Способ получения плазмина

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 5) 4 С 12 Й 9/6 12 Й 97 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ я чистот ия спосо- спользуют Трудовог исследов трамети 10 -1 О,0 г 4.10 иолог56) Патент США У 3136703,кл. 195-66, 1964. 10 -4 54) (,57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗМИН А тосуль 2 10 - 4 0 уте плаэми афинноген ной х адениндинукеотид восста актив нии с нагреви й с я-4 О новле ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ К А ВТОРСНОМЪГ СВИДЕТЕЛЬСТВ(21) 3751598/2 (22) 01.06,84 46) 23.08,86, (71) Белорусск Красного Знаме тельский инсти робиологии юл. Р 3 ий орден и научи ут эпид приготовления раство полученного с помо оматографии, введени торов и инкубации пр еси, о т л и ч а ю щтем, что, с целью повишецелевого продукта и упроба, в качестве активаторследующий состав, моль: М,й, , йэтилендиамиРибофлаз нилибоЖелезо закисернокислое восстанлибофеназинфатНикотин2 3 4 Железо закисное серИзобретение относится к медицине, а именно к прикладной биохимии, и может быть использовано для .поиска ингибиторон фибринолиза, определения гемостаэиологических показателейЦель изобретения - повышение чистоты целевого продукта и упрощение способа путем введения в растноры плазминогена систем генерации кислородньх радикалов и исключения дефицитного белкового активатора плазминогена - стрептокиназы.Способ осуществляют следующим образом.Готовят растворы плазминогена, вводят в них активаторы, образующие систему генерации кислородных радикалов и представляющие донор электронов и компонент с оксидазной функцией, при этом н качестве донора электронов используют Ч, Ч, М, Н -тетраметилэтилендиамин, а в качестве компонента с оксидаэной функцией - рибофлавин при следующем созтношении компонентсв, моль:1Ь 1, Н, Н, Н -тетра- метилэтилени проводят инкубацию плазминогена и системы генерации кислородных раодикалов при 15-37 С в течение 10 30 мин,1М,Н, Н, Н -Тетраметилэтилендиамин Рибофлавин Затем образец 1 инкубируют при12 С в течение 5 мин, образец 2оопри 15 С 1 О мин, образец 3 - при25 С 20 мин, образец 4 - при 37 С30 мин, образец 5 при 40 С 35 мин,После окончания инкубации по 0,03 млкаждого образца наносят на фибриновую пластину для определения прироста фибринолитической активности плаэмина,Результаты исследований сведеныв табл,1,Как видно из табл,1, введение врастворы плаэминогена системы генерации кислородных ра -чкалов увеличивает активность плазмина в образцах 25 в сравнении с образцом 1 на 380,435, 380 и ЗЗОХ соответственно. Приэтом увеличение содержания компоненКроме того, в качестве системыгенерации кислородных радикалов могут быть использонаны железо закисное сернокислое, рибофлавин и нико тинамидадениндинуклеотид восстановленный при следующем соотношении комсернокислое1 ибофлавиникотинамид- адениндинуклеотид восстановленный 4 1 О - 410или феназинметосульфат иникотинамидадениндинуклеотид восстановленныйпри следующем соотношении компонентов мольго 1 -5 Феназинметосульфат 2 10 - 4 1 О Никотинамидадениндинуклеотидвосстановленный П р и м е р 1. Готовятся пять одинаковых образцов плазминогена. В образец 1 систему генерации кислородных радикалов не вводят. В образцы 2-5 вводят систему генерации кислородных радикалов, представляющую Н, М, Н, Й -тетраметилэтилендиамин и рибофлавин при следующем соотношении компонентов, моль: 6 10 10 2 10710 4 10 8 10тов системы генерации кислородных радикалов в образце 5 по сравнению с образцом 4, а также увеличение температуры и времени не приводит к дальнейшему возрастанию активности плаэмина,45П р и м е р 2, Готовят пять одинаковых образцов плазминогена. В образец 1 систему генерации кислородных радикалов не вводят. В образцы 2-5 вводят систему генерации кислородных радикалов, представляющую железо эакисное сернокислое, рибофлавин и никотинамидадениндинуклеотид восстановленный при следующем соотношении компонентов, моль:55.о . -3 2щую феназинметосульфат и никотинамид 5 1 О 9 1 О 5 1 О,адениндннуклеотид 1 сстановленныйпри следующем соотношении компонен 4 10 4 10 1 О тов, моль; нокис 1 О лоеРибофла 4 1 О" винНикоЭ 4 5 Фенаэинтинамидадениндинуклеотид восметосульфатНикотин 21 ГГ Э 1 О 4 1 О 1 О 10 становленный амидаде 4 1 О 9 10 4 10 10 ниндинуклеотид восстановленный 2 10 3 10 410 10 Таблица 1 Параметры Образец 1 / 2 Концентрация, моль: метиленэтилен 0 210 6 1 О 1 О 2 10 8 10 диамин 1 О 7 10 4 в 10 рибофлавнноТемпература, С 25 37 40 12 15 20 30 10 Время инкубацин, мин Фибрииолитическаяактивность, усл. ед. 18,5 90,0 80,0 99,0 90,0 Дальнейшую обработку проводят аналогично примеру 1. Результаты исследований сведены в табл.2.Из табл,2 видно, что введение в15 растворы плаэминогена системы генерации кислородных радикалов увеличивает активность плазмина в образцах 2-5 в сравнении с образцом 1 на 25, 64, 64 и 413 соответственно. При этом увеличение содержания компонентов системы генерации кислородных радикалов в образце 5 в сравнении с образцом 4, а также увеличение температу 25 ры и времени не приводит к дальнейшему возрастанию активности плаэмина.П р и м е р 3. Готовят пять одинаковьм образцов плазминогена.В образец 1 систему генерации кислородных радикалов не вводят. В об разцы 2-5 вводят систему генерации кислородных радикалов, представляюДальнейшую обработку проводят аналогично примеру 1. Результаты исследований сведены в табл.З. Как видно иэ табл.З, введение врастворы плазминогена системы генерации кислородных радикалов увеличивает активность плазмина в образцах2-5 в сравнении с образцомна 18,77, 59 и 183 соответственно. Прнэтом увеличение содержания компонентов системы генерации кислородныхрадикалов в образце 5 по сравнениюс образцом 4, а также увеличениетемпературы и времени не приводит кдальнейшему возрастанию активностиплаэмина,фибринолитическаяактивность, усл.ед. 5854 5050 35,4 43,9 58,4 Таблица 3 Образец Параметры 345 0 2 1 О 3 10 4 10 10 О 2 1 О 3 10 4 ф 10 10 Температура, С 13 15 25 40 Время инкубации, мин 5 10 20 30 35 фибринолитическая активность, усл,ед. 26 39 22 35 26 Составитель М,ПознякТехред Л. Сердюкова Редактор А.Шишкина Корректор Т. Колб Заказ 4588/27 Тираж 490ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 Концентрация, моль: железо закисное сернокислое адениндинуклеотид восстановленный оТемпература, СВремя инкубации,мин Концентрация, моль: феназинметосуль 455 ат никотинамидадениндинуклеотид восста- новленный 45 37 40 30 35