Способ определения степени повреждения эритроцитов

(19) (11) 2063 1 В 500 А 61 В 100 НИЕ ИЗОБРЕТОМЪ/ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ТОРСН СПОС ВРЕЖ ора пр итроц реа гент и оп(54) (57) ОПЕНИ ПОпутем отбвзвеси эр имическимплотностиго гемолиза, отцелью повышенкачестве химичесизотонический раповреждения эрсоотношению врепациента и здорповреждении 12,ренную, а при поввыраженную сте б о ка тов,ом,ределлича Н. Пархоменко кого тво троц мени вого Новые Сборни а, Ба еждень лее -ритр цито СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК УДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Киевский ордена ТрЗнамени медицинский инА. А. Богомольца(56) Коваль Н. Н. - Вды диагностики и леченидов Алтайского мединст1974, с. 130. ПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕИЯ ЭРИТРОЦИТОВ крови, приготовления смешивания ее с хиегистрации оптической ения времени полноющийся тем, что, с очности способа, в реагента используют р мочевины, а степень итов определяют пополного гемолиза у донора, причем при ,0% определяют умеении 37,5% и бо повреждения э оИзобретение относится к медицине., в части еаолои, и жет быть использовано в ревматологии, трансфузиологии, сердечно-сосудистой хирургии и радиационной медицине.Цель изобретения - повышение точности способа путем обработки эритроцитов изотоническим раствором мочевины и дифференциации умеренной и выраженной степеней повреждения эритроцитов.Способ осуществляется следующим обраПроизводят забор венозной крови, которую стабилизируют 3,8%-ным раствором цитрата натрия. Пробу крови центрифугируют 15 мин со скоростью 1500 об/мин. Осторо)кно удаляют слои плазмы и лейкоцитов, оставпийся осадок эритроцитон разводят изотоническим раствором хлорида натрия н соотношении 1:9.Время полного гемолиза эритроцитов изучают по изменению оптической плотности раствора мочевины после добавления взвеси эритроцитов. С этой целью используется фотоэлектроколориметр Ф;.)К 56 М. Графическую регистрацию динамики процесса гемолиза осуществляют оксигемографом 036 - М, подключенным к фотоэлек троколориметру через мостовых сопротивлений РЗЗ. Определение производится при красном светофильтре фотоэлектроколориметра.В опытную кювету с рабочей гранью 5 мм вносят 2 мл 0,3 М раствора мочевины. Для обеспечения быстрого и равномерного распределения эритроцитов в кювете используется штонорообразная мешалка с рабочим шагом 2 мм и частотой вращения 600 об/мип (может быть использована любая мепалка). Вращением правого барабана фотоэлектроколориметра устапавл ивакп писчик оксигемографа в крайнем правом положении и включают лентопротяжный механизм оксигемографа со скоростьюсм/мин. В опытную кюнету быстро добавляют 0,05 мл суспензии эритроцитов в изо гоническом растворе хлорида натрия,При добавлении эритроцитов, которые являются оптически плотными частицами, оптическая плотность раствора увеличиваетсч, и писчик оксигемографа быстро отклоняется влево, однако вследствие разрупения эритроцитов в процессе гемолиза происходит постепенное падение оптической плотности раствора, которое регулируется в виде кривой. Переход кривой линии в прямую свидетельствует о полно гемолизировапии эритроцитон.Время полного гемолиза определяют на регистрирующей бумаге оксигемографа по длине отрезка АВ, где точка А отражает момент добавления эритроцитов в опытнук) кювету, а очка В являетсяцией точки перехода кривой линии в прямую на нуленуо линию.При скорости движения лентопротяжногомеханизма оксигемографа 1 см/мин времяполного гемолиза равно длине отрезкаАВх 60 с,Поскольку время полного гемолиза эритроцитов зависит от времени года, времяолпого геыолза у больных ньрждк)т в процентах по отнопению к среднему временигемолиза 3 - 5 здоровых доноров, полагая,что эритроцитарная мембрана у этих лицне изменена. Доноры обследуются параллельно с больными ежемесячно.Степень повреждения эритроцитов определяют по формуле Время полного гемоиза в ныте, с 00%= - 100% Время срелнегои о,и оо Г е м о. и 3 а здоровых лонор)в, сВремя полного гемолиза в опыте, с 00%Время срелнегополного гемолиза злоровых доноров, с. Степень поп ек сирироцптов ччи Пример /. Больной Н., 54 года, находился на стационарном лечении с диаг.нозом: острый инфаркт миокарда. Диагноз трансмурального инфаркта миокарда З 0 установлен на основании клинических данных, изменений ЗКГ, повышения активности ферментов сыворотки крови. Время гемолиза в первые сутки составило 150 с (в контроле - 177 с), степень повреждения эритроцитов составляла 15% и в динамике болезни существенно не уменьшилась. Агрегация эритроцитов и вязкость крови не увеличились, Течение заболевания было благоприятным, признаки циркуляторных расстройств не отмечались.40Пример 2. Больная Б., 61 год, находилась на стационарном лечении по поводу острого инфаркта миокарда. Диагноз инфаркта установлен на основании критериев, использованных в первом случае. Время гемолиза в 1-е сут заболевания - 90 с (в контроле - 145 с) степень повреждения эритроцитов соответственно - 38%, выраженных клинических признаков сердечной недостаточности не выявлено. Длительное время несмотря на введение наркотических анальгетиков сохранялся выраженныи болевой синдром, На 2-е сут течение заболева:.ия осложнилось истинным кардиогеннымшоком, Время гемолиза уменьшилось ло 1 мин, степень повреждения эритроци.тов - 59%, агрегация эритроцитов увеличилась на 20%, относительная вязкость крови возрасла н 1,5 раза. Г 1 ри явлениях прогрессирующей сердечной недостаточности5 1 а 15 20 25 Зо 35 40 45 50 55 не поддающейся медикаментозному лечению,больная умерла. Пример 3. Больной Г., 77 лет, находился на стационарном лечении по поводу острого инфаркта миокарда, Течение заболевания осложнилось первичной фибрилляцией желудочков, в постреанимационном периоде возникли явления отека мозга, появились признаки почечно-печеночной недостаточности. С лечебной целью больному произведен сеанс гемосорбции на активированных углях (СНК - ЗМ) со средней производительностью 120 мл/мин при общем объеме перфузии 32 л, До гемосорбции время гемолиза составило 90 с (в контроле - 135 с), степень повреждения эритроцитов - ЗЗЯ, гемоглобин 105 г/л, свободный гемоглобин не определялся. После перфузии время гемолиза уменьшилось вдвое, степень повреждения эритроцитов - 67 Я, гемоглобин составил 95 г/л, свободный гемоглобин не определялся. На 2-е сут заболевание после гемосорбции у больного появились признаки гемолитической анемии: возрос непрямой билирубин, количество гемоглобина снизилось до 80 г/г, появился свободный гемоглобин. Несмотря на проведение активной терапии при нарастающих явлениях отека мозга больной умер.Пример 4. Донор Б., 29 лет, практически здоров, степень повреждения эритроцитов 5,0 ЯПример 5. Больная П., 20 лет, с диагнозом: ревматизм, неактивная фаза, недостаточность митрального клапана. Миокардиосклероз. ХНК О. Степень повреждения эритроцитов - 10,1 Я.Пример б, Больной М 46 лет, страдающий ишимической болезнью сердца, редкими приступами стенокардии напряжения (1-й функциональный класс) на фоне атеросклероза венечных артерий сердца и атеросклеротического кардиосклероза. ХНК 0 - 1. Степень повреждения эритроцитарных мембран - 2,0 Я.Пример 7, Больная С., 52 года, в течение двух последних лет страдала редкими приступами стенокардии, которые участились и стали носить более длительный характер последние два месяца. Степень повреждения эритроцитов при поступлении - 12,5 Я. В результате проведения адекватной терапии ее удалось снизить до 6,2 Я.Пример 8. Больной Н., 42 лет, с диагнозом ИБС, гипертоническая болезнь 11 степени с частыми гипертоническими кризами. Атеросклеротическнй кардиосклероз. ХНК 2 А. Степень повреждения эритроцитов при поступлении - 25,0 Я, после проведения курса лечения - 10,4 Я.Пример 9. Больной Ш., 35 лет, болеет системной красной волчанкой, хроническое течение, 11 степень активности с поражением кожи, почек, суставов, сердца. ХНК 1, ХПН 1. Исходная степень повреждения эритроцитов - 37,0 ог. под влиянием интенсивного лечения, включая кортикостероиды, ее удалось снизить до 19,8 Я.Пример 10 Больная Я., 24 лет с выраженной застойной недостаточностью кровообращения на фоне дилатационной кардиопатии с синдромом диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови и декомпенсированным метаболическим ацидозом. В результате проведенного в клинике лечения несколько снизилась выражен- ность нарушения кровообращения, однако степень повреждения эритроцитов осталась неизменной - 37,5 Я.Пример 11. Больная К 36 лет, страдающая узелковым периартериитом высокой степени активности с поражением легких, почек, кожи, суставов, ХПН 1, ХЛН 1. С целью дезинтоксикации и уменьшения активности аутоиммунного процесса проведена операция гемсорбции. При этом степень повреждения эритроцитарных мембран увеличилась с 38,0 Я до 45,1 Я, значительно возросла концентрация свободного гемоглобина, что потребовало продолжения антикоагулянтной и назначения мембран- стабилизирующей терапии. Пример 12. Больной С 50 лет, поступил в состоянии истинного кардиогенного шока с признаками острого трансмурального инфаркта миокарда. Несмотря на применение интенсивной терапии и контра- пульсации артериальное давление стабилизировать не удалось, отмечалось повреждение эритроцитарных мембран - 66,4 О. Вследствии неэффективности проводимой терапии больной умер.Из приведенных примеров видно, что при исследовании проницаемости эритроцитарных мембран группы здоровых лиц максимальное повреждение эритроцитов - 12,4 О". Изменения в указанных границах (от 0 до 12,4 О") отмечаются также при благоприятном течении различных заболеваний,При более тяжелом течении заболеваний, сопровождающихся болевым синдромом, активацией симпатико-адреналовой, калликреинкининовой систем, системном поражении сосудистого русла, отмечается умеренное повреждение эритроцитарных мембран, что сопровождается появлением в крови свободного гемоглобина, некоторым увеличением свертывающей активности эритроцитов и сдвигами кислотно-щелочного равновесия в сторону компенсированного ацидоза или алколоза, Вместе с тем, при проведении патогенической терапии удается уменьшить степень повреждения эритроцитов до величин, наблюдаемых у больных с благоприятным течением патологических процессов и у здоровых доноров.1220 б 36 Составитель Н. Гуляева Редактор Е. Копча Техред И. Верес Корректор В. Бутяга Заказ 1506/4 Тираж 659 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д, 4/5 филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4Выраженная степень повреждения эритроцитов наблюдается при тяжелом и часто неблагоприятном течении ряда заболеваний, а также при проведении травмирующих эритроциты лечебных процедур (операция гемосорбции, контрпульсации). При этом отмечаются признаки декомпенсированного метаболического ацидоза, большая концентрация недоокисленных продуктов метаболизма, в несколько раз возрастает уровеньсвободного гемоглобина, значительно повышается свертывающая активность эритроцитов.