль/л.ч, щелочной фосфатазы 2,5 ммоль/л-ч. Для уточнениядиагноза произведена многоступенчатаяпункционная биопсия печени с парал 55лельным взятием печеночной и периферической венозной крови для определения содержания ИК-клеток. СодержаниеМК-клеток в периферической крови 25, 167, а в печеночной - 33, 137 (разница 7,977). На основании увеличения содержания ХК-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической венозной кровью диагностировано прогрессирование патологического процесса в печени. Повторное комплексное клинико-лабораторное исследование, а также морфологическое исследование биоптата печени полностью подтвердило достоверность диагноза, поставленного на основании предлагаемого способа.П р и м е р 3. Больной У.В.Л., номер истории болезни 4005,86, поступил в 3-е терапевтическое отделение с жалобами на сильную слабость, чувство полноты в правом подреберье, резкое увеличение объема живота, желтизну кожи и склер, одьппку, При осмотре больного кожа и видимые слизистые умеренно желтушны, на коже туловища - усилен сосудистый рисунок, видны "звездочки"При пальпации печень резко увеличенная, бугристая, выступающая из-под правого подреберья на 10 см. Селезенка увеличена, отчетливо констатируется асцит, Предварительный диагноз: цирроз печени, возможно - рак печени. Данные лабораторных исследований: общий анализ крови - гемоглобин 139 г/л, лейкоцитов 6,9 х 10 в литре, эоз,2, сегм,52, лимф.40, мон.б, СОЭ 32.Протеинограмма: общий белок 86,01, альбумины 47,27, альфа 1 4,5%, альфа2 9 у 0%р бетта 1 б, 97, гамма 22, 47.,Холестерин 6, 7 ммоль/л. Бетта липопротеиды 8000 г/л. Билирубин 34, 2 мкмоль/л. Активность аланиновой аминотрансферазы 1,98 ммоль/л ч, аспарагиновой аминотрансферазы О, 14 мкмоль/л .ч. Для уточнения диагноза проведена многоступенчатая пункционная биопсия печени с параллельным взятием печеночной и периферической венозной крови для определения ИК-клеток. Содержание ИК-клеток впериферической венозной крови -29,727., а в печеночной - 57,687. (разница 27,97). На основании резкогоувеличения содержания ИК-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической венозной определено резкоепрогрессирование активности патологического процесса в печени Последующее комплексное клинико-лабораторноеобследование, а также морфологическоеСоставитель А,ЛычковаТехред А.Кравчук Корректор Л.Патай Редактор Г.Волкова Заказ 4355/2 Тираж 655 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 5 1421309 6исследование пунктата печени полно- Формула и э о б р е т е н и я стью подтвердили достоверность диаг- Способ определения прогресснрова" коза. ния хронического гепатита и циррозапечени путем определения относитель 5Таким образом, предлагаемый способ ,ного содержания натуральных киллеров позволяет на 47,6 Ж точнее определить в периферической венозной крови, о тпрогрессирование активности патологи- л и ч а ю ш и й с я тем, что, с цеческого процесса в печени по сравне- лью повышения точности способа, панию с известным и теМ самым заблаго О раллельно определяют содержание навременно начать активные лечебные ме- туральных киллеров в печеночной крорОприятия тем больвым, у которых ви и при повышении их содержания на предвидится прогрессирование активно,977 и более в печеночной крови по сти патологического процесса в пече- сравнению с периферической венозной ни, сократить случаи неблагоприятных 1 б кровью, определяют прогрессирование исходов, коррегировать лечениепатологического процесса.