Устройство для индентификации микроорганизмов

СОЮЗ СОНЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 19) Я С 12 М 1/00 ГОСУД ПО ДЕ ЕТЕЛЬСТВУ К АВТОРСКОМ едовагии и ова, ский инмед для ВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ИДЕНТИФМИКРООРГАНИЗМОВ(57) Изобретение относитсяской технике и предназначен робиологии, Цель изобретения - стабилизация влажности при культивации микроорганизмов, Устройство состоит из контейнера 1, в котором установлена рабочая панель 2, В рабочей панели 2 имеются ячейки 4, Дно ячеек выполнено в виде конусов. В контейнере 1 выполнены продольные канавки. Вдоль оси канавок расположены вершины конусов, В ячейках 4 стенка контейнера 1 выполнена ступенчатой, что приводит к образованию зазора между крышкой 3 и рабочей панелью 2, Уст- ройство изготавливают из полимерного материала. 3 ил,132012Изобретение относится к микробиологии и предназначено для идентификации микроорганизмов,Целью изобретения является стабилизация влажности при культивациимикроорганизмов.На фиг. 1 показано устройство, общий вид; на фиг. 2 - рабочая панель;на фиг. 3 - основание.Устройство состоит из контейнера 1 О1 в котором установлена рабочая панель 2, и крышки 3. В рабочей панели2 имеются ячейки 4 для дифференциально-диагностических сред. Дно ячееквыполнено в виде конусов 5. В контейиере 1 выполнены продольные канавки6, вдоль оси которых расположены вершины конусов 5. Для поддержания оптимальной влажности в ячейках 4 стенка 7 контейнера 1 выполнена ступенча Отой, что приводит к образованию зазора между крышкой 3 и рабочей панелью 2.Устройство изготавливают иэ полимерного материала путем вакуум-формования. Для изготовления носителя субстрата (рабочих панелей 2 с ячейками4 и основания) используют жесткуюсветотехническую поливинилхлориднуюпленку белого цвета П группы, Б = ЗО0,55 мм. Для изготовления крышки 3используют прозрачную винипластовуюкаландрированную пленку марки КПС,80,5-0,7 мм. Субстраты наносят вцентры ячеек 4 в виде точки при помощи дозатора пипеточного П 1-0,02. Рабочую панель 2 с ячейками 4 помещаютв основание контейнера и закрываюткрышкой 3после чего устройство упаковывают герметично в полиэтилен. 40. Устройство используют следующимобразом.Составные части устройства моюти стернлизуют ультрафиолетом. Ячейки 4 рабочей части панели 2 заполняют различными дифференциально-диагностическими средами в жидком виде, азатем высушивают. Число ячеек 4 соответствует количеству тестов, обес-печивающих полную дифференциацию бактерий семейства кишечных, Для дифференциации предлагается испольэоватьследующие тесты: цитрат натрия, малонат натрия, цитрат натрия с глюкозой,лизин аргинин, орнитин, фенилаланин, 55индол, ацетилметилкарбонил, уреазасероводород, глюкоза, р -галактозидаза, лактоэа, маннит, сахароза, инозит, сорбит, арабиноза, мальтоза,Растворы дифференциально-диагнос" тнческих сред готовят на оснсве фосФатных буферов. В качестве основного компонента используют дифференцирующий субстрат; изменение рН среды обнаруживают при помощи индикатора.Например, для обнаружения уреазы используют в качестве субстрата мочеви" ну, индикатора - бромкреэоловый красный. Соответствующим агентом, определяющим сероводород, является тиосульфат натрия при наличии соли железа. Для обнаружения декарбоксилаз лизина, орнитина и дигидролаэы аргинина используют лизин, орнитин, арги" нин и индикатор бромтимоловой синий.Для определения ферментации углеводов (глюкозы, лактозы, маннита, сахароэы, арабинозы, мальтозы, иноэита, сорбита) используют соответствующие субстраты в присутствии индикатора фенолового красного. Субстратами для определения дезаминаэы являются такие аминокислоты, как фенилаланин и триптофан, а хромогенным р-галактоэидаэным субстратом является 0-нитрофенил-я-галактопираноэнд и твидеП р и м е р. Готовят смесь реагентов, состоящую иэ 120 г углевода и 0,85 г Фенолового красного, которую растворяют при нагревании в ", л фос-,Фатного буфера рН 8,0, Приготовленный раствор раскапывают дозаторомпипеточным по 0,02 мм в одну из ячеек 4 рабочей панели 2. Подобным же образом раскапывают и остальные растворы дифференциально-диагностических 1сред. Так заполняют все 20 ячеек 4 рабочей панели 2После чего панели 2высушивают в сушильном шкафу в течение 4 ч с дальнейшей стерилизацией ультрафиолетом в течение1 ч, Затеи панель 2 с ячейками 4помещают в контейнер, закрывают крышкой 3, эапаивают в полиэтилен и хранят. По мере надобности их используют для идентификации микроорганизмов.Для этого готовят суспензию микроор-ганизма с агаровой среды, Используюттолько свежие культуры (18-24 ч),Культуры старше 30 ч могут дать ложно-отрицательные результаты,Суспензия микроорганизмов должнаиметь точно видимую мутность и равна,по крайней мере, стандарту мутности500 млн/мл микробных тел для свежевыделенных культур, У музейных культурмогут быть обнаружены более низкие3 13202 уровни энзиматической активности, чем у свежих клинических, поэтому готовится более плотный инокулят, приблизительно равный стандарту мутности 1 млрд(мл микробных клеток. Суспензию готовят в 4 мл стерильного физиологического раствора рН 6,0+0,5. Инокуляция и инкубирование.Вскрывают упаковку. Регистрируют номер пробы и другую требуемую информацию. Открывают крышку 3 контейнера и располагают его на столе. Вынимают рабочую панель 2 и заливают воду в канавки 6 основания контейнера 1. Вставляют панель 2 с ячейками 4 в основание контейнера 1. Раскапывают пипеткой по 015 мп суспензии микроорганизма внутрь каждой реакционной ячейки 4, кроме теста на сероводород,20 где вносят только одну каплю суспен-. эии (0,05 мл), Заливают .ячейку 4 с тестом на сероводород 0,1 мл растопленного и достаточно охлажденного (до 40 С) полужидкого агара. Для соэдания анаэробных условий покрывают сверху стерильным вазелиновым маслом . ячейки с тестами: лизин, аргинин, орнитин,и сероводород (О, 1 мл - 2-3 капли) . Закрывают крышку 3 контейнера. Инкубируют 18 24 ч при С 371 1 С. После окончания инкубации открывают крышку 3 контейнера и в ячейку 4 с тестом на фенилаланиндезаминазу добавляют 1 каплю 103-ного РеС 1, в ячейку с 23 4тестом на ацетилметилкарбинол - 1 каплю 67-ного 1-нафтола и затем 1 каплю403-ного КОН, в ячейку с тестом наиндолаобразование - 1 каплю реактиваЭрлиха,Чтение реакции,Читают все реакции немедленно какположительные или отрицательные согласно с цветовыми изменениями, исклю-.чая тест на ацетилметилкарбинол.Позволяют окраситься тесту на ацетилметилкарбинол примерно в течение10 мин, затем читают. реакцию.Устройство позволяет достаточноточно идентифицировать бактерии семейства кишечных до вида, обладаетбольшой скоростью ответа, удобно впостановке, экономично, всегда готово к употреблению и не требует затрат бактериологической посуцы.Формула изобретенияУстройство для идентификации микроорганизмов, выполненное в виде кон" тейнера с крышкой и рабочей панели с ячейками, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью стабилизации влажности при культивации микроорганизмов, в контейнере выполнены продольные канавки, а дно ячеек рабочей панели выполнено в виде конусов, вершины которых расположены вдоль оси ,канавок, а крышка установлена с зазором относительно рабочей панели.1320223 Составитель С, КлыпкинРедактор И. Рыбченко Техред И,Попович Корректор Л. Пилипенко Заказ 2612/22 Тираж 499 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делаи изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5