Способ определения повреждения нервной системы

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК А 1 14 3 51) 4 Н 33/ ГОСУД Г 10 ДЕ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНД ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЪСТВУ м. И.П.Павучаков к др. В невроп 1. М.,атологов1969,АРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР М ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(56) Панов А.Г. иЧ Всесоюзный съезди психиатров, т.с, 242-243,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯНЕРВНОЙ СИСТЕМЫ(57) Для раннего выявления повреждений олигодендроглиальных и миелиновыхструктур нервной ткани в сывороткекрови и/или в спинномозговой жидкости определяют аутоантитела к галактоцереброзидам мозга. При повышении ихтитра относительно нормы для даннойвозрастной группы диагностируют повреждение упомянутых структур нервнойткани.Изобретение относится к медицине и экспериментальной биологии, в частности к иммунологическим методам диагностики, и может быть испольэова но в клинической практике и в экспериментальных исследованиях заболева-, ний, связанных с деструкцией глиальных и миелинизированных структур .нервной системы. 10Цель изобретения - раннее выявление повреждений олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани.Для достижения поставленной цели определяют в сыворотке крови и/или 15 в спинномозговой жидкости аутоантитела к галактоцереброзидам мозга (ГалЦ) и в случае превышения их титра относительно нормы для данной возрастной группы, диагностируют повреждение 20 олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани.Способ осуществляют следующим образом.Для определения аутоантител к ГалЦ 25 мозга в РСК готовят серию двукратных разведений сыворотки крови больного, вносят по 0,02 мл каждого разведения сыворотки в лунки полистироловых панелей, добавляют во все лунки по 0,02 мл липидной суспензии антигена (содержащей ГалЦ, фосфолипиды и хо-, лестерин в примерном соотношении 11: ;40:35 мкг на мл суспензии) и по 0,02 мл комплемента (в подобранной дозе) и инкубируют панель 45 мин при 37 С для того, чтобы произошло образование комплекса антиген - анти- тело и фиксация комплемента на этом комплексе. Затем во все пробы добавляют по 004 мл гемолитической системы (смесь суспензии бараньих эрнтроцитов с антисывороткой против них) и инкубируют при 40 С 3-5 мин для того; чтобы комплемент, оставшийся не связанным с комплексом ГалЦ - антитела, фиксировался на втором комплексе эритроциты - антиэритроцитарные антитела и вызвал гемолиз эритроцитов. Результатом реакции или титром аутоантител к ГалЦ считают то разве-. дение исследуемой сыворотки, при котором гемолиз достигает 80-1007.В случае положительной реакции и выявления антител в титрах, четырех 55 кратно превышающих верхнюю границу нормы (верхняя граница нормы для детей - титр 1:4, для взрослых - титр 1:2), диагностируют наличие повреждения олигодендроглиальных и миелиновых структр нервной ткани. При поста"ковке иммунологических реакций с сывороткой крови - РСК, реакции пассивной гемагглютинации и др. диагностичееки значимым принято считать 4 кратное возрастание титра.П р и м е р 1, Больной Х-ин О9 л,и 9 мес., диагноз: острый энцефалит, установленный на основаниирезультатов обследования общепринятым способомклинико-анамнестическоеобследование, цитологическое и биохимическое исследование ликвора,электрофизиологические мЕтоды), обследован согласно предлагаемому способу диагностики в конце первой недели заболевания. В сьворотке кровиобнаружены антитела к ГалЦ в титре1:256, что не только подтверждаетналичие деструктивных изменений вмозге, но н указывает на вовлечениев патологический процесс клеточныхструктур олигодендроглиального происхождения,П р и м е р 2, Больная ф-ва Н2 л,и 10 мес., диагноз: острый энцефалит, установленный общепринятымспособом, обследована согласно предлагаемому способу диагностики на5-й день заболевания. В сывороткекрови обнаружены аутоантитела к ГалЦв низком титре 1:4, не превышающемверхнюю границу нормы, Этот результатуказьвает на то, что на данном этапезаболевание протекает беэ поврежденияолигодендроглиальных и миелинизированных структур мозга.П р и ме р 3. Больной С-ин,.бО л., диагноз:"тяжелая черепно-мозговая травма, установленный на основании результатов клинико-анамнестического исследования, обследован согласно. предлагаемому способу диагностики на третий день заболевания, Всыворотке крови обнаружены аутоанти"тела к ГалЦ в титре 1:32, что указывает на развитие деструктивных изменений клеточных структур олигодендроглиального происхождения в тканимозга у этого больного,- П р.и м е р 4. Больной Ш-ев,7 б л., диагноз: черепно-мозговаятравма средней тяжести, установленный общепринятым способом, обследовансогласно предлагаемому способу диагностики,на третий день болезни. Аутоантитела к ГалЦ обнаружены в низком3 1435титре 1:2, не превышающем норму. Этопозволяет заключить, что поврежденияолигодендроглиальных и миелиновыхструктур в данном случае черепно-моз 5говой травмы места не имеют.П р и м е р 5. Согласно предлагаемому способу обследован кролик изгруппы животных, отобранных для иммунизации с целью получения моноспецифических антисывороток к определенным очищенным антигенам мозга. В сыворотке кролика обнаружены аутоантитела к ГалЦ в титре 1:16, что свидетельствовало о деструктивном процессе в мозге и послужило основаниемдля его выбраковки. Гистологическийанализ ткани мозга (окраска азурэозином) подтвердил наличие патологического процесса в моэгел в оболоч Оках мозга, а также в сером и беломвеществе были обнаружены явные воспалительные изменения. Это позволяетзаключить, что предлагаемый способдиагностики может быть использован 25в экспериментальной биологии и экспериментальной невропатологии как длявыбраковки животных, так и для изучения экспериментальных моделей различных поражений мозга. 30Испытание способа проведено приобследовании 34 здоровых лиц, 7 больных с инфекционным заболеванием,не затрагивающим нервную систему, иб 8 больных с инфекционными, воспалительными и травматическими поражениями ЦНС и ПНС. Результаты теоретической и экспериментальной проверкипредлагаемого способа, а также анализпримеров его конкретного выполнениясвидетельствуют о том, что предлагаемый способ обладает высокой специфичностью по отношению к нервной ткани,так как основан на выявлении аутоантител к ГалЦ, локализованным исключительно ив нервной ткани и являющимся специфическими антигенными маркерами клеточных структур олигодендроглиального происхождения. Специфичность способа подтверждается отсутствием антител к ГалЦ у больных без поражения нервной системы, а также обязательным выявлением высоких титровпротив ГалЦ антител в случаях заведомо острых деструктивных пораженийнервной ткани,Применение предлагаемого способадает возможность диагностировать какв ЦНС, так и в ПНС наличие ранних 314тонких деструктивных изменений в нервной ткани, не выявляемых другими методами, а также диагностировать деструктивные изменения в определенных клеточных структурах нервной ткани, а именно в олигодендроцитах и миелиновых оболочках, эа счет высокой специфичности способа.Предлагаемый способ дает объективный лабораторный тест для повышения точности диагноза у ряда неврологи" ческих больных (дифференциальная диагностика менингитов и минингоэнцефалитон; определение степени тяжестичерепно-мозговых травм, наличие или отсутствие периаксональной демиелинизации при поражениях ПНС и пр.), а также для уточнения патогенеэа заболевания у данного больного, а своевременная постановка правильного диагноза позволяет обеспечить выборпатогенетически обоснованной терапии.Кроме того, предлагаемый способ дает возможность на основании специфического лабораторного теста выбраковывать экспериментальных животных с бессимптомными поражениями мозга при отборе здоровых животных для получения моноспецифических антисывороток, а также для диагностики повреждения клеточных структур нервной тка" ни при изучении различных экспериментальных моделей различных поражений ЦНС.Способ характеризуется простотой исполнения и может быть использован в любом стационаре, имеющем лабораторию, располагающую техникой постановки иммунологических реакций. Осуществление способа не требует специаль- ф ного оборудования, за исключением обычно применяющегося для серологической диагностики, и он может быть проведен средним медицинским персоналом, имеющим квалификацию лаборанта. Способ не травматичен, так как требует для анализа лишь небольшие количества (до 0,3 мл) сыворотки крови или ликвора. Применение способа рекомендуется для дифференциальной диагностики функциональных нарушений и органическихпоражений нервной системы при инфекционно-воспалительныхдегенеративных демиелинизирующих процессах, токсических и травматических поражениях мозга, нарушениях кровоснабжения мозга и других неврологических заболеваниях для раннего вы413531 6что, с целью раннего выявления повреждений олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани, в ис 5следуемой крови и ликворе определяютантитела к галактоцереброзидам и приповышении их титра по сравнению снормой определяют повреждение нервной системы. 5явления деструктивных изменений вклеточных структурах нервной ткани. формула изобретения Способ определения повреждениянервной системы путем исследованиякрови, о т л и ч а ю щ и й с я тем,Составитель П. БонарцевТехред Л,Олийнык Корректор Л. Патай Редактор А, Огар Заказ 3777/47 Тираж 847 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул, Проектная, 4